首页 > 文献资料
-
移植肾功能延迟恢复患者尿脱落细胞中穿孔素和粒酶B mRNA定量检测的意义
目的 探讨尿脱落细胞中穿孔素mRNA、粒酶B mRNA检测在移植肾功能延迟恢复(DGF)诊断中的应用价值. 方法 同种异体肾移植DGF患者24例.男15例,女9例.平均年龄37岁.移植肾活检病理分析病因为输尿管梗阻2例、静脉血栓1例、急性环孢素(CsA)中毒3例、急性肾小管坏死(ATN)7例、ATN合并临界改变2例、ATN合并急性排斥反应(AR)3例、AR 6例.移植术后1～14 d留取24例患者73份晨尿标本,应用竞争RT-PCR方法 对患者尿脱落细胞中穿孔素和粒酶B mRNA进行定量检测,应用SPSS13.0软件进行数据分析,mRNA水平用自然对数值表示.结果 24例患者尿脱落细胞中穿孔素和粒酶B mRNA水平在急性CsA中毒、ATN和其他组分别为(-0.76±0.35)、(-0.89±0.30)、(-0.90±0.15)fg/μg和(-0.53±0.22)、(-0.41±0.17)、(-0.73±0.23)fg/μg,组间厕两比较差异均无统计学意义(P>0.05);ATN合并AR组与单纯AR组分别为(1.20±0.39)、(11.13±0.33)fg/μg和(1.07±0.30)、(1.01±0.19)fg/μg,2组比较差异无统计学意义(P>0.05);ATN合并AR、单纯AR组与急性CsA中毒、ATN和其他组比较差异有统计学意义(P<0.001);2例ATN合并临界改变患者尿中穿孔素和粒酶B mRNA平均值分别为1.22、0.97 fg/μg,与ATN合并AR、单纯AR组相近. 结论 DGF患者尿脱落细胞中穿孔素和粒酶BmRNA水平检测有助于DGF的病因诊断,可作为临界改变是否需要进一步干预性治疗的指标之一.
-
可替宁对穿孔素/粒酶B诱导的NCI-H460肺癌细胞凋亡的抑制作用
目的 探讨可替宁对穿孔素/粒酶B( perforin/granzyme B)诱导的NCI - H460非小细胞肺癌细胞凋亡的抑制作用及其机制.方法 以人肺癌细胞株NCI - H460为研究对象.采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色检测细胞生长增殖活性,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染荧光显微镜下观察细胞凋亡形态学变化,异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V -FITC/PI)染色后流式细胞仪定量检测细胞凋亡率,RT - PCR及Western blot法检测凋亡抑制蛋白XIAP及Survivin的表达量.结果 (1)不同浓度可替宁单独作用NCI - H460细胞时未见明显诱导凋亡现象,可显著抑制细胞生长,其抑制率与作用时间和剂量呈正相关.(2)0.25μg/ml浓度穿孔素作用NCI - H460细胞(1×106个)时,PI染核率可达到90％以上.而当加入1.5μl粒酶B(1 μg/ml)孵育6h时,穿孔素/粒酶B组细胞可呈现90％以上的凋亡现象.(3)166ng/ml浓度可替宁作用穿孔素/粒酶B预处理的细胞6h时可见明显凋亡抑制现象,当检测其凋亡抑制蛋白XIAP、survivin表达量时,发现穿孔素/粒酶B组表达量明显降低,可替宁组表达量较高,而当可替宁联合穿孔素/粒酶B时表达量高.结论 可替宁可明显抑制穿孔素/粒酶B诱导的NCI- H460肺癌细胞凋亡现象,这种作用可能与凋亡抑制蛋白XIAP、survivin的表达上调有关.
关键词： 可替宁 NCI - H460肺癌细胞 凋亡 穿孔素 粒酶B -
细胞凋亡的信号转导机制研究进展
细胞凋亡是细胞在一定条件下接受刺激信号并受基因调控的一种自主性、程序性死亡过程.可以发生在生理和病理条件下.关于细胞凋亡的机制,在哺乳动物细胞中主要有以下几条通路:①死亡受体介导的细胞凋亡途径,②线粒体介导的凋亡途径,③内质网介导的细胞凋亡途径,④粒酶介导的细胞凋亡途径,⑤Anoiki介导的细胞凋亡途径.另外,这几条通路后期的共同途径是胱天蛋白酶家族激活.
-
舒林酸提高γδT细胞杀伤胃癌细胞机制研究
目的 探讨舒林酸提高γδT细胞杀伤胃癌细胞的作用机制.方法 常规方法培养γδT细胞,收集培养第9天的γδT细胞用不同浓度的舒林酸(1、2、4、8、16、32 μmol/L)诱导24 h,收集培养上清液用于细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素12(IL-12)检测,沉淀细胞用于穿孔素、粒酶B、NKG2D流式细胞测定和用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测γδT细胞杀伤胃癌细胞株(SGC-7901和BCG-823)活性.每组测试样本和指标均设未加药物诱导的对照组.结果 舒林酸浓度在8 μmol /L时,γδT细胞穿孔素和粒酶B达高[分别为(71.5±5.3)%和(78.3±7.1)%],明显高于对照组[分别为(51.4±7.3)%和(60.9±7.1)%].γδT细胞经不同浓度的舒林酸诱导后培养上清液中IL-12和TNF-α浓度没有差异;舒林酸在8 μmol/L时上清液中IFN-γ浓度达高[(246.1±20.7)ng/L],明显高于对照组[(196.1±13.2)ng/L];当舒林酸浓度达32 μmol/L时,γδT细胞分泌的3种细胞因子明显低于对照组,两者比较有显著性差异(P<0.05).γδT细胞经舒林酸诱导后杀伤SGC-7901和BCG-823细胞活性在8 μmol/L时达到峰值,此时对SGC-7901和BCG-823的杀伤活性分别为 (73.6±3.9)%和(76.3±3.9)%,与对照组[(60.1±3.7)%和(59.2±4.5)%]比较有明显差异(P<0.05).结论 舒林酸诱导后γδT细胞杀伤SGC-7901和BCG-823活性明显增高的机制可能与γδT细胞表达穿孔素和粒酶B及分泌的IFN-γ有关.
-
穿孔素、粒酶B、Fas、Fas-L和Caspase 3在心肌细胞凋亡中的作用和相互关系
目的探讨小鼠移植心脏组织中穿孔素、粒酶B、Fas、Fas-L mRNA以及活性Caspase 3的表达和水平变化,以了解它们在急性排斥反应心肌细胞凋亡中的作用和相互关系.方法利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术、Western免疫印迹(Western Blot)等检测方法,检测了与凋亡发生机理有关的穿孔素、粒酶B、Fas、Fas-LmRNA及活性Caspase 3蛋白的表达和变化.同时,通过组织学分析和TDT介导的原位末端标志(TUNEL)等检测方法,分析了小鼠心脏移植模型急性排斥反应时组织损伤和细胞凋亡的情况.结果Fas在同基因组和异基因组中均有表达,且水平无差异.但Fas-L、穿孔素、粒酶B及Caspase 3只在异基因小鼠心脏移植中出现,术后第1天都开始表达,术后3 d、5 d强烈上调,与组织损伤、细胞凋亡呈直接相关.当使用Caspase抑制剂后,Caspase 3活性随之明显降低(P＜0.01),相应地组织损伤和细胞凋亡指数(AI)也明显减轻(P＜0.01).但其穿孔素、粒酶B、Fas-L却无变化.结论小鼠心脏移植急性排斥反应过程中存在心肌细胞的凋亡,是其损伤的重要机制;FasL、穿孔素、粒酶B以及活化Caspase 3的出现和上调程度与凋亡细胞的数量与急性排斥反应的严重程度直接相关;由细胞毒T淋巴细胞引发的Fas/FasL、粒酶B/穿孔素两种途径介导的细胞凋亡,都必须经过Caspase 3的活化这一共同通道来完成.
-
转位肽/粒酶B融合蛋白基因的构建、表达及对细胞生长的抑制作用
目的:研究转位肽/粒酶B融合蛋白对细胞生长的抑制作用.方法:采用重组PCR法,将绿脓杆菌外毒素(PE)部分转位肽编码序列与活性型粒酶B(GrBa)基因相融合,构建PE Ⅱ-GrBa融合蛋白基因,以粒酶活性中心丝氨酸突变的PE Ⅱ-mGrBa作为阴性对照.将所获重组基因克隆入真核表达载体pcDNA3和pIRES2-EGFP中,以脂质体法瞬时转染Hela等细胞系,通过与GFP共表达,用MTT比色、TUNEL及间接免疫荧光染色,检测PE Ⅱ-GrBa基因的表达对转染细胞的形态和生长的影响.结果:表达PE Ⅱ-GrBa融合蛋白的细胞的细胞骨架发生异常,细胞生长受到抑制,部分细胞呈现凋亡特征.结论:PE Ⅱ-GrBa融合蛋白的表达可抑制细胞生长.
