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人脐带间充质干细胞对耐亚胺培南铜绿假单胞菌生长的抑制作用
目的 探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)是否抑制耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPA)的生长.方法 将IRPA菌液加入hUCMSCs细胞悬液中设为实验组,将IRPA菌液加入成纤维细胞细胞悬液中为对照组,共培育6 h后采用平板计数法对两组IRPA进行计数并比较;采用蛋白免疫印记技术和酶联免疫法检测两组共培育上清液中抗菌肽LL-37(Cathelicidin/LL-37)及人β防御素2(HBD-2).结果 实验组中的细菌集落数(CFU)低于对照组,差异具有统计学意义 [(2.63 ± 0.58)× 106CFU/ml vs.(3.69 ± 0.91)×106CFU/ml,t=19.93、P=0.031].实验组共培育液中抗菌肽LL-37和HBD-2浓度高于对照组,差异具有统计学意义[抗菌肽LL-37:(7.99 ± 0.45)ng/ml vs.(0.18 ± 0.04)ng/ml,t =78.30、P=0.007;HBD-2:(249.38 ± 14.19)pg/ml vs.(1.00 ± 0.58)pg/ml,t=78.23、P=0.009].结论 人脐带间充质干细胞对耐亚胺培南铜绿假单胞菌生长起抑制作用,其可能通过分泌抗菌肽LL-37和HBD-2来实现.
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人β防御素2评价肺部疾病临床研究进展
人β防御素2(HBD2)是一类在肺部上皮呈可诱导性表达的抗菌肽。由于其抗菌活性和免疫调节功能,HBD2在肺部感染和炎症性疾病中发挥重要作用,可能参与肺部疾病的发生、发展。故检测肺组织或体液中HBD2的水平对临床上指导肺部疾病的诊疗有积极的作用。该文就HBD2的结构、功能及其作为一个炎性因子在评价肺部疾病中临床应用进展予以综述。
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β防御素2在中耳胆脂瘤上皮中的表达及意义
人β防御素2是细菌和前炎性因子刺激下合成表达的抗菌肽,主要分布在感染后的皮肤和黏膜组织中,构成机体抵御微生物的第一道化学屏障,在中耳胆脂瘤形成和发展的免疫学机制中发挥了重要作用.
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人β防御素2在子宫腺肌症患者在位和异位内膜组织中的表达
目的 检测人β防御素2(hBD-2)在正常子宫内膜和子宫腺肌症(AM)患者的在位和异位内膜组织中的基因和蛋白表达.方法 选择AM和非子宫内膜异位症(EMS)的子宫肌瘤患者各25例,分别取AM异位病灶组织(AM异位内膜组)和相应的在位子宫内膜组织(AM在位内膜组)以及子宫肌瘤患者的子宫内膜组织(对照组).采用实时荧光定量PCR检测各组内膜组织中hBD-2和白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素石(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等的基因表达及其相关性,并免疫组化检测其蛋白的表达.结果 将各组的hBD-2、IL-1β、IL-6和TNF-α的基因表达进行比较,AM异位内膜组与AM在位内膜组、AM在位内膜组与对照组之间差异均无统计学意义(P均＞0.05).AM异位内膜组hBD-2和IL-1β的基因表达分别为0.0320(0.0095 ～0.0690)和0.0427(0.0038 ～0.0975),对照组分别为0.0034(0.0025～0.0424)和0.0080(0.0040 ～0.0251),前者均明显高于后者(P值分别为0.032和0.025).AM异位内膜组hBD-2的基因表达与该组的TNF-α的基因表达呈正相关(r=0.857,P=0.014),与IL-1β、IL-6的基因表达无相关性(r值分别为0.750、0.464,P值分别为0.052、0.464).结论 AM的形成可能与异位病灶组织中的hBD-2的表达无明显关系,这可能与AM患者异位病灶组织中炎症因子无明显上调有关.
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寻常型银屑病患者皮损中HBD-2和TNF-α的表达及意义
目的 探讨寻常型银屑病皮损中人β防御素2(HBD-2)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达及其相关性.方法 采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测45例寻常型银屑病患者的皮损组织、非皮损组织以及15例正常人皮肤组织中HBD-2 mRNA及TNF-α mRNA 的表达.结果 寻常型银屑病皮损组HBD-2 mRNA和TNF-α mRNA表达显著高于非皮损组和正常对照组.在皮损组HBD-2 mRNA与TNF-α mRNA 的表达呈正相关,且二者的表达均与患者PASI评分成正相关.结论 HBD-2和TNF-α在寻常型银屑病发病中可能起相互协同的作用,加重了银屑病的炎症反应.
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脂多糖对人鼻黏膜上皮细胞人β防御素2诱导表达的影响
目的 观察脂多糖(LPS)诱导人鼻黏膜上皮细胞人β防御素2(hBD-2)表达的影响.方法 用LPS刺激人鼻黏膜上皮细胞,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测hBD-2 mRNA的表达,免疫细胞化学检测hBD-2蛋白的表达.结果 LPS刺激2h后人鼻黏膜上皮细胞可见hBD-2 mRNA的表达,并呈剂量和时间依赖性;刺激4h后人鼻黏膜上皮细胞胞质中可见hBD-2蛋白的表达.结论 一定剂量的LPS可诱导人鼻黏膜上皮细胞hBD-2的表达,这种表达具有一定的剂量和时间依赖性.
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重组人β防御素2在膀胱上皮细胞中的表达及活性检测
目的 探讨重组人β防御素2(hBD2)真核表达载体在人膀胱上皮细胞中的表达,并观察重组hBD2的体外抗菌活性.方法 采用脂质体转染法将hBD2重组真核表达质粒pCAGG-hBD2导入无血清培养的人膀胱上皮细胞株T24细胞,利用RT-PCR法、Western blotting分别在核酸水平及蛋白质水平检测hBD2的表达.ELISA测定培养上清中hBD2的浓度,菌落计数法检测上清对尿路致病性大肠杆菌(UTI89)和克雷白杆菌(TOP52)的临床分离株的抗菌效果.结果 RT-PCR和Western blotting结果 显示,转染后hBD2可在T24细胞中有效地表达.上清中hBD2的含量为(36.5±3.2)ng/106个细胞,菌落计数法显示,hBD2对UTI89和TOP52临床分离株有显著的杀菌作用.结论 hBD2重组真核表达载体脂质体法转染人膀胱上皮细胞后,可高效表达具抗菌活性的基因重组hBD2.
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尖锐湿疣皮损组织HBD-2、HBD-3、Bcl-2表达变化及意义
目的 探讨尖锐湿疣皮损组织人β防御素2(HBD-2)、HBD-3、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)表达变化及意义.方法 选择尖锐湿疣患者165例(观察组),均给予皮损部位液氮冷冻治疗,将全部疣体皮损清除,并外用康复新液1个月;分别于治疗前及治疗结束时收集皮损组织标本,女性主要选择阴道及大小阴唇等部位疣体组织,男性主要选择肛周及阴茎等部位疣体组织.同期选择皮肤健康志愿者165例(对照组),其中男性标本为包皮环切术后的正常包皮,女性标本为性器官美容整形患者的健康外阴.采用免疫组织化学法检测各组织HBD-2、HBD-3、Bcl-2表达,采用Pearson相关分析法分析尖锐湿疣患者皮损组织HBD-2、HBD-3、Bcl-2表达的关系.结果 观察组治疗前皮损组织HBD-2、HBD-3表达的平均光密度(MOD)值及Bcl-2阳性率均高于对照组(P均<0.01);观察组治疗后皮损组织HBD-2、HBD-3表达的MOD值及Bcl-2阳性率均低于治疗前(P均<0.01).尖锐湿疣患者皮损组织HBD-2、HBD-3表达与Bcl-2表达均呈正相关(r分别为0.709、0.680,P均<0.05),HBD-2与HBD-3表达呈正相关(r=0.671,P<0.05).结论 尖锐湿疣皮损组织HBD-2、HBD-3、Bcl-2表达均上调,三者表达变化参与尖锐湿疣的发生并可反映疾病转归.
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溃疡性结肠炎结肠上皮TLR4和HBD2表达的研究
目的 通过检测UC结肠上皮TLR4、MD2和HBD2的转录与表达,探讨TLR4和HBD2在UC发生发展中的可能作用.方法 选取60例研究对象,其中50例活动期UC设为UC组,10例IBS设为对照组,均在结肠镜下于乙状结肠处取活检行进一步检测.首先进行UC疾病活动度(UCAI)的计算和病理学分级,再免疫组化检测每例结肠上皮的TLR4和HBD2表达,RT-PCR方法测定TLR4、HBD2 mRNA水平,免疫印迹方法检测TLR4蛋白的表达.结果 UC组患者UCAI评分与病理分级呈正相关;免疫组化显示TLR4和HBD2蛋白在UC结肠上皮和炎症细胞中的表达均高于对照组,阳性率与病理学分级呈正相关,且TLR4和HBD2二者表达呈正相关;UC结肠上皮的TLR4、MD2和HBD2 mRNA水平明显高于对照组,也与病理学分级呈正相关.免疫印迹检测表明UC结肠上皮TLR4蛋白表达显著高于对照组,并与病理学分级呈正相关.结论 TLR4和HBD2在活动期UC结肠上皮表达显著上调,且二者呈正相关,这表明UC的发生发展可能与细菌入侵肠上皮进而导致其免疫失衡有关.
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hBD2修饰真皮多能干细胞促进感染创面修复的初步实验研究
目的观察人β防御素2(human β-defensin 2,hBD2)修饰的大鼠真皮多能干细胞(dermal multipotent stem cells,dMSCs)移植后对细菌感染创面修复的影响.方法制作大鼠全层皮肤切割伤伴感染模型,点状注射的方法将hBD2腺病毒载体转染修饰的dMSCs移植到伤口,通过测定痂下菌量及创面愈合面积百分率和创面愈合时间等评价hBD2修饰的dMSCs局部移植的促愈效果.结果和局部单纯移植dMSCs组和单纯损伤组相比,hBD2修饰的dMSCs移植组痂下菌含量低(P＜0.05),且创面愈合时间明显缩短(P＜0.05).结论hBD2修饰的dMSCs可有效地促进大鼠感染创面的修复.
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重组人β防御素2在真皮多能干细胞中的表达及抗菌活性的测定
目的检测重组人β防御素2(human β-defensin 2, hBD2)腺病毒表达载体在大鼠真皮多能干细胞(dermal multipotent stem cells, dMSCs)中的表达,并观察重组hBD2的体外抗菌活性.方法将含有hBD2重组腺病毒转染dMSCs,RT-PCR、荧光免疫化学、Western blotting检测hBD2的表达情况,ELISA测定培养上清中hBD2的浓度,K-B纸片扩散法检测上清对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌等标准菌株的杀灭效果.结果 RT-PCR、荧光免疫化学和Western blotting的结果显示转染后hBD2可在dMSCs中有效地表达,上清中hBD2的浓度为743.6 ng/ml,K-B纸片法显示HBD2对上述标准菌株有明显的杀灭效应.结论 hBD2重组腺病毒表达载体在dMSCs可高效表达,并对大肠埃希菌等标准菌株有杀灭效应.
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HBD-2转基因小鼠的建立及鉴定
人β防御素2(Human beta defensin 2,HBD-2)是人体抗菌肽的重要分子,体外试验研究证明具有广谱抗微生物活性,为开展其在整体水平上的功能研究,建立HBD-2转基因小鼠模型.用分子克隆方法构建了带CMV启动子的HBD-2全长cDNA 真核重组表达质粒pCDNA3.1-HBD2,以此为摸板,PCR扩增出带CMV启动子和BGH polyA 尾的HBD-2基因片段,用显微注射技术将此微基因导入小鼠雄原核中,于M16培养液培养后经输卵管移植到受体鼠体内让其怀孕产生子代小鼠.PCR法检测外源基因在小鼠基因组中的整合,RT-PCR和免疫组化法检测HBD-2在小鼠组织的表达.PCR检测结果显示17只F0代转基因鼠中4只检测到阳性信号,RT-PCR和免疫组化检测显示HBD-2在其F1代转基因小鼠生殖道、呼吸道、泌尿道以及血管内皮等组织部位广泛表达.实验表明HBD-2基因已整合到小鼠基因组且广泛表达,为进一步研究HBD-2的生物学功能及基因调控提供了有用的整体动物模型.
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人β防御素-2与前列腺癌特异性膜抗原嵌合蛋白真核表达质粒构建及其诱导的小鼠特异性免疫应答
探索人β防御素2(hBD-2)和前列腺特异性膜抗原(PSMA)共表达重组核酸疫苗针对前列腺癌的免疫治疗.研究以pcDNA3.1为载体,构建重组质粒pcDNA3.1/PSMA和pcDNA3.1/hBD-2-PSMA,通过RT-PCR和免疫组化检测其表达.免疫小鼠后,进行血清中抗体检测,CD4+、CD8+T淋巴细胞数目测定及CTL特异性杀伤作用检测.结果显示构建的质粒转染COS-7细胞后能表达目的基因,免疫小鼠后能在体内持久表达,可以诱导产生特异性抗体,能有效的刺激T细胞增生,诱导特异性CTL反应.当以hBD-2作为免疫佐剂时,CTL活性更强.本研究成功的构建了含PSMA的表达质粒,免疫小鼠可以诱导出有效的体液和细胞免疫,为前列腺癌的免疫治疗奠定了一定的实验基础.
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人β防御素2(HBD2)与人乳头瘤病毒 HPV16E6羧基端编码基因的克隆及其在真核细胞中的表达
目的构建人β防御素与人乳头瘤病毒HPV16E6羧基端基因的真核表达质粒,并检测其在真核细胞中的表达情况,探讨其作为DNA疫苗治疗宫颈癌的可行性.方法利用分子克隆技术,将HBD2基因片段与HPV16E6羧基端基因片段连接,插入真核表达质粒pcDNA3.1,经测序鉴定后,用阳离子脂质体法转染真核细胞COS7,RT-PCR及免疫组化法检测其表达.结果重组质粒pcDNA 3.1/HBD2-HPV16E6C转染COS7细胞48小时后,RT-PCR扩增出插入的HBD2-HPV16E6C片段,免疫组化染色呈棕黄色阳性反应.结论人β防御素与人乳头瘤病毒HPV16E6羧基端融合基因能在真核细胞中有效表达,为今后进行整体动物DNA免疫试验奠定了基础.
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TLR4和HBD-2在鼻黏膜组织中的表达及意义
目的:探讨Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)mRNA及人β防御素2(human beta-defensin-2,HBD-2)在鼻黏膜组织中的表达及意义.方法:采用核酸分子原位杂交技术和免疫组织化学技术分别检测慢性鼻、鼻窦炎患者鼻黏膜组织中TLR4 mRNA和HBD-2的表达.结果:TLR4 mRNA在病变组鼻黏膜组织中的表达明显强于对照组(P＜0.05).但在病变组中13例Ⅰ型和17例Ⅱ型慢性鼻、鼻窦炎患者的病变鼻黏膜组织中的表达差异无显著性;HBD-2在对照组未见表达,而在病变组均出现不同程度的表达,两组间的表达差异具有显著性(P＜0.01),而且在Ⅱ型病变鼻黏膜组织中的表达明显强于Ⅰ型(P＜0.05).结论:TLR4可能参与了鼻黏膜天然免疫,HBD-2可能是炎症反应的重要产物之一. 致炎因子通过TLR4对病原微生物进行识别,激活鼻黏膜上皮细胞, 终导致炎性细胞产生大量的HBD-2,这可能在鼻黏膜启动有效的炎性免疫反应过程中具有一定的作用.
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人β防御素2腺病毒表达载体的构建及其在大鼠真皮多能干细胞中的表达
目的构建和鉴定人β防御素2(HBD2)的重组腺病毒表达载体,并观察其转染大鼠真皮多能干细胞(dMSCs)后的表达.方法反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HBD2全长cDNA,亚克隆至穿梭质粒(pAdTrack-CMV)中,然后转化含骨架质粒(pAdEasy-1)的大肠杆菌BJ5183,通过同源重组产生腺病毒载体质粒.PacⅠ酶切阳性的重组质粒后转染293细胞,包装出重组病毒载体.用所得重组腺病毒感染dMSCs细胞,并采用RT-PCR和荧光免疫组织化学检测其在dMSCs中的表达情况.结果经测序、酶切及聚合酶链反应(PCR)鉴定,表明已成功地扩增到HBD2全长cDNA,并将其顺序克隆到穿梭质粒和骨架质粒中,进而组装出腺病毒表达载体.经RT-PCR和免疫组织化学证实构建的病毒载体可感染dMSCs,并有效表达HBD2.结论本实验成功地构建了含HBD2基因的腺病毒表达载体,并证实其可在dMSCs中表达.
