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多胺代谢与大鼠心肌缺血再灌注损伤关系的实验研究
目的 观察缺血再灌注不同时期大鼠心肌多胺代谢变化规律,探讨多胺代谢与心肌缺血再灌注损伤的关系.方法 采用结扎冠状动脉方法复制大鼠在体心肌缺血再灌注损伤模型,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western免疫印迹(Western blot)方法分别测定正常、缺血再灌注2 h、6 h、12 h和24 h时心肌鸟氨酸脱羧酶(ODC)和精胺/精脒乙酰转移酶(SSAT)mRNA的转录和蛋白表达水平,并用高效液相色谱仪测定多胺含量变化.结果 心肌缺血再灌注后ODC和SSAT mRNA的转录和蛋白表达均上调,至再灌注24 h时,与假手术组比,ODC mRNA和SSAT mRNA转录分别增加了3.1倍和3.8倍(P＜0.01),ODC和SSAT的蛋白表达分别增加了3.1倍和2.9倍(P＜0.01).精胺、精脒和多胺总代谢池含量减少,至再灌注24 h时,分别比假手术组少了33.6%、35.3%和32.9%,而腐胺多了58.9%(P＜0.01).结论 心肌缺血再灌注损伤可导致多胺代谢失衡,二者密切相关.
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多胺代谢在临床研究中的意义及进展
多胺广泛分布于生物组织和体液中,参与体内多种生理和病理过程,具有促进细胞分化、增生、生长,对维持细胞膜和线粒体的完整性、DNA和RNA结构的稳定性,以及在基因表达、信号转导、调节蛋白合成过程等方面都具有重要意义.本文就多胺的代谢在临床工作研究中的意义及进展加以综述.
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多胺对人及哺乳动物生殖调控作用
多胺(polyamines)是带有正电荷的脂肪族化合物,通过结合DNA、RNA和蛋白质等,参与人及哺乳动物的基因表达调控、细胞信号传导等.多胺可影响下丘脑-垂体-性腺轴激素的分泌,进而影响生殖细胞质量、黄体形成及胚胎发育,对人及哺乳动物生殖过程发挥调控作用,但是其具体作用机制,迄今尚未阐明.笔者拟就多胺的生物合成,人及哺乳动物体内分布及其来源,对精子发生、卵子形成、囊胚着床及发育作用的新研究进展进行综述,旨在为多胺用于辅助生殖技术(ART)中,改善妊娠结局提供依据.
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多胺生物合成抑制剂对Hep-2细胞生长及端粒酶活性影响的研究
目的观察多胺生物合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸(difluoromethylornithine,DFMO)对人喉鳞状细胞癌细胞Hep-2生长特性及端粒酶活性的影响,以期为抑制多胺生物合成逆转肿瘤恶性表型的分子机理寻找线索.方法根据细胞形态、细胞生长曲线及流式细胞计(flow cytometer)观察分析Hep-2细胞生长状况;用端粒酶重复序列扩增法(telomerase repeat amplification protocol,TRAP)检测Hep-2细胞端粒酶活性.结果 DFMO (2.5 mmol/L或5 mmol/L,5 d)处理Hep-2细胞,其生长受到明显抑制;G1期细胞增多,而S期细胞减少;细胞形态及FCM证明有细胞凋亡诱导;端粒酶活性受到明显抑制.当用腐胺与DFMO同时处理Hep-2细胞时可防止上述变化的发生.结论多胺生物合成抑制剂可引起Hep-2细胞的增殖抑制及凋亡诱导,这些变化与端粒酶活性的抑制有关.提示端粒酶的抑制可能是抑制多胺生物合成导致肿瘤恶性表型逆转的重要因素.
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鸟氨酸脱羟酶抗酶抑制因子-1高表达对小鼠黑素瘤B16-F1细胞增殖的影响
目的:研究鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1 (ornithine decarboxylase antizyme inhibitor-1,OAZI-1)高表达对小鼠黑素瘤B16-Fl细胞增殖的影响.方法:采用巢氏PCR法从小鼠肝癌H22细胞cDNA中克隆出小鼠OAZI-1基因,并构建重组质粒pcDNA3.1(+)/OAZI-1.采用脂质体转染法将重组质粒转染入B16-Fl细胞后,Western印迹法和实时荧光定量PCR法鉴定高表达OAZI-1的B16-Fl细胞株.MTT法和FCM检测OAZI-1高表达对B16-Fl细胞增殖和细胞周期的影响.反相高效液相色谱检测OAZI-1高表达对细胞内多胺水平的影响.化学发光法检测细胞内精胺氧化酶(spermine oxidase,SMO)的活性.结果:成功获得高表达.AZI-1的B16-Fl细胞克隆株B16/over,该细胞中OAZI-1在mRNA水平的表达量是转染空载体质粒对照组细胞B16/3.1的3.6倍.B 16/over细胞中,鸟氨酸脱羧酶抗酶(ornithine decarboxylase antizyme,OAZ)的mRNA表达水平降低,鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)的rnRNA表达水平升高.高表达OAZI-1能促进B16-Fl细胞增殖,并影响细胞周期,G0,/G1期细胞减少而S期和G2/M期细胞增加.B16/over细胞中腐胺的含量明显增加,精脒和精胺的含量减少,而且SMO活性升高.结论:OAZI-1高表达可能通过增加细胞内腐胺含量,促进黑素瘤细胞增殖,提示该抑制蛋白可能成为黑素瘤治疗的一个潜在靶点.
