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肝癌相关成纤维细胞对肝细胞肝癌影响的实验研究
目的 探讨肝癌相关成纤维细胞(hCAF)对肝细胞肝癌(肝癌)转移的影响.方法 分别将hCAF 和正常成纤维细胞(NF)培养2~3 d,行免疫荧光染色,观察hCAF 和NF 细胞中α- 平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞表面蛋白(FSP)、成纤维细胞活化蛋白(FAP)、波形蛋白(vimentin)的表达情况.通过hCAF 与MHCC97L- 绿色荧光蛋白(GFP)、HepG2-GFP 肝癌细胞共培养及划痕实验,观察hCAF 对肝癌细胞的形态变化的影响及其对肝癌侵袭转移能力的作用.结果 hCAF 和NF 细胞均表达α-SMA、FSP、FAP、vimentin,但hCAF 表达α-SMA 与FAP 的水平明显高于NF.hCAF 与肝癌细胞共培养至96 h,MHCC97L-GFP 细胞生长由典型的抱团样成簇生长,变成分散呈播散样生长;HepG2-GFP细胞由多角形的上皮细胞形态转变为长梭形的间质细胞形态.MHCC97L-GFP、HepG2-GFP 肝癌细胞与hCAF 共培养5 d 后划痕明显较NF 组缩小.结论 hCAF 能加速肝癌细胞发生类似上皮细胞间质转型的变化,增强肝癌细胞侵袭转移能力.
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肝癌中肿瘤相关成纤维细胞的分离、培养、鉴定及其对肝癌细胞生物学功能的影响
目的 建立肝癌肿瘤相关成纤维细胞(CAF)分离、培养体系,并予以鉴定,同时进一步探讨CAF对肝癌细胞生物学功能的影响.方法 肝细胞癌(HCC)术后患者的肿瘤组织通过胶原酶消化、离心、重悬等技术手段,分离、纯化CAF.分别通过形态学观察及免疫荧光技术对CAF进行鉴定.在此基础上将分离鉴定的CAF与肝癌细胞株Huh7、HepG2进行共培养,建立CAF与肝癌细胞株体外共培养系统,同时利用CCK-8实验观察CAF对Huh7、HepG2细胞增殖的影响;利用Transwell实验分析CAF对Huh7、HepG2细胞侵袭能力的影响.结果 分离、培养成功的CAF形态学表现为长梭状或纺锤状,细胞体积与细胞核较其他细胞明显偏大.免疫荧光结果显示CAF特殊标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白均呈强阳性,并主要表现为胞膜染色.而肝癌细胞表面的特殊标志物甲胎蛋白(AFP)及血管内皮细胞表面特殊标志物CD31均阴性.Huh7、HepG2的增殖和侵袭能力明显增强.其中CAF与Huh7和HepG2细胞共培养24 h后,空白组与实验组中的细胞增殖率分别为(63±4)%、(78±5)%和(69±5)%、(81±3)%,差异均有统计学意义(均P<0.05).CAF增强Huh7和HepG2穿膜能力,空白组与实验组中的穿膜细胞数目分别为(59.4±3.1)、(162.9±3.9)个和(104.8±2.6)、(166.4±4.2)个,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 HCC患者肿瘤组织中分离、培养的细胞为CAF.CAF形态结构及蛋白表达等具有特异性,并促进肝癌细胞的增殖和侵袭.
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34βE12 CD10及SMMHC在乳腺良恶性病变鉴别诊断中的意义
目的 探讨乳腺肌上皮细胞标记物平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)、34βE12、CD10在乳腺良、恶性上皮性病变鉴别诊断中的意义.方法 用免疫组织化学方法检测肌上皮细胞标记物SMMHC、34βE12及CD10在60例乳腺良、恶性病变中的表达.分析其与乳腺良、恶性上皮病变的关系及意义.结果 34βE12、CD10和SMMHC在乳腺良性病变中的表达率均为100%;在乳腺癌中的表达率分别为26%、30%、35%;三者阳性表达率及其强度在良性病变与癌组之间差异有统计学意义(P<0.05);并且在乳腺癌中,SMMHC与34βE12和CD10相比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 SMMHC、34βE12及CD10可作为乳腺病变鉴别诊断中肌上皮细胞的标记物,但SMMHC在标记乳腺肌上皮细胞时特异性及敏感性均优于34βE12和CD10.
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半夏白术天麻汤水提取物对大鼠血管平滑肌肌球蛋白轻链磷酸酶水平的影响
[目的]观察半夏白术天麻汤水提取物对氟化钠诱导的血管平滑肌肌球蛋白结合亚单位( MYPTl)和肌球蛋白轻链(MLC20)磷酸化的影响.[方法]采用SDS-PAGE和Urea-PAGE方法,观察半夏白术天麻汤水提取物对MYPT1和MLC20磷酸化水平的影响.[结果]半夏白术天麻汤水提取物抑制氟化钠诱导的MYPT1和MLC20磷酸化水平.[结论]半夏白术天麻汤水提取物可抑制由氟化钠诱导的MYPT1和MLC20磷酸化水平.
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输尿管不全梗阻大鼠输尿管平滑肌损伤及肌球蛋白表达变化的临床意义
目的 观察大鼠输尿管不全梗阻3周内输尿管形态、平滑肌细胞结构及肌球蛋白表达变化,为临床判断输尿管不全梗阻患者的输尿管功能提供依据.方法 选择SD大鼠120只,随机分为对照组30只、假手术组45只、模型组45只.模型组参照腰大肌隧道包埋法制备右侧输尿管不全梗阻模型,假手术组假手术处理,对照组不予处理.模型组造模1、2、3周,观察各组输尿管及肾脏形态,测量右侧输尿管直径,采用HE染色观察输尿管平滑肌组织细胞结构变化,采用免疫组化SP法检测输尿管平滑肌肌球蛋白表达,采用qRT-PCR法检测输尿管平滑肌肌球蛋白重链mRNA相对表达量.结果 模型组造模1、2、3周近端输尿管逐渐增粗,肾脏体积逐渐增大、张力逐渐升高;右侧输尿管直径逐渐增加,且均大于对照组和假手术组(P均<0.01).HE染色结果显示,模型组近端输尿管梗阻时间越长,平滑肌细胞肌层越薄、细胞越少、纤维增生越明显.模型组造模1、2周输尿管平滑肌肌球蛋白表达量及肌球蛋白重链mRNA相对表达量均高于对照组和假手术组,造模3周均低于对照组和假手术组(P均<0.01);造模1、2、3周,模型组平滑肌肌球蛋白表达量及肌球蛋白重链mRNA相对表达量各时间点两两比较P均<0.01.结论 输尿管不全梗阻时间越长平滑肌损伤越重;梗阻超过2周将出现输尿管功能不可逆性损伤.
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广王不留行醇提物对大鼠慢性膀胱颈梗阻模型逼尿肌肌球蛋白表达的影响
目的 研究益肾通方中单味中药广王不留行醇提物对大鼠慢性膀胱颈梗阻模型逼尿肌中的平滑肌肌球蛋白表达的影响,探讨其影响平滑肌细胞分子病理学改变方面的作用及意义.方法 将实验大鼠随机分为空白组、造模组、实验组各15只.参照文献资料制作大鼠膀胱颈梗阻模型.其中空白组未进行造模而给药,造模组造模不给药,实验组造模并给药.应用半定量RT - PCR法检测平滑肌肌球蛋白的表达水平.结果 电泳鉴定结果显示平滑肌肌球蛋白的表达空白组条带清晰,造模组弱,而实验组介于两者之间.结论 动物实验提示广王不留行醇提物可能通过抑制膀胱逼尿肌平滑肌细胞的退化状态,从而改善逼尿肌功能.
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糖尿病大鼠肾间质TGF-β1和α-SMA的表达与细胞外基质沉积的关系
目的:观察糖尿病大鼠肾小管间质中转化生长因子(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达与纤维连接蛋白(FN)和胶原Ⅲ型(ColⅢ)沉积的关系.方法:大鼠随机分为正常对照组(A组),糖尿病1周组(B组),糖尿病2周组(C组),糖尿病1月组(D组)和糖尿病2月组(E组).用免疫组化方法检测肾间质TGF-β1、α-SMA、FN和ColⅢ,PAS染色观察肾组织形态学改变,生化法测定大鼠血糖、血脂、血尿肌酐以及尿蛋白.结果:糖尿病2周开始肾小管见TGF-β1表达,并随病程进展而逐渐增多.糖尿病1月肾间质中见FN和ColⅢ沉积开始增多,2月时更多,且可见肾间质中有α-SMA表达;FN和ColⅢ增多与TGF-β1、α-SMA呈正相关.结论:TGF-β1刺激α-SMA的表达,从而促进糖尿病大鼠肾小管间质FN和ColⅢ的沉积.
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黄芪当归在肾小管间质纤维化大鼠模型中的作用
目的:探讨黄芪、当归在肾间质纤维化大鼠模型中的作用及机制.方法:采用单侧输尿管结扎术(UUO)致肾间质纤维化大鼠模型,将大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、依那普利(ACEI)治疗组、黄芪当归治疗组.手术后第9天处死大鼠,经免疫组化方法观察各组大鼠肾脏平滑肌肌球蛋白(α-SMA)的表达,Masson染色评定各组肾小管间质损伤指数.结果:模型组α-SMA的表达及肾小管间质损伤指数明显高于假手术组(P＜0.01),而ACEI治疗组、黄芪当归治疗组明显低于模型组(P＜0.01),两治疗组间无显著差别(P＞0.05).结论:黄芪、当归合剂可通过抑制成肌纤维细胞的形成,在肾间质纤维化中发挥和ACEI相类似的肾保护作用.
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输尿管不全梗阻时段平滑肌肌球蛋白表达的研究
目的 探讨输尿管不全梗阻时间与平滑肌肌球蛋白表达量的关系.方法 120只SD大鼠随机分为正常组30只,模型组与实验组各45只;模型组麻醉后切开腹部,游离右侧输尿管下段约2.0 cm,分离出右侧腰大肌隧道,不做包埋,缝合切口;实验组在模型组基础上实施右侧输尿管下段腰大肌隧道包埋;术后1、2、3周各组随机处死部分大鼠,观察不同时段输尿管形态结构变化并检测平滑肌肌球蛋白表达.结果 正常组与模型组右侧输尿管直径比较差异无统计学意义(P＞0.05),其与实验组比较差异有统计学(P＜0.01);实验组梗阻近端输尿管随时间延长增粗,第3周为显著(P＜0.01),平滑肌肌球蛋白表达也逐渐增加,2周时明显,第3周却显著降低,低于正常组与模型组(P＜0.01).结论 输尿管不全梗阻超过2周,平滑肌肌球蛋白表达显著降低,管壁不可逆性改变较为明显.
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厚朴对兔离体胃肠平滑肌运动的影响
目的:研究厚朴对兔离体胃肠平滑肌运动的作用.方法:采用Magnus实验装置,用BL-410生物信号记录系统同步记录胃、肠平滑肌的活动变化曲线,待活动稳定后记录5min作为对照,然后观察药物对其作用30～35 min曲线变化并与对照组比较.结果:给厚朴煎剂后,十二指肠平滑肌收缩的幅度、频率和张力均降低,与对照组比较差异显著(P＜0.05或P＜0.01);但对胃底条平滑肌的张力明显升高,与对照组比较差异显著(P＜0.05或P＜0.01).结论:厚朴对十二指肠平滑肌有松弛作用,而对胃底平滑肌的运动具有增强作用,促进胃蠕动,有利胃排空.厚朴并对乙酰胆碱所致的十二指肠平滑肌加强有明显拮抗作用.厚朴增加胃底平滑肌张力作用可被阿托品阻断.厚朴对胃肠平滑肌运动的此作用可能部分是由M受体所介导.
