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氟尿嘧啶联合环靶明对结肠癌治疗作用研究
目的:探讨5氟尿嘧啶(5 FU)联合Hh信号通路拮抗剂环靶明对结肠癌的治疗作用.方法:MTT法检测5-FU联合环靶明对结肠癌C26细胞的增殖抑制情况;流式细胞术检测给药后肿瘤细胞凋亡.通过构建体外肿瘤球模型观察给药后肿瘤的生长情况,模拟给药后药物在体内对肿瘤生长的抑制能力.建立结肠癌小鼠移植瘤模型,随机分为生理盐水组、5-FU干预组、环靶明干预组和5 FU联合环靶明干预组.每天分别用设定浓度的生理盐水、5-FU、环靶明和5-FU+环靶明对移植瘤小鼠腹腔内注射给药,观察给药过程中瘤体积和体质量的变化,计算抑瘤率.结果:C26结肠癌细胞给药72 h后,生理盐水组肿瘤细胞生存率为97％,5-FU干预组47％,环靶明干预组64％,联合干预组22％,5-FU(P=0.006)、环靶明(P=0.006)和联合干预组(P＜0.001)与生理盐水组比较,差异有统计学意义,3个干预组之间有交互效应,P=0.007.肿瘤球给药7d后5-FU干预组肿瘤体积减小到原体积的74％,环靶明干预组89％,联合干预组43％,生理盐水组肿瘤体积增大1.46倍,5-FU(P=0.006)、环靶明(P=0.006)和联合干预组(P＜0.001)与生理盐水组比较,差异有统计学意义,3个干预组之间有交互效应,P=0.006.5-FU干预组诱导肿瘤细胞凋亡率10.8％,环靶明干预组6.77％,联合干预组32.2％,而生理盐水组早期凋亡率为0.14％,5-FU(P=0.001)、环靶明(P＜o.001)和联合干预组(P＜0.001)与生理盐水组比较,差异有统计学意义,3个干预组之间有交互效应,P=0.005.荷瘤小鼠实验结果显示,生理盐水组小鼠肿瘤体积增至给药前的2.6倍,环靶明干预组2.1倍,5-FU干预组1.5倍,而联合干预组肿瘤体积仅增至原体积的1.2倍,5-FU(P=0.006)、环靶明(P=0.005)和联合干预组(P＜0.001)与生理盐水组比较,差异有统计学意义,3个干预组之间有交互作用,P=0.006.结论:5-FU与环靶明均具有抗结肠癌细胞的作用,两者联合应用有协同作用.
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胃癌细胞系SGC-7901中WNT和HH信号通路相互关系的研究
目的 研究胃癌细胞中WNT & HH 信号通路的内在性关系.方法 用RT-PCR 方法分别检测不同浓度(50 μmol/L,75 μmol/L,100 μmol/L)环靶明干预的胃癌细胞(SGC-7901)24 h后的β-cantenin mRNA、Gli1 mRNA、Sfrp1 mRNA 的表达.结果 1、胃癌细胞梭型贴壁生长,染色质分布均匀,细胞膜完整;2、环靶明干预胃癌细胞后,胃癌细胞的生长明显抑制.Gli1 mRNA的表达呈抑制浓度依赖型,Sfrp1 mRNA 的表达随Gli1 mRNA 的表达减少而加强,β-cantenin mRNA 的表达随Sfrp1 mRNA的表达增加而减少.结论 Gli1 mRNA和Sfrp1 mRNA之间有关联性.
关键词： 环靶明 SGC-7901 Gli1 β-cantenin SFRP1 -
阻断Hedgehog通路可抑制骨肉瘤mg63细胞的生长
目的：研究Hedgehog通路特异性阻断药物环靶明（cyclopamine）对人骨肉瘤细胞株mg63增殖与凋亡的影响。方法 MTT法检测环靶明对骨肉瘤mg63细胞增殖的抑制作用，流式细胞术检测细胞凋亡，PT-PCR检测环靶明处理前后Gli1、PTCH1 mRNA的表达量的变化。结果环靶明抑制mg63细胞的增殖，并呈时间和剂量依赖性。经5、10、20μmol/L的环靶明处理48 h后，骨肉瘤mg63细胞的凋亡率逐渐增高，明显高于对照组的凋亡率（P＜0.01）。Gli1、PTCH1mRNA在mg63中的表达实验组均低于对照组。结论 Hedgehog通路特异性阻断药物环靶明能够抑制骨肉瘤mg63细胞的增殖，促进其凋亡。
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Hedgehog 信号通路对某些消化道肿瘤细胞生长的调节作用
目的:研究Hedgehog信号通路成员Shh、patched(PTCH)、smoothened (Smo)和Gli-1在结肠癌和胰腺癌细胞株以及人结肠腺瘤组织细胞中的表达情况,并探讨Smo受体特异性小分子抑制剂环靶明(cyclopamine)对这些肿瘤细胞生长的影响.方法: 体外培养结肠癌细胞LS174T、HCT116、SW116、CT26和胰腺癌细胞BxPC3,并肠镜下摘取2例结肠腺瘤组织标本,提取细胞株和腺瘤组织总RNA,用RT-PCR扩增Shh, PTCH, Smo, Gli-1基因;使用MTT法检测环靶明在体外对这些肿瘤细胞生长的抑制作用.结果: 在SW116、 CT-26、 BxPC3细胞和2例结肠腺瘤组织中Shh、PTCH、Smo和Gli-1均有不同程度的表达, 而在HCT116和LS174T细胞中未能扩增出PTCH和(或)Smo基因的mRNA; 环靶明对这些肿瘤细胞的生长有一定的抑制作用,且对Smo基因阳性表达细胞株的抑制作用更显著.结论: Hedgehog信号通路成员Shh、PTCH、Smo和Gli-1在结肠癌、胰腺癌及结肠腺瘤细胞中有不同程度的表达,环靶明对Smo高表达细胞的生长有明显抑制作用;提示该信号通路可能在部分消化道肿瘤细胞中被活化.
关键词： 结肠肿瘤 胰腺肿瘤 Hedgehog信号通路 环靶明 肿瘤抑制 -
环靶明对肝再生影响的蛋白组学研究
目的 研究环靶明对肝再生的影响,并探讨其可能的分子作用机制.方法 应用8标同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)技术,结合二维液相色谱串联质谱(two-dimensional liquid chromatography-tandem mass spectrometry,2D LC-MS/MS)系统,以部分肝切除的大鼠为模型,全面分析了再生早期(12 h)环靶明干预组,肝脏蛋白质的表达差异.结果 共鉴定1625种蛋白质,其中肝再生组有367种蛋白质的表达量与对照组(手术切下的正常肝组织)有显著差异,差异蛋白通路分析基因本体(gene ontology,GO)显示hedgehog(HH)信号通路激活,在肝再生过程中作用显著,其中的S H H、Gli2蛋白可能通过影响细胞凋亡和能量供给等方式参与肝再生调控,而环靶明干预组中这一通路未被激化,关键蛋白S H H,Gli2蛋白表达量下调.结论 环靶明通过抑制H H信号通路中关键蛋白的表达影响肝再生,HH信号通路在肝细胞再生过程中具有重要作用.
关键词： 环靶明 肝损伤与肝再生 Hedgehog(Hh)信号通路 iTRAQ -
环靶明联合吉非替尼对前列腺癌细胞株DU145增殖和侵袭的影响
目的：检测经环靶明与吉非替尼联合作用后前列腺癌DU145细胞生物学行为的变化，并探讨相关作用机制。方法前列腺癌DU145细胞经不同药物分组处理24 h后，采用MTT法和Transwell小室法检测细胞增殖及侵袭能力的改变；Western blot检测细胞中SHH、PTCH和Gli-1蛋白表达水平的变化。结果联合用药组细胞吸光度值(0.3842±0.0518)明显低于环靶明组(0.6839±0.0989)(t=4.6487，P=0.001)和吉非替尼组(0.7726±0.1474)(t=6.0245，P<0.01)，其平均穿膜细胞数(28.3333±3.3863)少于环靶明组(39.5000±5.6480，t=3.0677，P=0.036)和吉非替尼组(41.1667±6.3377)，(t=3.5256，P=0.013)，各实验中药物处理组与空白对照组间的差异均有统计学意义(P<0.01)；环靶明组及联合用药组各通路蛋白的表达均低于空白对照组(P<0.01)，吉非替尼组仅PTCH蛋白表达(0.7531±0.1287)低于空白对照组(1.1112±0.1157)(t=4.1495，P=0.019)，联合用药组的PTCH蛋白表达(0.3601±0.0900)低于环靶明组(0.6767±0.0815)(t=3.6686，P=0.038)和吉非替尼组(0.7531±0.1287)(t=4.5539，P=0.011)。结论环靶明联合吉非替尼较单独用药明显增强了对前列腺癌细胞增殖和侵袭的抑制作用，其机制可能与吉非替尼协同环靶明下调Hedgehog通路的PTCH蛋白表达有关。
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环靶明在体内及体外可抑制人胶质母细胞瘤A172细胞的生长
目的 研究Hedgehog信号通路特异性阻断剂环靶明(cyclopamine)在体内及体外对人胶质母细胞瘤A172细胞生长的影响.方法 用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测环靶明对A172细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测环靶明处理前后Smoothened蛋白(Smoothened,SMO)、GLI家族锌指蛋白1(GLI-Kruppel family member 1,GLI1)在A172中的mRNA表达及变化,免疫印迹法(Western Blot)检测环靶明处理前后SMO、GLI1在A172中的蛋白表达及变化;环靶明对A172裸鼠皮下移植瘤生长的影响.结果 环靶明抑制A172细胞的增殖,其作用呈剂量和时间依赖性;经不同浓度的环靶明作用48 h后A172细胞的凋亡率逐渐升高,明显高于对照组的凋亡率(P＜0.01),并存剂量依赖性.SMO、GLI1的mRNA和蛋白均在A172中表达,环靶明下调A172的SMO、GLI1表达.环靶明可抑制A172裸鼠皮下移植瘤的生长.结论 在体内及体外阻断Hedgehog信号通路可抑制人胶质母细胞瘤细胞A172的生长.
