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广地龙药材氨基酸类成分指纹图谱研究
目的:建立广地龙药材游离氨基酸类成分的HPLC指纹图谱分析方法.方法:采用2,4-二硝基氟苯柱前衍生化法,色谱柱为Kromasil C18分析柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈(A)与N,N-二甲基甲酰胺-0.025 mol/L醋酸钠(1∶ 100,乙酸调pH 6.0)(B)为流动相,梯度洗脱,在360 nm波长下检测,柱温为40℃,流速为1.0 mL/min.结果:对15个批次的广地龙药材进行了分析,确定了18个共有峰,不同批次药材相似度均大于0.87,建立了广地龙药材氨基酸类成分的HPLC指纹图谱.结论:建立了广地龙指纹图谱检测标准,为广地龙药材的鉴别和质量控制提供了依据.
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广地龙对重金属富集特性的初步研究
目的:探讨三种重金属镉(Cd)、汞(Hg)、铅(Pb)在广地龙体内的富集特性.方法:应用半静态条件下的双箱动力学模型,将不同浓度重金属饲养过的广地龙经浓硝酸-过氧化氢低温消解处理后测定重金属含量.结果:地龙在Pb高、中、低浓度的富集速率分别为k1=1.232,K2=1.325,K3=1.058;对Cd的高、中、低浓度富集速率分别为k1=0.1792,K2=0.1753,K3=0.1382;对Hg的富集呈现出波动性.结论:广地龙从土壤中富集Pb的能力明显高于Cd,且随着时间的推移而增大;对Hg的富集作用是先快速吸收,积累到一定浓度时,再快速排出,而后再度吸收.
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高效毛细管电泳法测定广地龙饮片中琥珀酸的含量
目的 测定广地龙饮片中琥珀酸的含量.方法 采用高效毛细管电泳法,以未涂层融硅毛细管(50 cm×75 μm)为分离柱,1 mmol/L三(羟甲基)氨基甲烷-10 mmol/L H3BO3-0.5%四乙烯五胺-0.025 mmol/L溴化十六烷基三甲胺(pH=11.45)体系为电泳介质,采用重力进样,进样时间15 s,进样高度20 cm,分离电压10 kV.结果 该方法 的线性范围为5.00～80.00 μg/mL,平均回收率为98.41%,RSD=2.21% (n=9 ),广地龙饮片(产地:广西)中的琥珀酸含量为0.8 mg/g.结论 方法 可行,重现性好,能有效地控制广地龙饮片的质量.
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广地龙特异性PCR分子鉴定
【目的】筛选出对广地龙具有特异性鉴别意义的PCR引物，建立一种快速、准确鉴别广地龙基原真实性的方法。【方法】收集药典收载的4种地龙原动物以及市场常见地龙混淆品6种，从GenBank数据库中下载有关蚯蚓的12SrRNA基因序列，采用通用引物对10种样本PCR扩增后进行测序，依其序列间差异设计3对非保守区特异性引物，筛选对广地龙具有特异性扩增的引物。【结果】引物12St/12Sf对广地龙产生特异性扩增，当退火温度提升至64℃时，其反应表现出高度特异性，仅广地龙具有良好的单一扩增带，而其他样品在同样的条件下无扩增带。所得特异性引物在15种市售广地龙药材中验证结果良好，与传统形态学鉴定结果基本一致。【结论】引物12St/12Sf可作为广地龙物种鉴定的特异性标记物，可以实现广地龙近缘多个物种快速而又准确的鉴定，且不受实验材料的完整性、加工干燥等因素的影响。
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地龙的研究进展
地龙为环节动物门钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima as-pergilum(E.Perrier)、通俗环毛蚓P.vulgaris Chen、威廉环毛蚓P.guillelmi(Michaelsen)或栉肓毛蚓P.pectinifera Michaelsen的干燥体.前一种习称"广地龙",后三种习称"泸地龙",主产于广西、广东、福建.性寒,味咸.
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地龙的HPLC特征图谱研究
目的：建立地龙的高效液相色谱（HPLC）特征图谱，比较广地龙与沪地龙的主要成分含量差异以及地龙与3种其他动物药的图谱差异。方法：采用地龙HPLC特征图谱法，测定了16份广地龙、8份沪地龙、3份土鳖虫、3份水蛭与3份蜣螂虫的特征图谱，采用相似度评价与t检验对这5种动物药的图谱数据进行差异分析。结果：本研究建立了地龙药材的HPLC特征图谱法，首次指认了11个共有特征峰，包括6个核苷、4个核碱基与1个氨基酸；建立的HPLC特征图谱法可以将地龙与土鳖虫、水蛭及蜣螂虫区分开来；首次对广地龙与沪地龙HPLC特征图谱中主要成分的含量差异进行了研究，其中广地龙中黄嘌呤及腺苷含量高于沪地龙，沪地龙中尿苷、鸟苷及2′-脱氧鸟苷含量高于广地龙，并据此计算出5种成分的峰面积比值新指标S，S值可用于区分2种地龙。结论：该特征图谱可用于地龙药材的鉴别，且可为广地龙与沪地龙的药效学差异研究提供参考。
