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香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414对人肺癌细胞A549凋亡作用及其机制的研究
目的:研究香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414对人肺癌细胞A549的凋亡诱导作用,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的机制.方法:将用毕赤酵母GS115体系进行诱导表达并已鉴定的香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414作用于人肺癌细胞A549,用MTT法测定目的蛋白的抑瘤率,用流式细胞术检测目的蛋白对肿瘤细胞的诱导凋亡作用,用ELISA法测定目的蛋白对肿瘤细胞Caspase-3活性的影响,同时用MTT法检测目的蛋白对正常鸡胚成纤维细胞的毒性作用.结果:流式细胞术与MTT法检测结果显示,终浓度为7.5、15和30 μg/mL的此蛋白对A549细胞凋亡作用与对照组比较差异有统计学意义.ELISA法检测结果显示以上浓度的此蛋白对A549细胞Caspase-3活性影响与对照组相比较差异也有显著性意义(7.5 μg/mL组vs对照组:t=8.787,P=0.000；15 μg/mL组vs对照组:t=13.429,P=0.000；30 μg/mL组vs对照组:t=36.908,P=0.000).同时此蛋白对正常鸡胚成纤维细胞无毒性作用.结论:香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414在对正常鸡胚成纤维细胞无毒性作用的同时对人肺癌细胞A549具有诱导凋亡作用,其凋亡途径可能通过Caspase-3通路.
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常吃香菇防百病
香菇是具有高蛋白、低脂肪、多糖、多种氨基酸和多种维生素的菌类食物.其鲜嫩爽口,香气宜人,营养丰富,被民间称为“山珍之王”.人们如此喜爱香菇,是因为香菇具有特殊的药用价值.防癌抗癌:香菇菌盖部分含有双链结构的核糖核酸,进入人体后,会产生具有抗癌作用的干扰素.
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香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414在毕赤酵母GS115中的表达与鉴定
目的 通过构建毕赤酵母表达载体将香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414在毕赤酵母GS115中进行表达,同时对表达产物进行鉴定.方法 从香菇菌C91-3菌丝体中提取总RNA,根据转录组测序结果,用3'-Full RACE、5'-Full RACE方法获得24414基因,并将其克隆到毕赤酵母的表达载体pPIC9K中,构建真核重组表达质粒pPIC9K-24414.用电转化的方法将此质粒转化到毕赤酵母GS115中并进行诱导表达,对表达产物用Westen-blot方法进行鉴定.结果 通过菌落PCR和基因序列分析确定插入pPIC9K中的片段为24414基因片段,通过Westen-blot方法确定所表达蛋白为目的蛋白.结论 重组质粒pPIC9K-24414成功构建,目的凋亡相关蛋白24414在毕赤酵母GS115中成功表达,为进一步研究香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414的生物学功能奠定了基础.
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香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414对小鼠肝癌细胞Hca生物学功能的影响
[目的]通过诱导表达香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414,研究其对小鼠肝癌细胞Hca的生物学功能影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的机制.[方法]构建真核重组表达质粒pPIC9K-24414,用毕赤酵母GS115体系进行诱导表达,将已鉴定的诱导表达蛋白作用于小鼠肝癌细胞Hea,用MTT法测定不同浓度目的蛋白组、顺铂(DDP)组及空白对照组的抑瘤率,用流式细胞术检测目的蛋白对肿瘤细胞的凋亡作用,同时用MTT法检测目的蛋白对正常鸡胚成纤维细胞的毒性作用.[结果] Western-blot结果显示目的蛋白成功表达；MTT法检测结果显示,不同浓度此蛋白对Hca细胞的生长抑制作用(OD595)与对照组比较差异均有显著性意义(P＜0.05),7.5 μg/mL、15 μg/mL和30μg/mL目的蛋白的大抑瘤率分别为70.03％、82.02％和74.66％,均超过5μg/mL DDP的作用；流式细胞术结果显示,此蛋白具有诱导Hca细胞凋亡的能力,早晚双期细胞凋亡诱导率与对照组比较差异均有显著性意义(P＜0.05),浓度为30 μg/mL时诱导凋亡的作用强,早晚两期凋亡率分别为(9.28±0.04)％和(9.37±0.03)％;同时此蛋白对正常细胞无毒性作用.[结论]香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414在毕赤酵母GSll5中成功诱导表达,此蛋白对小鼠肝癌细胞Hca生长具有抑制作用,能够诱导其产生凋亡,为进一步深入研究香菇菌C91-3的抗肿瘤机制奠定了基础.
