首页 > 文献资料
-
单次、分次照射与125I 粒子低剂量率照射对人喉鳞癌 Hep2细胞的抑制作用
目的：探讨125I 粒子持续低剂量率照射与分次照射、单次照射对人喉鳞癌细胞 Hep2的抑制作用及其作用机制。方法实验分为无照射对照组（Ctrl 组）、单次照射组（SDR 组）、分次照射组（FDR 组）和125I 粒子持续低剂量率照射组（125I-CLDR 组）四组。采用细胞克隆形成实验法检测 Hep2细胞在不同照射条件下细胞克隆的形成能力；用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期阻滞情况；用蛋白印迹法检测不同照射条件后 Hep2细胞总γ-H2AX、CyclinB1、Caspase3蛋白表达的变化。结果经2 Gy、4 Gy、6 Gy 的剂量照射，125I-CLDR 组 Hep2细胞克隆形成率均低于 SDR 组和 FDR 组。经4 Gy 的剂量照射后，125I-CLDR 组 Hep2细胞出现 G2/M 期阻滞，且阻滞效应较 SDR 组及 FDR 组的细胞强；125I-CLDR 组 Hep2细胞的凋亡比例明显高于 SDR 组及 FDR 组；三个照射组γ-H2AX、CyclinB1、Caspase3、NF-κB、P21和 Cdk1的表达水平上调，125I-CLDR 组 p-Cdc25c 蛋白表达水平低于 SDR 组和 FDR 组。结论在本实验条件下，125I 粒子持续低剂量率照射较单次照射、分次照射能够诱发更多 Hep2细胞出现 DNA 损伤、引起持续的 G2/M 期阻滞、诱导细胞凋亡并抑制细胞的再增殖。
-
miR-155对喉鳞状细胞癌Hep2细胞增殖影响及机制
目的 探讨miR-155对喉鳞状细胞癌Hep2细胞增殖影响及具体机制.方法 采用miR-155 NC和miR-155 inhibitor转染Hep2细胞,realtime-PCR法检测转染效果,细胞计数盒-8(CCK-8)法检测不同转染时间(12、24、36、48、60、72 h)细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;Western blot检测Hep2细胞中细胞周期蛋白A1(cyclin A1)、cyclin D1、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/叉形头转录因子(Foxo3a)信号通路相关蛋白表达量.结果 miR-155 inhibitor组中miR-155表达量(0.34±0.03)明显低于miR-155 NC组(1.25±0.10),且转染24、36、48、60、72 h后,miR-155 inhibitor组Hep2细胞活力明显低于miR-155 NC组;与miR-155 NC组比较,miR-155 inhibitor组Hep2细胞凋亡率明显提高,细胞周期阻滞于G1期,cyclinA1、cyclin D1、PI3K、p-AKT表达下调,Foxo3a表达上调,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 miR-155表达下调可降低Hep2细胞活力、增加细胞凋亡率,其机制可能与miR-155调控PI3 K/AKT/Foxo3a信号通路有关.
-
miR-122a抑制人喉癌细胞株Hep2细胞增殖的研究
目的:研究miR-122 a对人喉癌细胞株Hep2细胞增殖、细胞周期以及相关蛋白表达量的影响.方法:人喉癌细胞株Hep2细胞分别转染miR-122 a寡聚核苷酸(A组)和miR-122 a inhibitor(阻遏物)(B组),同时设立阻遏物阴性对照(in-hibitor negative control,miR-NC inhibitor)(C组)和空白对照(D组).用RT-PCR、MTT法、流式细胞仪和Western blot技术评价各组细胞增殖和细胞周期的生物学特征.结果:转染miR-122 a寡聚核苷酸后,Hep2细胞中miR-122 a表达显著增加.同D组相比,A组细胞增殖水平明显受到抑制,miR-122a寡聚核苷酸能够有效诱导Hep-2细胞周期阻滞在G1/G0期,A组细胞分裂周期蛋白42表达水平明显下调,细胞周期调控因子蛋白CDK4及细胞周期素D1蛋白表达水平明显降低.结论:miR-122 a寡聚核苷酸能够显著抑制喉癌细胞Hep2的增殖,miR-122 a是潜在的人喉癌细胞基因治疗的候选靶点.
-
miR-1264对喉癌Hep2细胞增殖和迁移的影响
目的 miR-1264在喉癌中表达下调.文中旨在研究miR-1264对喉癌Hep2细胞生物学功能的影响及是否参与下调LCRG1基因的表达. 方法 Real-time quantitative PCR检测miR-1264在人喉癌组织中的表达情况;将转染mimic/in-hibitor NC Hep2细胞设为对照组,将未转染Hep2细胞设为空白组,将转染miR-1264 mimic/inhibitor设为实验组.利用MTT、Transwell分别观察miR-1264对Hep2细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;luciferase实验验证miR-1264和LCRG13′UTR的结合;RT-PCR、Western blot分别检测miR-1264、LCRG1蛋白表达. 结果 与对照组和空白组相比,Hep2细胞瞬转miR-1264 mimic后,活细胞数量明显增加,增殖能力显著增强(P<0.05);而瞬转miR-1264 inhibitor后,活细胞数量明显降低,增殖能力减弱(P<0.05).与对照组[(80.80±1.07)个]及空白组[(73.60 ±1.44)个]迁移细胞数量相比,实验组[(97.00 ±1.41)个]明显增加(P<0.05),迁移能力亦显著增强(P<0.05);与对照组[(80.00±1.11)个]及空白组[(73.60 ±1.44)个]迁移细胞数量相比, miR-1264 inhibitor组[(71.40±1.21)个]明显降低(P<0.05),迁移能力亦减弱(P<0.05).与对照组[(43.00±1.41)个]和空白组[(50.60±1.03)个]侵袭细胞数量相比,实验组[(57.00±1.00)个]明显增加(P<0.05),侵袭能力亦显著增强(P<0.05);与对照组[(61.20±1.50)个]和空白组[(50.60±1.03)个]侵袭细胞数量相比,实验组[(27.60±0.93)个]明显降低,侵袭能力受到显著抑制(P<0.05),利用 RT-PCR验证瞬转成功后,进一步应用 Western blot实验检测 LCRG1蛋白表达结果,显示:实验组LCRG1蛋白表达较 NC对照组和空白组均无明显差异(P>0.05). 结论 miR-1264在喉癌组织中高表达,miR-1264可能不参与LCRG1蛋白的表达下调,但能增强Hep2细胞的增殖、迁移和侵袭能力.
-
内皮素系统在喉癌细胞HEP2的表达
目的 内皮素(endothelin,ET)系统在多种恶性肿瘤中均有表达且对恶性肿瘤的演进具有重要调控作用,文中对喉癌细胞HEP 2是否存在ET系统进行探讨.方法 应用RT-PCR和免疫组化方法分别检测HEP2细胞ET系统的基因和蛋白表达,ELISA法对HEP2细胞ET1分泌情况进行检测.结果 HEP2细胞存在ET系统基因及蛋白表达,同时能主动分泌ET1.结论 人喉癌细胞存在ET系统的表达,ET1可能是促进喉癌病理发展的重要生物因子.
-
姜黄素联合白藜芦醇抑制人头颈部肿瘤细胞系增殖的机制研究
目的 探讨姜黄素联合白藜芦醇抑制人头颈部肿瘤细胞系增殖的机制.方法 用姜黄素和白藜芦醇联合处理Hep2(人喉癌细胞株)及FaDu(人下咽癌细胞株),应用MTT(塞唑蓝)比色法检测细胞增殖抑制率,平板克隆增殖实验检测单个细胞集落形成能力,Hoechst33258染色检测细胞凋亡情况,同时应用Real-time PCR法检测Bax和Bcl-2的mRNA表达水平.结果 姜黄素和白藜芦醇对Hep2和FaDu细胞增殖有抑制作用,二者联合处理后,对细胞增殖、细胞克隆形成能力及细胞凋亡的抑制均明显增强;同时,姜黄素和白藜芦醇上调细胞中Bax和下调Bcl-2的mRNA水平.结论 姜黄素与白藜芦醇联合处理可抑制Hep2及FaDu细胞增殖,作用机制可能与上调Bax、下调Bcl-2基因表达有关.
-
靶向人喉癌 HEP2细胞 Trop2基因的siRNA 构建及鉴定
目的：构建能高效干扰 Trop2基因的 siRNA，转染人喉癌 HEP2细胞，并初步鉴定其干扰效果。方法以人Trop2基因为靶基因，设计合成3条针对不同作用位点的 siRNA 干扰序列，用脂质体法将各小干扰序列瞬时转染人喉癌 HEP2细胞，同时设立阴性对照、空白对照，分别命名为 W 组（未转染组）、NC 组（阴性对照组）、T1组（S1序列组）、T2组（S2序列组）及 T3组（S3序列组），每组各5例。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达，计算转染效率。转染24 h 后，收集稳定后细胞，采用实时荧光定量 PCR 法检测各干扰序列对 Trop2基因表达的抑制效果。结果荧光显微镜下观察，见 HEP2细胞表达绿色荧光蛋白，证实 siRNA 已转入细胞，转染率达90％。RT-PCR 法结果显示，与未转染组、阴性对照组相比，转染 siRNA 的人喉癌 HEP2细胞中 Trop2表达均受到抑制，与 T2、T3组相比，T1组对 Trop2 mRNA 的抑制作用明显，差异有统计学意义（0．470±0．063 vs 0．749±0．024，0．824±0．027，P ＜0．05）。结论成功构建并筛选出了能高效、特异沉默人喉癌 HEP2细胞 Trop2基因的 siRNA 序列，为进一步研究 Trop2基因在喉癌中的作用机制及其基因治疗奠定了基础。
-
内皮素1对喉癌细胞HEP 2的促增殖作用
目的 探讨内皮素1对HEP 2细胞有丝分裂的影响.方法 采用RT-PCR及免疫组化Dako EnVision法检测HEP 2细胞内皮素受体表达情况;3H-胸腺嘧啶核苷渗入法检测不同浓度和作用时间内皮素1对HEP 2细胞有丝分裂的影响.结果 HEP 2细胞存在内皮素受体基因及蛋白表达;内皮素1具有明显促HEP2细胞增殖作用,且其促增殖作用呈浓度依赖性.结论 内皮素1能有效促进HEP2细胞有丝分裂,对喉癌的演进可能有重要调控作用.
-
呼吸道合胞病毒对上皮细胞TLR3/4和SOCS1/3表达的影响
目的:探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染上皮细胞中抗病毒信号激活以及细胞因子负调节系统对细胞因子分泌的影响.方法:应用ELISA法检测RSV感染人喉癌上皮细胞(Hep2)培养上清中0,1,2,4,8,12,24 h干扰素α(IFN-α)的浓度;RT-PCR检测病毒感染后各时段上皮细胞内细胞因子信号传导抑制因子(SOCS)1,3和Toll样受体(TLR)3,4的mRNA表达水平.结果:RSV感染上调Hep2细胞SOCS3 mRNA的表达(P＜0.05),SOCS1的表达先增高后减低,但无统计学意义;TLR3,TLR4 mRNA的表达增高表现为时间依赖性(P＜0.05);IFN-β的表达在RSV感染后短暂升高而后迅速降低并低于基础表达量(P＜0.05).结论:RSV感染Hep2细胞后上调TLR3,TLR4和SOCS3 mRNA的表达,抑制IFN-α的分泌,提示病毒复制可能通过上调SOCS3而拮抗TLR途径激活的宿主抗病毒免疫应答.
-
呼吸道合胞病毒抑制JAK/STAT信号通路减少干扰素-β的表达
目的:探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染上皮细胞早期对酪氨酸蛋白激酶/信号传导与转录活化因子(JAK/STAT)信号通路和β干扰素(IFN-β)表达的影响.方法:RSV体外感染人喉癌上皮细胞(Hep2)0,1,2,4,8,12,24 h后分别应用酶联免疫吸附法(ELISA)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测感染后各个时间段IFN-β的浓度以及STAT1、STAT2 mRNA的表达水平.结果:RSV感染Hep2细胞后,IFN-β浓度于第2小时后略有上升,但与未感染细胞基础水平无差异性变化(P>0.05).STAT1、STAT2 mRNA表达第1小时即上升,第2小时达峰值,随后逐渐下降,在第24小时达低值(P<0.05).结论:RSV感染Hep2细胞早期上调STAT1、STAT2 mR-NA,继而抑制其转录,对上皮细胞IFN-β的分泌无明显影响.
关键词： 呼吸道合胞病毒 Hep2细胞 信号传导与转录活化因子 干扰素-β -
siRNA干扰USP7表达对喉癌细胞生物学特性的影响
目的：通过小干扰RNAs（siRNA）干扰泛素特异性蛋白酶7（USP7）在喉癌细胞中的表达，来探讨 USP7对喉癌细胞生物学特性的影响。方法自行设计并使用高效siRNA在喉癌HEP2细胞株特异性干扰USP7表达，然后利用CCK‐8法、Tr‐answell小室迁移实验和流式细胞术观察USP7干扰后对喉癌细胞增殖、迁移能力和凋亡的影响。结果自行设计的siRNA可高效抑制喉癌 HEP2细胞USP7 mRNA及蛋白表达，显著抑制喉癌细胞的增殖、迁移能力，促进喉癌细胞的凋亡。结论 siRNA‐USP7可以显著抑制喉癌细胞增殖和迁移能力，并促进凋亡，提示USP7可能是晚期喉癌治疗的一个重要靶标。
-
RNAi抑制NF-KB通路相关基因对喉鳞癌凋亡及转移的影响
目的:用RNA干涉方法探讨NF-κB通路参与喉癌发生、发展的可能机制.方法:RT-PCR、West-em Blot检测喉鳞癌组织中NF-κB通路中相关基因表达,RNA干涉方法抑制P65,P50表达,流式细胞仪,TUNEL方法检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭力.结果:36例喉鳞癌组织中21例p65 mRNA表达上调(58.33%)高于癌旁组织(P=0.012),13例出现p50mRNA表达上调(36.11%),但与癌旁组织比较无显著差异(P=0.602).喉鳞癌组织的p65蛋白表达明显较癌旁组织增强(P=0.044),而p50蛋白表达无显著差异.特异siRNA转染Hep2细胞明显抑制p50,p65基因表达,该作用可持续10天.RNAi抑制p65基因表达使Hep2细胞凋亡率增加,在转染后第7天高达29.89%,与对照组比较升高超过10倍(P=0.020);同时使Hep2细胞侵袭力明显下降(P=0.003),而干涉p50基因对细胞凋亡及细胞侵袭性影响不明显.结论:RNAi抑制p65表达诱导Hep2细胞凋亡、抑制细胞侵袭力,提示抑制p65表达与常规治疗结合可能成为改善喉癌预后的选择.
-
草苁蓉多糖提取物诱导人喉癌Hep2细胞凋亡的实验研究
目的：探讨草苁蓉多糖提取物（BRP）对人喉癌 Hep2细胞的抗瘤作用。方法：采用高通量色谱仪分析多糖提取物成分，流式细胞仪分析细胞周期及凋亡蛋白，western blot 检测细胞凋亡相关蛋白变化。结果：高通量色谱分析仪发现BRP成分单一，BRP对细胞的抑制率呈时间和浓度依赖性。细胞周期分析发现BRP使细胞滞留于G0/G1期。与对照组相比，不同浓度的BRP（100～400μg/ml）明显诱导细胞的凋亡。 Western blot 结果发现 BRP 作用后，pro-caspase-3，pro-caspase-8和pro-caspase-9蛋白分裂增加，同时死亡受体DR5和Bax表达增加，而Bcl-2表达减少。结论：研究发现BRP主要通过使 Hep2细胞周期变化和凋亡来抑制细胞的生长，其途径主要包括线粒体内部途径和死亡受体外部途径来完成。
