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癌基因SKA3在肝癌细胞增殖调控中的作用及机制
目的 探讨癌基因纺锤体与着丝粒相关蛋白3(SKA3)在肝癌细胞增殖调控中的作用及机制.方法 采用Western blot和RT-PCR检测肝癌组织和细胞SKA3表达水平.采用慢病毒感染构建SKA3过表达组(Huh7-SKA3)和对照组(Huh7-Vector),构建SKA3干扰组(Huh7-shSKA3)和对照组(Huh7-Scramble)细胞模型.采用MTT法和细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot和RT-PCR检测细胞周期相关蛋白的表达.实验数据比较采用t检验.结果 肝癌组织和Huh7肝癌细胞SKA3蛋白表达明显增强,mRNA表达量分别为15.46±2.10、9.26±0.80,明显高于正常肝组织和LO2正常肝细胞的1.48±0.17、1.11±0.07(t=6.58,10.08;P<0.05).细胞生长曲线显示过表达组细胞的增殖能力明显强于对照组,干扰组细胞的增殖能力低于其对照组.过表达组细胞克隆数为(259±20)个,明显高于对照组的(97±11)个(t=9.12,P<0.05),干扰组细胞克隆数为(11±2)个,明显少于对照组的(97±11)个(t=-8.13,P<0.05).过表达组G2/M期和S期细胞比率分别为(5.5±0.6)％和(41.9±3.6)％,对照组相应为(15.8±1.5)％和(31.9±3.3)％,差异有统计学意义(t=-10.89,6.39;P<0.05),而干扰组G1/G0期和S期细胞比率分别为(71.7±6.1)％、(20.2±2.9)％,对照组相应为(53.4±5.4)％、(31.3±4.2)％,差异有统计学意义(t=8.59,-5.17;P<0.05).结论 SKA3在肝癌中高表达,可促进肝癌细胞增殖,可能与促进细胞周期G1期进入S期有关.
