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p53及其凋亡刺激蛋白对结肠癌细胞自噬和凋亡影响机制探讨
目的 探讨p53、p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating protein 2 of p53,ASPP2)及异构体△ASPP2在p53缺陷结肠癌细胞系HCT116-/-细胞中对自噬及凋亡的影响.方法 实验分为对照组、MMS组、MMS+ p53组、MMS+ASPP2+ p53组、MMS+ △ASPP2+ p53组和MMS+ ASPP2+△ASPP2+ p53组.应用ASPP2、△ASPP2及p53质粒转染HCT116-细胞,同时转染绿色荧光GFP-LC3质粒于各组细胞中,经甲基磺酸(MMS)处理后用荧光显微镜观察细胞自噬水平,蛋白质印迹法检测各组细胞自噬及凋亡相关蛋白表达水平,Calcein AM/PI染色检测细胞凋亡水平.结果 自噬水平对照组为(0.63±0.14)％,MMS组为(10.48±0.58)％,MMS+ p53组为(5.45±0.41)％,MMS+ ASPP2+p53组为(3.43±0.35)％,MMS+ △ASPP2+ p53组为(14.84±0.64)％,MMS+ ASPP2+ △ASPP2+ p53组为(12.29±0.58)％,差异有统计学意义,F=1 182.364,P＜0.001;与MMS组比较,MMS+ p53组和MMS+ ASPP2+ p53组自噬水平下降,P值均＜0.001;与MMS+ p53组相比,MMS+ ASPP2+ p53组自噬水平降低,P＜0.001;MMS+△ASPP2+p53组自噬水平较MMS+ p53处理组增加,P＜0.001;MMS+ ASPP2+△ASPP2+ p53组自噬水平较MMS+ ASPP2+p53组增加,P＜0.001.凋亡率比较,对照组为(2.09±0.54)％,MMS组为(16.79±0.69)％,MMS+p53组为(33.70±1.16)％,MMS+ ASPP2+ p53组为(50.61±1.17)％,MMS+△ASPP2+ p53组为(21.32±1.18)％,MMS+ ASPP2+△ASPP2+ p53组为(35.22±1.06)％,差异有统计学意义,F=2 571.942,P＜0.001;MMS+ p53和MMS+ ASPP2+ p53组凋亡较MMS组增加,P值均＜0.001;与MMS+p53组相比,MMS+ ASPP2+ p53组凋亡增加,P＜0.001;MMS+△ASPP2+ p53组凋亡较MMS+ p53组减少,P＜0.001;MMS+ ASPP2+△ASPP2+ p53组凋亡较MMS+ ASPP2+ p53组也有所降低,P＜0.001.结论 ASPP2能够增强p53的自噬抑制作用,并增强p53促细胞凋亡作用,△ASPP2能够抑制ASPP2与p53的功能,具有促进细胞自噬,抑制细胞凋亡的作用.
关键词： P53 p53凋亡刺激蛋白2 ASPP异构体 自噬 细胞凋亡 -
ASPP2在人肝星状细胞活化中的作用
目的 探讨p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis-stimulating protein of p53-2,ASPP2)对人肝星状细胞活化的调节作用及机制.方法 人永生的肝星状细胞系LX-2在孵箱中培养,转染ASPP2腺病毒和单荧光自噬指示体系(GFP-LC3)质粒,免疫印迹法检测ASPP2、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、自噬基因表达相关蛋白(Beclin-1)的表达水平.免疫荧光检测,LX-2细胞共转染ASPP2腺病毒和GFP-LC3质粒后,ASPP2过表达对LX-2细胞自噬的影响,M30染色检测ASPP2过表达对LX-2细胞凋亡的影响.结果 转染ASPP2腺病毒后LX-2细胞内ASPP2蛋白表达明显增加;与转染对照空载腺病毒的LX-2细胞相比,转染ASPP2腺病毒的LX-2细胞自噬和α-SMA的表达明显减少,肝星状细胞的活化受到抑制;转染ASPP2腺病毒后LX-2细胞的凋亡水平增加明显.结论 ASPP2过表达在体外具有抑制肝星状细胞活化的作用.
关键词： p53凋亡刺激蛋白2 肝星状细胞 自噬 -
p53凋亡刺激蛋白2与肿瘤细胞的自噬和凋亡
p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)是ASPP家族的一个重要成员,能够通过对细胞促凋亡靶基因转录的调节来促进细胞的凋亡.另外,ASPP2与自噬也具有一定的关系,它能通过提高p53通路介导的自噬来诱发肿瘤细胞凋亡增加,从而达到抑制和杀灭肿瘤的作用.在肝癌细胞中,ASPP2过表达可增强p53诱导的自噬调节蛋白(DRAM)介导的自噬对肝癌细胞的促凋亡作用.DRAM的发现使p53与自噬之间建立了联系,也进一步丰富了ASPP2的功能机制,这也为肿瘤的基因治疗提供了新的思路.
关键词： 肿瘤 p53凋亡刺激蛋白2 自噬 细胞凋亡 -
P53凋亡刺激蛋白2在gp120诱导的神经细胞凋亡中的作用
目的 研究P53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)在人类免疫缺陷病毒外膜糖蛋白(gp120)诱导的神经细胞凋亡中的作用.方法 体外培养小鼠大脑皮质神经细胞,给予gp120处理,免疫荧光技术检测P53和ASPP2在细胞内的表达与分布,蛋白印迹法检测活性caspase-3表达情况,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测神经细胞凋亡.分析gp120对神经细胞内P53、ASPP2表达影响,微小RNA干扰技术反向验证ASPP2的作用.结果 gp120处理前,神经细胞内无P53表达,ASPP2表达在细胞浆中;gp120处理后,神经细胞出现P53表达并定位于细胞核,部分ASPP2由细胞浆移位到细胞核,与P53定位于同一部位.gp120处理前,caspase-3无活性,神经细胞凋亡率为5%,gp120处理后caspase-3被激活,神经细胞凋亡率为50%,微小RNA干扰ASPP2表达后,神经细胞凋亡率由50%降低到15%.结论 ASPP2参与了gp120诱导的经P53介导的神经细胞凋亡.
关键词： 获得性免疫缺陷综合征 人类免疫缺陷病毒 外膜糖蛋白 p53凋亡刺激蛋白2 细胞凋亡 神经元 -
p53凋亡刺激蛋白2对饥饿诱导的大肠癌HCT116 p53+/+细胞凋亡、周期和自噬的影响
目的 探讨p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)对饥饿诱导的大肠癌HCT116 p53+/+(p53野生型)细胞凋亡、周期和自噬的影响.方法 实验分6组:①对照组；②绿色荧光蛋白腺病毒(rAd-GFP)感染组；③ASPP2腺病毒(rAd-ASPP2)感染组；④饥饿处理组；⑤rAd-GFP+饥饿组；⑥rAd-ASPP2+饥饿组.利用rAd-ASPP2感染使细胞过表达ASPP2基因.无血清培养基培养24h诱导凋亡、自噬和细胞周期改变.钙黄绿素(Calcein)/碘化丙啶(PI)吸收试验观察各组细胞调亡水平.细胞转染红色荧光蛋白标记的CFP-Lc3自噬质粒,荧光显微镜下观察各组细胞自噬水平.流式细胞术观察细胞周期改变.组间比较采用单因素方差分析进行统计学分析.结果 ASPP2过表达显著促进了饥饿诱导的细胞凋亡、自噬及G2-M期阻滞,各组细胞的凋亡率为:rAd-GFP+饥饿组10.00％±1.42％,rAd-ASPP2+饥饿组18.44％ ±2.06％(q=9.548,P=0.000)；各组细胞的自噬发生率为:rAd-GFP+饥饿组35.00％±5.34％,rAd-ASPP2+饥饿组57.61％ ±6.06％(q=7.657,P=0.000).但无饥饿诱导时ASPP2过表达使G0-G1、G2-M期都发生阻滞.结论 ASPP2过表达促进饥饿诱导的大肠癌HCT116 p53+/+细胞凋亡和自噬,显著改变细胞周期进程.
关键词： 细胞凋亡 细胞周期 自噬 p53凋亡刺激蛋白2 -
ASPP2,iASPP和p53在宫颈癌组织中的表达及意义
目的:探讨p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating proteins of p53 2,ASPP2)、ASPP家族抑制成员(inhibitory memberof the ASPP family,iASPP)在宫颈癌发生中的意义及其与p53的关系.方法:采用免疫组织化学法检测ASPP2,iASPP,p53在51例早期宫颈癌、53例子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅱ～Ⅲ期、48例CIN Ⅰ期及45例正常宫颈组织中的表达,分析ASPP2,iASPP与p53的相互关系.结果:p53阴性时,ASPP2在官颈癌组、CIN Ⅱ～Ⅲ组、CIN Ⅰ组、正常宫颈组中的阳性表达率逐渐升高,且CIN Ⅱ～Ⅲ组、宫颈癌组与正常宫颈组比较差异有统计学意义(P＜0.05),余各组两两比较差异无统计学意义(P＞0.05);iASPP在宫颈癌组、CIN Ⅱ～Ⅲ组、CIN Ⅰ组、正常宫颈组中的阳性表达率逐渐降低,且宫颈癌组与正常官颈组比较,差异有统计学意义(P＜o.05),余各组两两比较差异无统计学意义(P＞o.05).p53阳性时,ASPP2和iASPP在各组中的表达差异均无统计学意义(P＞o.05).结论:ASPP2和iASPP可能通过调节野生型p53诱导细胞凋亡的能力参与早期宫颈癌的发生,ASPP2和iASPP可能成为治疗宫颈癌潜在的分子靶点.
关键词： 宫颈癌 p53凋亡刺激蛋白2 ASPP家族抑制成员 P53 免疫组织化学 -
老年大鼠肾脏损伤中ASPP2蛋白调控与内质网应激的作用及相关性分析
目的 探讨P53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族成员ASPP2蛋白及内质网应激在老年大鼠肾脏损伤中的作用机制.方法 以6月龄SD大鼠为成年组,18月龄SD大鼠为老年组,苏木精-伊红染色(HE)观察各组大鼠肾脏结构的改变;qRT-PCR检测内质网应激相关指标C/EPB同源蛋白(CHOP)、活化转录因子6(ATF6)、X盒结合蛋白-1(XBP-1)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的mRNA表达水平;Western blot法检测各组大鼠ASPP2蛋白的表达水平,并对ASPP2的表达水平与内质网应激相关指标CHOP、ATF6、XBP-1、GRP78的表达水平作相关性分析.结果 与成年组SD大鼠相比,老年组SD大鼠肾脏结构明显改变,CHOP、ATF6、XBP-1、GRP78的mRNA表达水平及ASPP2蛋白表达水平显著增高,且ASPP2水平与CHOP和XBP-1呈正相关,ASPP2水平与ATF6呈负相关.结论 在老年SD大鼠中,ASPP2调控内质网应激可能是引起肾脏损伤的重要机制之一.
关键词： p53凋亡刺激蛋白2 内质网应激 老年大鼠 肾脏 -
ASPP2 DNA甲基化在老年大鼠肾脏基底膜增厚中的作用
目的:探讨p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2) DNA甲基化在老年大鼠肾基脏底膜增厚中的作用和机制.方法:以6月龄大鼠为成年组,18月龄大鼠为老年组,应用过碘酸希夫(PAS)染色,光镜下观察各组大鼠肾脏基底膜改变,qRT-PCR、Westem-blot分别检测各组大鼠ASPP2 mRNA及蛋白表达,nMS-PCR法检测ASPP2甲基化水平,qRT-PCR检测DNMT1 mRNA表达改变.结果:老年大鼠较成年大鼠肾脏基底膜明显增厚,ASPP2 mRNA及蛋白的表达在老年组大鼠中显著增高(P＜0.01);与成年组相比,老年组ASPP2 DNA甲基化水平显著下降(P＜ 0.01),且DNMT1 mRNA及蛋白表达也呈下降改变(P＜0.01).结论:ASPP2 DNA甲基化是促进老年大鼠肾脏基底膜增厚的重要机制,DNMT1参与了其调控.
关键词： p53凋亡刺激蛋白2 DNA甲基化 老年大鼠 肾脏 -
p53凋亡刺激蛋白2在食管鳞癌组织及食管癌EC109细胞中的表达及意义
目的 研究ASPP2在食管鳞癌(ESCC)组织及人食管癌EC109细胞中的表达及其意义.方法 采用SP免疫组化染色法及TUNEL染色法检测42例ESCC及13例正常食管黏膜组织ASPP2蛋白的表达和细胞的凋亡情况,分析ESCC中细胞的凋亡阳性率与ASPP2表达的相关性;采用免疫荧光染色法检测人食管癌EC109细胞中ASPP2蛋白的分布;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测经顺铂(cisplatin,CDDP)干预后的实验组及未干预的对照组细胞ASPP2mRNA的表达情况.结果 ASPP2蛋白在ESCC和正常食管黏膜组织的阳性率分别为52.4％(22/42)及84.6％(11/13),差异具有统计学意义(x2=4.298,P=0.038);凋亡阳性率在ESCC及正常食管黏膜分别为54.8％(23/42)和7.7％(1/13),差异有统计学意义(x2=8.943,P=0.003).在ESCC中,凋亡阳性率与ASPP2的表达呈正相关(r=0.666,P＜0.01).免疫荧光染色结果显示,ASPP2蛋白主要分布于EC109细胞的胞核及胞质中.经CDDP干预后,ASPP2 mRNA的相对表达是对照组的3.6倍(t=3.220,P=0.005).结论 ASPP2异常表达与食管癌的发生发展、增殖凋亡密切相关,可作为理想的肿瘤标志物,用于辅助ESCC诊断并指导临床治疗.
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p53凋亡刺激蛋白2抑制奥沙利铂诱导的结肠癌细胞自噬并促进凋亡
目的 研究p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2) p53依赖以及非依赖的自噬抑制作用,在提高奥沙利铂(OXA)促细胞凋亡中的作用.方法 HCT116(p53-/-)细胞分为雷帕霉素(rapamycin)联合ASPP2组、ASPP2组、p53组、ASPP2联合p53组、3-甲基嘌呤(3-MA)组、对照组(OXA或单独饥饿处理)6组.凋亡检测时添加单独空病毒(GFP-Ad)组、rapamycin组作为对照.各组细胞转染绿色荧光蛋白微管相关蛋白1轻链3(GFP-LC3)质粒,在荧光显微镜下观察并计数LC3阳性细胞数;Westemblot法检测各组自噬相关分子表达水平;annexinV-FITC/PI双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡水平.结果 3-MA处理组与ASPP2处理组具有相同的自噬抑制作用,且能够促进OXA或饥诱导的细胞凋亡,但促凋亡作用低于ASPP2组;rapamycin联合ASPP2处理能够有效抵消ASPP2的自噬抑制作用,但仍具有促进OXA或饥饿诱导的细胞凋亡,且促凋亡作用同样低于ASPP2组.结论 OXA增强结肠癌细胞自噬,而ASPP2过表达能够抑制OXA的自噬诱导作用;ASPP2能够通过P53依赖以及P53非依赖途径促进细胞凋亡;ASPP2通过p53依赖以及p53非依赖途径所引起的促细胞凋亡并非完全通过抑制自噬来实现.
关键词： 结肠癌 自噬 p53凋亡刺激蛋白2 P53 细胞凋亡 -
p53凋亡刺激蛋白2和β-连环蛋白在牙龈鳞状细胞癌中的表达及临床意义
目的 研究p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)和β-连环蛋白在牙龈鳞状细胞癌(GSCC)组织中的表达及临床意义.方法 采用免疫组织化学染色法检测22例GSCC组织切片中癌组织和癌旁组织ASPP2及β-连环蛋白的表达,以及ASPP2和B-连环蛋白的表达与临床病理特征之间的关系.结果 在GSCC组织中,ASPP2阳性表达率低于癌旁组织,B-连环蛋白阳性表达率高于癌旁组织(P＜ 0.05);ASPP2的表达与肿瘤病理分级有相关性,β-连环蛋白的表达与TNM分期有相关性(P＜ 0.05);ASPP2和β-连环蛋白的表达呈负相关(r=-0.492,P＜0.05).结论 联合检测ASPP2和β-连环蛋白在GSCC组织中的表达,可作为判断GSCC恶性程度和预后的参考指标.
关键词： 牙龈鳞状细胞癌 p53凋亡刺激蛋白2 β-连环蛋白 免疫组织化学染色 -
p53凋亡刺激蛋白2在HepG2.215细胞中通过抑制自噬来发挥抗乙型肝炎病毒的作用
目的 研究p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating protein 2 of p53,ASPP2)对乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)和乙型肝炎E抗原(hepatitis Be antigen,HBeAg)表达的影响.方法 HepG2.215细胞用3-甲基腺嘌呤处理来抑制自噬,或用人ASPP2重组腺病毒感染来诱导ASPP2过表达,或转染GFP-LC3质粒后观察绿色LC3-Ⅱ颗粒(自噬标志物)的变化.酶联免疫吸附测定检测培养上清和胞内HBsAg和HBeAg的水平、免疫荧光检测LC3-Ⅱ颗粒的水平、免疫印记检测自噬相关蛋白的水平、免疫沉淀检测ASPP2与自噬相关蛋白的结合.结果 ASPP2过表达明显下调了绿色LC3-Ⅱ颗粒的水平和LC3-Ⅱ/Ⅰ比例、以及明显上调p62的水平,说明ASPP2过表达可抑制HepG2.215细胞的自噬.但是ASPP2并非通过抑制Atg5、Atg14和Beclin-1等自噬相关基因的表达来抑制自噬,而是通过与Atg14结合来抑制Atg14与Beclin-1的结合,阻断自噬体膜的形成,从而抑制自噬.抑制自噬和ASPP2过表达均导致培养上清和细胞内的HBsAg和HBeAg水平明显下调,表明在Hep2.215中,ASPP2通过抑制自噬来抑制HBsAg和HBeAg的产生.结论ASPP2通过抑制自噬的作用具有抗乙型肝炎病毒感染的潜力.
关键词： p53凋亡刺激蛋白2 乙型肝炎病毒 自噬 -
p53凋亡刺激蛋白2通过稳定β-catenin-E-cadherin复合体抑制骨肉细胞转移
目的 探讨p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)对骨肉瘤细胞转移的影响及其机制.方法 Q-PCR检测骨肉瘤组织和细胞中ASPP2 mRNA的表达;western blot检测骨肉瘤细胞中ASPP2蛋白表达;transwell检测细胞转移能力;co-IP实验检测β-catenin和E-cadherin相互作用水平;免疫荧光检测β-catenin在细胞核中表达水平.结果8例手术标本Q-PCR检测发现,骨肉瘤组织中ASPP2 mRNA的表达较癌旁组织明显降低;4株骨肉瘤细胞系中(OS187、SAOS2、HOS和MG63)ASPP2 mRNA和蛋白的表达较正常成骨细胞明显减少.过表达ASPP2蛋白的SAOS2其转移能力明显减弱,同时β-catenin和E-cadherin相互作用水平增加,而β-catenin核转位减少.结论ASPP2可以减少骨肉瘤细胞SAOS2的转移,其机制可能的通过稳定β-catenin-E-cadherin复合体,抑制β3-catenin核转位.
