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磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基β在胃癌组织中的表达及其临床意义
目的 明确磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基β(phosphoinositide-3 kinase,catalytic subunit beta,PIK3CB)在胃癌组织中的表达,探讨其在胃癌发生发展中的临床意义.方法 应用组织芯片和免疫组织化学技术,检测PIK3CB蛋白在138例胃腺癌组织中的表达,并对PIK3 CB表达与胃癌患者的临床病理特点和预后进行分析.结果 PIK3CB在胃癌组织中阳性表达率为63.8％,癌旁组织中阳性表达率为45.7％,两者相比差异有统计学意义(x2=9.139,P=0.003);PIK3CB高表达与胃癌大小(x2 =8.677,P =0.003)、胃癌浸润深度(x2=9.306,P=0.025)和临床分期(x2=8.242,P=0.041)相关;高表达和低表达PIK3 CB的胃癌患者术后5年累积生存率分别为15.9％和70.3％,中位生存时间分别为30.2个月和60.3个月,差异有统计学意义(x2=25.644,P=0.000).多因素分析显示,PIK3 CB可作为一个独立的预后评估因素(HR=15.785,95％CI:1.943～7.805,P=0.000).结论 PIK3CB表达上调与胃癌的浸润程度和患者的生存时间相关,可看成是评估胃癌预后的一个独立影响因素.
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PI3K/AKT信号传导通路在恶性肿瘤中的研究进展
磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)传导通路是细胞内重要的信号传导通路之一,该通路的过表达常出现在人类恶性肿瘤中,同时在肿瘤的进展中起到非常关键的作用.因此,PI3 K/AKT信号传导通路抑制剂将有可能成为治疗肿瘤的一种可行方法.
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重组人红细胞生成素对癫痫持续状态大鼠海马线粒体凋亡途径相关调控因子的影响及作用机制
目的：观察重组人红细胞生成素（ rHuEPO）对戊四氮（ PTZ）点燃的癫痫持续状态（ SE）的成年雄性（ SD）大鼠海马神经元磷酸化蛋白激酶B（ p-PKB/p-Akt）、Bcl-2相关X蛋白（ Bax）和X-连锁凋亡抑制蛋白（ XIAP）表达的影响，并进一步探讨rHuEPO作用的可能机制。方法于2010年3月，由河北省实验动物中心提供的健康清洁级成年SD大鼠。采用PTZ点燃大鼠SE模型，将大鼠随机分为B组（ PTZ+0.9%氯化钠溶液）、C组（ PTZ+rHuEPO）、D组（PTZ+LY294002+rHuEPO）、E组（PTZ+二甲基亚砜+rHuEPO），同时另选取不进行SE制模的SD大鼠作为A组（0.9%氯化钠溶液），检测大鼠行为学和脑电图的改变；用原位末端转移酶标记技术（ TUNEL）检测海马神经元的凋亡情况；免疫组织化学法观察p-Akt、Bax、XIAP的阳性细胞数；反转录多聚酶链反应（ RT-PCR）方法检测各组大鼠海马Bax信使RNA（ BaxmRNA）的表达；Western blot方法检测各组大鼠海马蛋白激酶 B（ Akt）、p-Akt、XIAP蛋白的表达。结果与B组比较，C组p-Akt、XIAP阳性细胞数和p-Akt、XIAP蛋白表达水平均增多， Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达水平均减少，差异有统计学意义（ P<0.05）；与C组比较，D组p-Akt、XIAP阳性细胞数和p-Akt、XIAP蛋白表达水平均减少，Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达水平均增多，差异有统计学意义（ P<0.05）。结论 rHuEPO可以提高p-Akt、XIAP阳性细胞数及蛋白表达水平，降低Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达水平，减少海马神经元的凋亡，发挥神经保护作用；加入磷脂酰肌醇3激酶（ PI3K）抑制剂LY294002后，海马p-Akt、XIAP阳性细胞数及蛋白表达减少、Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达增加，海马神经元的凋亡增加，减弱了rHuEPO的保护作用。因此，PI3K/Akt信号通路是rHuEPO发挥神经保护作用的通路之一，其作用机制可能是rHuEPO活化PI3K/Akt后，提高p-Akt蛋白及线粒体凋亡途径相关调控因子XIAP的表达，下调了Bax的表达，从而介导线粒体凋亡途经，发挥抗凋亡、促存活的神经保护作用。
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PI3K/AKT激动剂和抑制剂对巨噬细胞炎症反应的影响
近年发现磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸激酶(PI3K/AKT)在重度急性胰腺炎(SAP)的发病中发挥重要作用,但机制尚未明确.目的:探讨PI3K/AKT激动剂胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)和抑制剂wortmannin对巨噬细胞株RAW264.7 Toll样受体4(TLR4)信号通路的影响,阐明PI3K/AKT参与调节SAP炎症反应的作用机制.方法:分别以不同浓度脂多糖(LPS)、IGF-Ⅰ、wortmannin处理RAW264.7细胞,采用CCK-8实验检测细胞活性.RAW264.7细胞分为空白对照组(不予处理)、LPS组(LPS 1μg/mL)、IGF-Ⅰ组(IGF-Ⅰ100 ng/mL+LPS 1μg/mL)、wortmannin组(wortmannin 100 nmol/L+LPS 1μg/mL)和IGF-Ⅰ+wortmannin组(wortmannin 100 nmol/L+IGF-Ⅰ100 ng/mL+LPS 1μg/mL),采用ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)蛋白表达,采用real-time PCR检测TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、AKT、PI3K、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、核因子-κB(NF-κB)mRNA表达.结果:RAW264.7细胞经不同浓度LPS、IGF-Ⅰ、wortmannin处理后,各浓度组间细胞活性无明显差异(P>0.05).LPS组、IGF-Ⅰ组、wortmannin组、IGF-Ⅰ+wortmannin组TNF-α、IL-6表达水平均较空白对照组显著升高(P<0.05);wortmannin组TNF-α、IL-6表达水平较LPS组和IGF-Ⅰ组显著降低(P<0.05);IGF-Ⅰ+wortmannin组TNF-α、IL-6表达水平较IGF-Ⅰ组显著降低(P<0.05).LPS组AKT、PI3K、TLR4及其下游分子MyD88、p38MAPK、NF-κB mRNA表达均显著高于空白对照组(P<0.05);IGF-Ⅰ组上述指标较LPS组进一步升高,差异有统计学意义(P<0.05);wortmannin组上述指标较LPS组和IGF-Ⅰ组显著降低(P<0.05);IGF-Ⅰ+wortmannin组上述指标显著高于wortmannin组(P<0.05),但较IGF-Ⅰ组显著降低(P<0.05).结论:PI3K/AKT可能通过调节巨噬细胞中的TLR4及其下游分子影响促炎细胞因子表达,从而参与SAP炎症反应的发生.
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京尼平苷通过PI3K-Akt途径拮抗黑素细胞氧化损伤
目的 探讨京尼平苷对体外培养的人黑素细胞氧化损伤的拮抗作用,以及PI3K-Akt途径在其中的作用.方法 取健康青少年环切术后包皮,分离并培养表皮黑素细胞.取第2～3代黑素细胞,分为对照组(不做任何处理)、京尼平苷组(125 μmol/L京尼平苷处理)、LY294002组(5μmol/LLY294002处理)、H2O2组(250 μmol/LH2O2处理)、京尼平苷+H2O2组(125 μmol/L京尼平苷处理24 h后,加入250 μmol/L H2O2作用4h)、京尼平苷+LY294002+H2O2组(125 μmol/L京尼平苷处理24 h后,加入5 μmol/L LY294002作用1h,然后用250 μmol/LH2O2作用4h).作用完成后,用噻唑蓝(MTT)法检测黑素细胞增殖活性,Western印迹检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、血红素加氧酶1(HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶1(GPx-1)蛋白的表达,生物化学方法检测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)含量.通过单因素方差分析(ANOVA)对各组间数据进行比较,采用SNK-q检验进行组间两两比较.结果 H2O2组细胞增殖率较对照组明显降低(P＜0.01),p-Akt(P＜ 0.01)、HO-1 (P＜ 0.01)、GPx-1(P＜ 0.05)蛋白表达水平下降,SOD活性、CAT活性降低(均P＜ 0.01),ROS含量显著升高(P＜0.01).与H2O2组相比,京尼平苷+H2O2组黑素细胞增殖率上升(72.98％±8.92％比50.53％±10.85％,P＜ 0.05),p-Akt(P＜ 0.05)、HO-1 (P＜ 0.01)、GPx-1 (P＜ 0.01)蛋白表达上调,SOD[(6.82±1.03) U/mg比(1.29±0.43) U/mg,P＜0.05]和CAT[(46.08±4.16) U/mg比(18.71±3.09) U/mg,P＜0.05]酶活性增高,ROS含量(1 284.33±110.64比2 158±222.75,P＜0.01)减少;京尼平苷+ LY294002+H2O2组黑素细胞增殖率(44.35％±14.85％)较京尼平苷+H2O2组降低(P＜0.05),p-Akt(P＜ 0.01)、HO-1(P＜ 0.05)、GPx-1(P＜ 0.01)蛋白表达下调,SOD活性[(1.31±0.65) U/mg,P＜0.05]和CAT活性[(23.25±5.56) U/mg,P＜0.05]减弱,ROS含量增加(1 668±62.03,P＜ 0.05).结论 京尼平苷可通过PI3K-Akt途径促进黑素细胞HO-1和GPx-1表达,增强SOD和CAT活性,拮抗黑素细胞氧化应激损伤.
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mTOR信号通路在心血管系统中作用研究的进展
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是一种非典型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,它是调控细胞生长、增殖、翻译、代谢及自噬的关键蛋白激酶,初因为其能被雷帕霉素抑制而被认识.研究表明,mTOR在调节心血管系统的生理与病理过程中起到关键的作用.本文重点回顾了mTOR信号通路在心血管系统中作用研究的进展.
关键词： TOR丝氨酸-苏氨酸激酶 磷酸肌醇3-激酶类 心血管系统
