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二氯乙酸对人尿路上皮细胞膀胱癌相关基因甲基化、转录和蛋白表达的影响
目的 探讨二氯乙酸对人尿路上皮SV-HUC-1细胞膀胱癌相关癌基因c-myc和抑癌基因APC、SFRP1、SFRP5甲基化、转录水平以及蛋白表达量的影响,为阐明其毒性机制提供科学依据.方法 采用CCK-8法检测二氯乙酸对SV-HUC-1细胞的细胞毒性,确定不显著影响细胞存活率的浓度及处理时间.以1和2 mmol/L浓度二氯乙酸分别对SV-HUC-1细胞染毒24、48和72 h,采用甲基化特异性PCR(MSP)和real-time PCR对细胞中c-myc、APC、SFRP1和SFRP5基因的甲基化状态和mRNA表达量进行检测.以2 mmol/L浓度二氯乙酸对SV-HUC-1细胞染毒72 h,采用Western blot 对c-myc蛋白进行蛋白表达量检测.结果 二氯乙酸可使SV-HUC-1细胞中c-myc基因非甲基化程度升高,mRNA和蛋白表达量上升;可使APC、SFRP1和SFRP5基因甲基化程度升高,mRNA表达量下降.结论 二氯乙酸可影响SV-HUC-1细胞癌基因c-myc和抑癌基因APC、SFRP1、SFRP5的甲基化和表达,提示其可能有一定的表观遗传毒性.
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HCV核心蛋白抑制SFRP1基因启动子活性
目的 探讨HCV核心蛋白对Wnt信号通路抑制分子SFRP1启动子活性的影响.方法 以人肝癌细胞系Huh7基因组为模板,扩增SFRP1启动子区不同片段(-407～-27bp,-837～-27 bp,-1 202～-27bp,-1 619～-27 bp,-2 029～-27 bp),以pGL3-Basic为载体分别构建SFRP1启动子区截短报告质粒.将构建好的质粒与pRL-TK共转染HEK293细胞,确定启动子区活性强区域；分别用编码HCV核心蛋白的腺病毒或GFP对照腺病毒感染已转染重组报告质粒的SK-Hep1细胞,观察AdCore对SFRP1启动子活性的调控作用.结果 SFRP1启动子区域-407～-27 bp片段活性强；与pGL3-Basic对照组相比较,相对荧光素酶活性增加了37.31 ±4.45倍(P＜0.01),pGL3-S2～S5的活性分别增加了28.74±2.47、13.56 ±2.52、12.97±0.87和8.29±0.09倍(P＜0.01)；HCV Core蛋白能够抑制SFRP1基因启动子区活性,其对pGL3-S1的抑制作用强,与GFP对照组相比较,抑制率为63.8％ ±1.0％ (P＜0.01).结论 HCV核心蛋白通过抑制SFRP1启动子区活性下调SFRP1基因的表达,可能参与Wnt/β-catenin信号通路的活化,并与原发性肝癌的发生密切相关.
关键词： SFRP1 启动子 荧光素酶报告基因载体 HCV核心蛋白 -
Wnt拮抗基因SFRP1、SFRP2启动子区甲基化与贲门腺癌关系的研究
目的 研究贲门腺癌(GCA)中分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)、分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)基因启动子区甲基化状态与贲门腺癌的关系.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测GCA癌组织及相应癌旁正常组织中SFRP1和SFRP2基因的甲基化状态,分析其与临床病理特征之间的关系.结果 94例GCA组织中SFRP1、SFRP2基因甲基化率分别为87.2%(82/94)和83.0%(78/94),显著高于癌旁正常组织14.9%(7/47)和55.3%(26/47)(P<0.001).GCA患者中无淋巴结转移组SFRP1基因甲基化发生率73.7%(28/38)显著低于有淋巴结转移组的甲基化率96.4%(54/56)(P<0.05);SFRP2基因的甲基化与有无淋巴结转移无关.SFRP1和SFRP2基因的甲基化与GCA的组织分化无关.63例贲门腺癌组织中SFRP1和SFRP2基因同时发生甲基化,其中有淋巴结转移的36例高于无淋巴结转移的27例,高中分化腺癌组26例,低于低分化腺癌组37例.侵及肌层及浆膜层的16例低于侵及周围软组织的47例,但以上差异均无统计学意义(P>0.05).结论 SFRP1、SFRP2基因可能参与了贲门腺癌的发生发展,并且SFRP1高甲基化状态与贲门腺癌的恶性行为有关.
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胃癌细胞系SGC-7901中WNT和HH信号通路相互关系的研究
目的 研究胃癌细胞中WNT & HH 信号通路的内在性关系.方法 用RT-PCR 方法分别检测不同浓度(50 μmol/L,75 μmol/L,100 μmol/L)环靶明干预的胃癌细胞(SGC-7901)24 h后的β-cantenin mRNA、Gli1 mRNA、Sfrp1 mRNA 的表达.结果 1、胃癌细胞梭型贴壁生长,染色质分布均匀,细胞膜完整;2、环靶明干预胃癌细胞后,胃癌细胞的生长明显抑制.Gli1 mRNA的表达呈抑制浓度依赖型,Sfrp1 mRNA 的表达随Gli1 mRNA 的表达减少而加强,β-cantenin mRNA 的表达随Sfrp1 mRNA的表达增加而减少.结论 Gli1 mRNA和Sfrp1 mRNA之间有关联性.
关键词： 环靶明 SGC-7901 Gli1 β-cantenin SFRP1 -
SFRP1蛋白在前列腺腺癌中的表达及意义
目的:探讨分泌型卷曲相关蛋白1(Secreted Frizzled-related Proteins 1,SFRP1)在前列腺腺癌中的表达情况,并分析其与临床病理参数的关系.方法:采用免疫组化PV-9000二步法检测52例前列腺腺癌和68例良性前列腺增生组织中的SFRP1蛋白的表达.结果:在前列腺腺癌组织中SFRP1蛋白的阳性表达率为23.08％,显著低于良性前列腺增生组织的80.88％(χ2=39.928,P<0.001).SFRP1蛋白的失表达与前列腺腺癌Gleason评分呈负相关(P<0.05),而与患者年龄、术前血PSA值、TNM分期、是否有骨转移均无关(χ2=0.177、1.915、0.751、1.631,P=0.739、0.200、0.513、0.300).结论:SFRP1蛋白表达的降低及其对Wnt信号通路抑制作用的减弱,与前列腺腺癌的发生密切相关.
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Wnt通路拮抗基因SFRP1SFRP2SFRP4SFRP5甲基化状态与肾透明细胞癌关系的研究
目的:研究SFRPs家族中SFRP1、SFRP2、SFRP4、SFRP5基因启动子区甲基化状况,探讨基因的甲基化与肾透明细胞癌发生发展的关系.方法:采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)方法检测66例肾透明细胞癌及30例癌旁组织中SFRP1、SFRP2、SFRP4、SFRP5基因启动子区甲基化状态及其与临床病理学资料之间的关系.结果:肾透明细胞癌组织中SFRP1、SFRP2、SFRP4、SFRP5基因甲基化率分别为77.3%(51/66)、72.7%(48/66)、59.1%(39/66)、69.7%(46/66)均显著高于相应的癌旁组织,结果有统计学意义(P<0.05).与临床病理学资料相联系,肾透明细胞癌组织中SFRP1、SFRP5基因,甲基化与肿瘤TNM分期相关;SFRP4基因甲基化与肿瘤的病理学分级相关(P<0.05).结论:SFRP1、SFRP2、SFRP4、SFRP5基因的甲基化均可能参与肾透明细胞癌的发生.SFRP1、SFRP5基因甲基化可能与肾透明细胞癌的发展,浸润和转移有关.SFRP4基因甲基化可能与肾透明细胞癌的恶性行为有关.
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SFRP1下调与大肠肿瘤发生的关系研究
目的:探讨SFRP1与大肠癌发生的关系.方法: 运用半定量RT-PCR方法及免疫组化方法检测SFRP1、β-catenin、E-cad在正常大肠粘膜、大肠腺瘤以及大肠腺癌中的表达.结果:大肠腺癌、腺瘤组织的β-catenin、E-cad胞膜表达不同程度缺失,β-catenin呈胞质和胞核异位表达,腺瘤β-catenin的异位表达率为87.5%,低于大肠腺癌(100%,P＜0.05).大肠腺瘤β-catenin、E-cad胞膜表达缺失率分别为37.5%、37.5%,低于大肠腺癌(58.8%、76.4%,P均＜0.05).半定量RT-PCR显示SFRP1基因在大肠腺瘤、大肠腺癌组织中的表达水平均明显低于大肠正常组织的对照组,且大肠腺癌组织中SFRP1基因的表达水平低于大肠腺瘤(P＜0.05).结论:SFRP1基因下调使其拮抗WNT途径的功能削弱,导致Wnt的持续存在、其下游基因β-catenin、E-cad异常表达,从而导致大肠粘膜细胞获得恶变潜能.故SFRP1可能为预防大肠肿瘤的发生、大肠肿瘤的早期诊断提供新思路,并为防治大肠肿瘤提供新靶标和实验依据.
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瘢痕灸对原发性肝癌大鼠β-catenin及sFRP1表达的影响
目的:探讨瘢痕灸对肝癌大鼠肝脏组织中Wnt/β-catenin信号通路中的β-连环蛋白(β-catenin)及分泌型卷曲相关蛋白(sFRP1)表达的影响.方法:将60只SPF级Wistar雄性大鼠按随机数字表分为空白组、模型组、阿霉素组、足三里组和肝俞组,每组12只.分别给予相应干预后,采用Western Blot检测β-catenin、sFRP1的表达.结果:与空白组相比,模型组、阿霉素组、足三里组和肝俞组的β-catenin的表达量明显升高(P＜0.05),sFRP1的表达量下降(P＜0.05);与模型组比较,阿霉素组、足三里组和肝俞组的β-catenin的表达幅度降低(P＜0.05),sFRP1的表达量升高(P＜0.05);与阿霉素组比较,足三里组和肝俞组的β-catenin的表达量显著降低(P＜0.05),sFRP1的表达幅度升高(P＜0.05);与足三里组比较,肝俞组的β-catenin的表达量显著降低(P＜0.05),sFRP1的表达量明显升高(P＜0.05).结论:瘢痕灸对原发性肝癌大鼠有一定治疗效果,且瘢痕灸肝俞穴疗效较足三里穴更为显著.
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复发转移性乳腺癌患者外周血BRCA1、CDH1、DKK1和SFRP1甲基化检测意义的研究
目的 探讨BRCA1、CDH1、DKK1和SFRP1基因甲基化与乳腺癌患者肿瘤激素受体状态、复发转移的关系.方法 利用甲基化特异性PCR法(MSP)检测115例复发转移乳腺癌患者外周血BRCA1、CDH1、DKK1和SFRP1的甲基化情况,与65例健康对照组进行比较.结果 BRCA1、CDH1和SFRP1的甲基化状态在复发转移乳腺癌患者与对照组之间存在差异.ER阳性患者外周血CDH1甲基化阳性率27.5%,ER阴性患者47.8%.ER阳性患者外周血SFRP1甲基化阳性率52.2%,ER阴性患者23.8%.有远处转移者CDH1甲基化阳性率为30.2%,而仅有局部复发转移者为63.2%.结论 复发转移乳腺癌患者外周血BRCA1、CDH1和SFRP1甲基化率显著增加,CDH1和SFRP1甲基化与激素受体状态明显相关,为病情评估、治疗及愈后分析提供了一定的参考.
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牙周炎基础治疗前、后龈沟液中SFRP1总量的变化
目的:检测慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)患者牙周基础治疗前、后龈沟液中分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled-related protein-1,SFRP1)的总量,探讨SFRP1与CP的关系及其在CP活动中的意义.方法:选择中、重度CP患者22例为试验组,牙周健康者5例为对照组,分别在刮治前及刮治后1个月检查试验组的探诊出血指数(BI)、牙周探诊深度(PD)及临床附着丧失(CAL),并于洁治后1周、刮治后1周及刮治后1个月收集试验组的龈沟液,采用酶联免疫吸附实验测定SFRP1总量,应用SPSS19.0软件包对数据进行统计学处理.结果:刮治前(洁治后1周)龈沟液中SFRP1总量在中、重度CP组、正常对照组分别为(40.80:±4.85)pg、(33.42±2.24)pg,前者显著高于后者(P＜0.05).中、重度CP组刮治后1周、1个月龈沟液中SFRP1总量分别为(45.99+5.23)pg、(36.92±4.00)pg,刮治后1个月SFRP1总量均显著低于洁治和刮治后1周,而刮治后1周龈沟液中SFRP1总量显著高于洁治后1周及刮治后1个月(P＜0.05).结论:牙周炎患者牙周基础治疗1个月后BI、PD显著改善,且SFRP1在龈沟液中的总量随牙周炎症状况的改变而变化.
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皮肤鳞状细胞癌组织中SFRP1基因启动子甲基化研究
目的 探讨SFRP1与皮肤鳞状细胞癌(鳞癌)临床病理的关系及其在鳞癌发生发展中的可能作用机制.方法 用MassARRAY质谱仪EpiTYPER甲基化方法检测鳞癌组织,癌旁组织和正常皮肤组织各40例样本中SFRP1基因启动子甲基化状态.结果 共完成SFRP1基因启动子2个片段17个CpG位点1951个CpG单位(1951/2255,86.52％)的甲基化评估,鳞癌与癌旁组织相比、癌旁组织与正常组织相比分别检测出10个CpG位点(10/17,58.82％),5个CpG位点(5/17,29.41％)甲基化率差异有统计学意义(P＜0.05).检测到SFRP1基因启动子3个位点在不同组织病理级别差异有统计学意义(P＜0.05),其甲基化率鳞癌Ⅲ级＞鳞癌Ⅱ级＞鳞癌Ⅰ级.结论 SFRP1在皮肤鳞癌中呈现高甲基化率,可能参与了鳞癌的发生发展过程.
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Wnt信号通路的β- catenin和拮抗因子SFRP1在甲状腺乳头状癌中的表达及意义
目的：探讨Wnt信号通路的β- catenin和拮抗因子SFRP1在甲状腺乳头状癌（PTC）中的表达及意义。方法采用免疫组化PV-8000法检测78例PTC组织和24例正常甲状腺组织中β- catenin和Wnt拮抗因子SFRP1蛋白的表达情况。结果 PTC组织中β- catenin阳性表达率明显高于正常甲状腺组织（P＜0.01），而Wnt拮抗因子SFRP1蛋白在PTC组织中阳性表达率明显低于正常甲状腺组织（P＜0.01）。β- catenin和Wnt拮抗因子SFRP1蛋白表达均与PTC临床分期、淋巴结转移及患者年龄有关（P＜0.05或0.01），而均与患者性别、肿瘤大小无关（均P＞0.05）。Spearman相关分析显示在PTC组织中两者之间表达呈负相关（P＜0.01）。结论β- catenin和SFRP1蛋白表达异常可能与PTC的发生、发展有关。两种蛋白联合检测对判断PTC的恶性程度和病情进展有重要价值。
关键词： 甲状腺乳头状癌 Wnt/β- catenin SFRP1 -
SFRP1和APC基因在先天性巨结肠症中的甲基化和异常表达
先天性巨结肠症(HSCR)的病因和发病机制目前尚不明确,普遍认为是多种因素共同作用的结果.近来发现Wnt信号异常激活与HSCR发病有关~[1].Wnt拮抗因子分泌型Frizzled相关蛋白(SFRP)家族第一个成员SFRPI和多发性腺瘤样息肉病蛋白(APC)均为Wnt信号的重要抑制因子.本研究对SFRP1和APC基因在HSCR中甲基化及表达状态进行检测,以探讨SFRP1和APC表达异常在HSCR发病机制中的作用.
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根尖周炎模型小鼠DKK1、SFRP1及骨形成相关分子Runx2、Osteocalcin的表达变化
目的:检测DKK1和SFRP1在小鼠实验性根尖周炎中不同时期的表达,并初步观察根尖周炎症状态下骨形成相关分子Runx2和Osteocalcin改变.方法:将50只8~10周C57 BL/6雄性小鼠随机分成0 d,7 d,14 d,21 d组和28 d组,每组10只.分离下颌骨,Micro-CT扫描观察根尖周炎症骨缺损体积,同时制备磨牙近远中向矢状切片行HE组织学观察,采用免疫组化检测DKK1和SFRP1及骨形成相关分子(Runx2和Osteocalcin)表达水平.另每组取3只小鼠,处死前14 d和4 d分别注射钙黄绿素(30 mg/kg)和茜素红(50 mg/kg)后行硬组织磨片,初步观察根尖周骨改建状态.结果:Micro-CT扫描显示随根尖周炎的发生发展,术后7 d开始至14 d,根尖缺损体积逐渐增大,术后21 d达到高值.破骨细胞数量在21 d多,28 d趋于稳定.DKK1和SFRP1阳性细胞在术后7~14 d表达逐渐增多,在术后28 d表达有所下降.Runx2和Osteocalcin阳性细胞术后7~28 d表达数目持续增多.结论:DKK1和SFRP1参与了根尖周病病理过程,根尖周骨破坏进程可能伴随代偿性骨形成.
关键词： DKK1 SFRP1 Runx2 Osteocalcin 根尖周炎 -
SFRP1基因与非小细胞肺癌关系的研究进展
肺癌是全球发病率和死亡率高的肿瘤之一,它的发生是由多基因、多元素共同参与的病理过程,Wnt信号通路的异常激活与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)的发生密切相关.分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled-related protein 1,SFRP1)基因是新发现的抑癌基因,近年来越来越多研究认为SFRP1基因的表观遗传修饰以及SFRP1表达下调,使Wnt信号通路异常活化,从而促进NSCLC的发生、发展及转移.
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肝细胞癌中SFRP1和APC基因启动子甲基化与其mRNA的表达
目的 探讨肝细胞癌(HCC)中SFRP1和APC基因启动子甲基化状态及其mRNA表达的关系.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测30例肝细胞癌(HCC组)及相应的癌旁组织(癌旁组)和10例正常肝组织(正常对照组)中SFRP1及APC基因启动子甲基化状态和mRNA的表达水平,分析甲基化与某些临床参数与mRNA表达的关系.结果 HCC组、癌旁组及正常对照组中的SFRP1和APC基因启动子甲基化率分别是11/30,4/30,0/10和14/30,5/30,0/10;HCC组明显高于其余两组(P＜0.05).SFRP1基因启动子甲基化与临床资料无关(P＞0.05);APC基因启动子甲基化与年龄(＜60)岁和癌肿无假包膜有关(P＜0.05).HCC组SFRP1基因mRNA表达明显低于其余两组(P＜0.05),各组APC基因mRNA表达差异无显著性.两基因甲基化之间无相关性.结论 SFRP1和APC基因启动子甲基化与HCC的形成和进展有关,但HCC组织中基因甲基化与mRNA表达的关系尚不明确.
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多基因联合提高结直肠癌甲基化检测阳性率的研究
目的 探讨联合检测Vimentin、sFRP1和HPP1基因甲基化对提高结直肠癌甲基化阳性率的意义.方法 收集90例结直肠癌(结直肠癌组)和60例腺瘤性息肉(腺瘤组)患者及20例结直肠正常组织(正常对照组)标本,提取组织标本的DNA,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测Vimentin、sFRP1和HPP1基因甲基化状态,分析其与结直肠癌的关系及甲基化阳性率.结果 结直肠癌组Vimentin、sFRP1和HPP1基因甲基化率分别为66.7％(60/90)、68.9％ (62/90)和72.2％(65/90);腺瘤组则分别为53.3％(32/60)、55.0％( 33/60)和50.0％ (30/60);正常对照组分别为0、0和5.0％(1/20).结直肠癌组3个基因甲基化阳性率均高于腺瘤组和正常对照组(P＜0.05).3个基因甲基化联合检测诊断结直肠癌和腺瘤的阳性率分别为93.3％(84/90)和76.7％(46/60),高于单个基因检测的甲基化阳性率(P＜0.05).3个基因甲基化状态与本组结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、淋巴结转移、远处转移及TNM分期无关(P＞0.05).结论 Vimentin、sFRP1和HPP1基因启动子甲基化水平在结直肠癌组织中升高,其联合检测明显提高了结直肠癌甲基化检测阳性率,有可能成为结直肠癌早期诊断的甲基化检测方案.
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浸润性乳腺癌SFRP1基因的表达及其启动子甲基化的意义
目的 探讨浸润性乳腺癌及相应癌旁乳腺组织中分泌型卷曲相关蛋白1(the secreted frizzled-related protein 1,SFRP1)基因的表达及其启动子CpG岛的异常甲基化状态,并分析其临床意义.方法 采用实时荧光定量PCR技术及甲基化聚合酶链反应(MSP)技术检测58例浸润性乳腺癌组织和相应癌旁乳腺组织中SFRP1基因的mRNA表达及其启动子CpG岛的异常甲基化情况,并分析其与临床病理参数之间的关系.结果 浸润性乳腺癌组SFRP1基因的甲基化显著高于癌旁乳腺组织组(P<0.05);腋窝淋巴结有转移的浸润性乳腺癌组SFRP1基因的甲基化显著高于腋窝淋巴结无转移组(P<0.05),而与其他临床病理参数无关.SFRP1在浸润性乳腺癌组的mRNA表达量与乳腺癌旁组比较,差异有统计学意义(P<0.05);在23例SFRP1基因启动子CpG岛发生异常甲基化的浸润性乳腺癌组,均未检测到SFRP1的mRNA表达.结论 SFRP1基因异常甲基化可能影响其 mRNA的转录水平;SFRP1基因启动子的甲基化与浸润性乳腺癌的发生发展有关,对其进行检测有可能为浸润性乳腺癌的早期诊断和判断预后提供帮助.
关键词： 浸润性乳腺癌 SFRP1 甲基化 实时荧光定量PCR技术 甲基化特异性PCR -
食管鳞状细胞癌中SFRP1、Wnt-1的表达及临床意义
目的:研究分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)和Wnt-1在食管鳞癌中的表达情况,探讨其在食管鳞状细胞癌发生发展及与临床病理特征的关系.方法:应用免疫组织化学法(SP法),检测60例食管鳞状细胞癌组织和40例正常食管黏膜中SFRP1和Wnt-1蛋白的表达.结果:食管鳞状细胞癌中SFRP1的阳性表达率为25.0%,显著低于癌旁正常组织黏膜中的92.5%(χ2 ＝ 43.81),Wnt-1在食管鳞状细胞癌中的阳性表达率为73.3%,显著高于癌旁正常组织中的17.5%(χ2 ＝ 29.94).在食管鳞癌组织中,SFRP1的表达与临床病理因素无相关性,Wnt-1的表达与组织分化程度有关.结论:SFRP1和Wnt-1在食管鳞癌的发生、发展中起一定的作用,它们有望成为辅助参考指标应用于临床,并可能为食管鳞癌的生物治疗和预后判断提供部分理论依据.
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莪术含药血清调控大鼠肝星状细胞Shh和SFRP1的机制研究
目的:研究莪术含药血清调控大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)中Hedgehog(Hh)信号通路分泌性信号糖蛋白配体(Sonic Hedgehog,Shh)和Wnt信号通路负调节因子分泌型卷曲相关蛋白1(Secreted Frizzled-Related Proteins-1,SFRP1)表达的机制.方法:大鼠50只随机分为空白组、莪术1组(3.75g/kg)、莪术2组(6.25g/kg)、莪术3组(8.75g/kg)、秋水仙碱组,分别制备含药血清.MTT法预实验筛选莪术佳大鼠灌胃剂量及莪术含药血清佳作用浓度,根据预实验结果进行正式实验.正式实验中,体外培养的大鼠HSCs分为8组:空白组、模型(瘦素)组、Hh通路抑制剂(环巴胺)组、莪术佳剂量浓度组、环巴胺+莪术佳剂量浓度组、Hh通路激动剂(Purmorphamine)组、Purmorphamine+莪术佳剂量浓度组、秋水仙碱组.除空白组外,其余各组经瘦素(0.1 μg/ml)诱导及相应含药血清干预24h后,MTT法检测HSCs增殖,RT-PCR法检测Shh mRNA和SFRP1 mRNA表达,West-ern-blot及免疫荧光法检测Shh和SFRP1蛋白表达.结果:预实验得出莪术佳大鼠灌胃剂量为6.25g/kg,莪术含药血清佳作用浓度为10％.正式实验结果提示,用瘦素活化HSCs后,Shh mRNA和蛋白表达显著上调,SFRP1 mRNA和蛋白表达显著下调.环巴胺(20 μmol/L)、10％莪术含药血清(6.25g/kg)、秋水仙碱(100 μg/kg)干预后,Shh mRNA和蛋白表达显著下调,SFRP1 mRNA和蛋白表达显著上调.莪术含药血清与环巴胺协同干预后,Shh mRNA和蛋白表达显著下调,SFRP1 mRNA和蛋白表达显著上调.Purmorphamine(1 μmol/L)干预后,Shh mRNA和蛋白表达显著上调,SFRP1 mRNA和蛋白表达显著下调.用莪术含药血清干预Pur-morphamine组后,Shh mRNA和蛋白表达显著下调,SFRP1 mRNA和蛋白表达显著上调.结论:Shh和SFRP1涉及Hh和Wnt通路的异常调控,在瘦素诱导活化的HSCs中存在负相关关系;莪术含药血清可通过调控瘦素诱导活化的HSCs中Shh和SFRP1的表达,参与Hh和Wnt信号通路抑制HSCs的活化和增殖.
