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伊贝沙坦对糖尿病大鼠骨质疏松影响的实验研究
目的 探讨伊贝沙坦对糖尿病大鼠骨质疏松的干预作用及其机制.方法 雄性SD大鼠按体重随机分为正常对照组(C组)、糖尿病组(D组)、伊贝沙坦治疗组(I组).糖尿病大鼠模型经单剂量腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制成.所有大鼠均给以普通饲料喂养,I组大鼠每天以伊贝沙坦15mg·kg-1·d-1灌胃,C组和D组大鼠每天予等量生理盐水灌胃,第12周末,测体重及血糖,处死大鼠后取骨,应用显微镜观察骨组织显微结构和进行骨组织形态密度计量学分析,用双能X线骨密度测量仪(DEXA)测定大鼠股骨骨密度(BMD),采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组骨组织OPG mRNA及RANKL mRNA的表达.结果 12周末,D组和I组大鼠骨组织光镜下均出现骨质疏松表现,I组骨质疏松程度比D组轻.骨组织定量分析显示,MTVT在D组及I组均显著低于C组(P<0.01),MTPS在D组及I组均显著高于C组(P<0.01).I组与D组大鼠骨组织相比,MTPT显著增加及MTPS显著降低(P<0.01).骨密度的测定结果发现,与C组大鼠比较,D组和I组大鼠骨组织BMD值显著降低(P<0.01);而I组大鼠骨组织BMD值又较D组显著增加(P<0.01).骨组织RT-PCR结果显示,与c组相比,D组和I组大鼠骨组织中OPG mRNA表达水平明显降低(P<0.01),RANKL mRNA表达水平明显升高(P<0.01);I组大鼠骨组织中OPG mRNA的表达则明显高于D组(P<0.01).而RANKL mRNA在I组和D组间差异不显著.结论 伊贝沙坦可使糖尿病大鼠骨组织降低的OPG mRNA表达水平得以部分恢复,上调OPG/RANKL比值,这可能与伊贝沙坦的改善糖尿病大鼠骨质疏松的效应有关.
关键词： 糖尿病大鼠 骨质疏松 伊贝沙坦 骨保护素 核因子-KB受体活化因子配体 -
脂多糖刺激对牙周膜细胞培养上清中RANKL和OPG水平改变的影响
目的 检测脂多糖(LPS)刺激后,体外培养人牙周膜细胞分泌核因子-kB受体活化子配体(RANKL)和骨保护素(OPG)浓度的变化,探讨其对牙槽骨吸收的直接影响.方法 组织块法原代培养正常人牙周膜细胞并进行来源鉴定.以10mg/ml LPS刺激第4代细胞,在不同时间段(0h,4h,8h,12h,24h)用酶联免疫吸附实验(ELlSA)检测RANKL和OPG在-细胞培养上清中的含量,并进行统计学分析.结果 ELISA结果显示正常牙周膜细胞培养上清中可检测到少量RANKL和OPG,LPS刺激后RANKL的表达则随时间延长而逐渐增强,且4h、8h、12h、24h时间点各实验组均与对照组有显著差异(P＜0.01).各实验纽之间,8h、12h两时间点有显著差异(P＜0.05),其他时间点之间无显著差异(P＞0.05)；而LPS刺激后不同时间OPG的含量未见显著变化(P＞0.05).未经LPS刺激的牙周膜细胞培养上清中可检测到少量RANKL和OPG,但随时间延长无显著变化.结论 体外培养牙周膜细胞在LPS刺激后一定时间内RANKL表达增强,而OPG表达无明显变化.
关键词： 人牙周膜细胞 脂多糖 骨保护素 核因子-KB受体活化因子配体 ELISA -
蓉黄颗粒对非透析肾虚湿热证慢性肾脏病矿物质和骨异常患者血清OPG、RANKL水平的影响
目的:观察非透析慢性肾脏病矿物质和骨异常(CKD-MBD)肾虚湿热证患者血清骨保护素(OPG)、核因子-kB受体活化因子配体(RANKL)水平的变化及蓉黄颗粒对其干预作用.方法:将70例非透析CKD-MBD肾虚湿热证患者随机分为治疗组和对照组各35例,实际完成61例,治疗组30例,对照组31例,并设正常组20例.治疗组和对照组均给予对症治疗,治疗组加服蓉黄颗粒,每天3次,每次1袋,疗程均为8周.观察两组患者临床疗效、治疗前后尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、肾小球滤过率估算值(eGFR)、血钙(Ca)、血磷(P)、碱性磷酸酶(ALP)、全段甲状旁腺激素(iPTH)、OPG及RANKL水平的变化情况.结果:治疗组临床疗效显著优于对照组(P<0.01);两组中医证候积分值均随疗程的增加逐渐下降(P<0.01),而治疗组下降幅度均显著优于对照组(P<0.01).治疗后,治疗组BUN、Scr、eGFR、Ca、P、iPTH及ALP水平均显著改善(P<0.05或P<0.01);对照组除BUN、iPTH改善显著(P<0.05或P<0.01)外,其余各项指标均无明显改善(P>0.05);治疗后治疗组各项指标亦均显著优于对照组(P<0.05或P<0.01).治疗前两组患者血清OPG及RANKL水平均显著高于正常组(P<0.01);治疗后,治疗组血清OPG、RANKL水平及OPG/RANKL比值均显著改善(P<0.05或P<0.01),对照组仅OPG/RANKL比值明显上升(P<0.01),且治疗组各项指标均显著优于对照组(P<0.05或P<0.01).结论:非透析CKD-MBD肾虚湿热证患者OPG及RANKL水平均显著高于正常人群,OPG/RANKL比值低于正常人群;蓉黄颗粒具有改善非透析CKD-MBD肾虚湿热证患者临床症状、有效纠正钙磷代谢紊乱、保护肾功能的作用,其机制可能与其降低血清 OPG、RANKL 水平,升高 OPG/RANKL比值有关.
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抗RANKL多克隆抗体抑制T细胞介导的破骨细胞形成的体外研究
目的:探讨抗核因子-KB受体活化冈子配体(RANKL)多克隆抗体对T细胞介导的破骨细胞形成的影响.方法:制备兔抗鼠RANKL多克隆抗体,使用不同浓度的抗体(1、5及10μg/mL),观察小鼠重组RANKL诱导的破骨细胞形成,显微镜下计数抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)阳性多核细胞数/孔;体外分离、纯化、扩增大鼠的颈T淋巴细胞,给予不同浓度的兔抗鼠RANKI.特异性抗体进行干预,取其上清和T细胞,分别与RAW 264.7细胞共同培养,TRAP法测定T细胞介导的破骨细胞形成,显微镜下计数TRAP(+)多核细胞数/孔:ELISA测定细胞上清中的可溶性RANKL浓度(sRANKL,pg/mL).实验结果采用SPSS 11.5软件包进行统计学分析.结果:兔抗鼠RANKI,抗体既可减少RANKL诱导的TRAP(+)多核细胞数,也可减少T细胞介导的TRAP(+)多核细胞数,5μg/mL及10μg/mL抗体组差异显著(P<0.05),且呈浓度依赖性;上清中检出 sRANKL的浓度与不加抗体对照组相比明显降低,具有统计学意义(P<0.05).结论:抗RANKL特异性抗体可通过减少sRANKL的表达水平,直接阻断RANKL与核因子-KB受体活化因子(RANK)的结合,降低T细胞介导的破骨样细胞吸收.
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维甲酸对小鼠T细胞增殖及骨破坏因子RANKL表达的研究
目的 探讨全反式维甲酸对体外培养的小鼠T淋巴细胞的增殖及核冈子-KB受体活化因子配体(RANKL)表达的调节作用及相关机制.方法 体外分离Aa感染的BALB/C小鼠颈T淋巴细胞,分别加入浓度为0、1×10-8、1×10-7、1 ×10-6、1×10-5mol/L的全反式维甲酸,培养3 d后,取100μ上清保存在-70℃冰箱中,以备sRANKL及IL-10等细胞因子的测定;另加入100μl含有3H thymidine(0.5μCi/孔)RPMI培养液继续培养18 h,进行T细胞3H增殖率测定.结果 维甲酸处理组与非处理组相比,T细胞3H增殖率下降;上清中RANKL的表达水平下降,IL-10的表达水平增强(P<0.05),二者具有负相关性(r=-0.774,P=0.001),且呈剂量依赖性.结论 维甲酸可通过上调IL-10的表达并下调T细胞上的RANKL的表达水平,抑制T细胞的免疫功能,且呈剂量依赖性.
关键词： 全反式维甲酸 T细胞 伴防线放线杆菌 核因子-KB受体活化因子配体 免疫反应 -
c-Src在RANKL诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移中的作用
目的 探讨非受体酪氨酸激酶c-Src在核因子-kB受体活化因子配体(RANKL)诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移中的作用.方法 流式细胞仪检测MDA-MB-231细胞表面受体核因子-kB受体活化因子(RANK)蛋白的表达及RANKL刺激后细胞p-Src及c-Src的表达;Transwell法测定细胞迁移能力.结果 MDA-MB-231细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导MDA-MB-231细胞迁移能力增强.应用RANKL的圈套受体OPG可阻断RANKL诱导的细胞迁移.RANKL刺激后MDA-MB-231细胞p-Src表达升高,应用Src激酶抑制剂PP2可显著抑制RANKL诱导的细胞迁移.结论 c-Src信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移.
关键词： c-Src 核因子-KB受体活化因子配体 乳腺肿瘤 迁移 -
生长激素对实验大鼠牙齿移动过程中RANKL、BMPs表达的影响
目的:探讨生长激素(GH)对实验大鼠牙齿移动过程中RANKL和BMPs表达的影响. 方法:将40只7周龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组(C)和实验组(E).50 g力值用于近中移动左侧上颌第一磨牙.E组和C组分别腹部皮下注射GH(0.15 IU/kg/d)和等量的生理盐水.大鼠分别在第3、7、10、14 d处死.上颌第一磨牙及其牙周组织切片行RANKL、BMPs免疫组织化学染色,并进行图像分析和统计. 结果:实验组在第3 d和第7 d RANKL表达明显增强(P<0.05),在第10 d和第14 d BMPs表达与对照组相比有显著性差异(P<0.05).结论:短期注射生长激素可改变牙周组织内RANKL和BMPs的表达,表明GH参与了正畸牙齿移动过程中的骨改建.
关键词： 生长激素 牙齿移动 核因子-KB受体活化因子配体 骨形成蛋白 -
舒洛地特对糖尿病大鼠骨质疏松症的影响
目的:评价低分子肝素类抗凝药物舒洛地特(Sulo-dexide)对糖尿病大鼠骨质疏松症的影响.方法:将SD大鼠随机分为3组:正常对照组(C组)、糖尿病模型组(D组)、舒洛地特治疗组(S组).D组给予腹腔注射单剂量链脲佐菌素(STZ)诱导;S组每日给予舒洛地特10 ms/(kg·d)灌胃;C,D组大鼠每日给予等量生理盐水灌胃,观察12 wk后各组大鼠体质量及血糖变化.应用显微镜观察大鼠骨组织显微结构并进行骨组织形态密度计量学分析,用双能X线骨密度测量仪(DEXA)测定股骨骨密度(BMD).采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨组织骨保护素(OPG)mRNA,核因子-KB受体活化因子配体(RANKL)mRNA的表达.结果:12 wk末光镜下均可见D,S组骨组织骨质疏松表现,且2组骨质疏松程度相似.D,S组平均骨小梁厚度(MTPT)均显著低于C组(P<0.01);平均骨小梁间距或弥散度(MTPS)均显著高于C组(P<0.01);S组与D组骨组织相比较,MTPT及MTPS无显著性差异.与C组相比较,D,S组骨组织BMD值显著降低(P<0.01);S组骨组织BMD值与D组无显著性差异.D,S组骨组织OPG mRNA明显低于C组(P<0.05),但RANKLmRNA表达均高于C组(P<0.05).D组与s组相比较,OPGmRNA及RANKL mRNA的表达无显著性差异.结论:糖尿病大鼠存在明显骨量减少和骨质疏松,舒洛地特对糖尿病大鼠骨质疏松症的骨质改变无明显影响.
关键词： 糖尿病大鼠 骨质疏松症 舒洛地特 骨保护素 核因子-KB受体活化因子配体
