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血管平滑肌细胞细胞周期素依赖性激酶抑制因子的调节
目的阐明有丝分裂源激活的蛋白激酶(MAPK)和磷脂酶C(PLC)通路在调节细胞周期素依赖性激酶抑制因子(CKI)p27,p21,p57蛋白表达量中的作用及其对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响.方法分离SD大鼠主动脉中层平滑肌,贴壁法培养平滑肌细胞,无血清培养基培养静止后,分别加入血小板源性生长因子(PDGF)(20 ng/ml)、PDGF+PD98059(20 ng/ml +20 mmol/L)、PDGF+硫酸新霉素(20 ng/ml+10 mmol/L)等刺激因素,以无血清培养基培养的VSMC作对照.在刺激后90 min收集细胞,用免疫沉淀法检测MAPK(p44/p42)活性的改变.在刺激后6和24 h收集细胞,用Western蛋白印迹法检测p27、p57和p21蛋白表达量.结果 PDGF刺激后,MAPK活性明显升高(较对照组增加46.6%),同时VSMC明显增殖.刺激24 h后,细胞增殖程度为对照组的1.43倍,p27蛋白的表达量显著下降至对照组的71%;p21和p57蛋白表达量却明显增加;加用PD98058(MAPK抑制剂)和新霉素(PLC抑制剂)可明显抑制PDGF引起的上述改变,MAPK活性分别较PDGF刺激组下降了46%和37%,p27蛋白表达量则分别为PDGF刺激组的1.77倍和1.49倍,细胞增殖程度分别降为后者的68%和65%.结论 MAPK(p44/42)变化的幅度是决定CKI表达量和VSMC增殖的关键因素.PLC通路在PDGF刺激VSMC增殖信号转导中同样起关键作用.
关键词： 细胞 肌 平滑 血管 有丝分裂素激活蛋白激酶类 磷脂酶C 细胞周期蛋白依赖激酶类 -
1,25二羟基维生素D3对肺腺癌细胞株生长及凋亡的影响
目的:研究1,25二羟基维生素D3[1,25(OH)2VitD3]对肺腺癌细胞株A549生长及凋亡的影响.方法:应用流式细胞仪、免疫组织化学和RT-PCR等方法观察1,25二羟基维生素D3对人肺腺癌A549细胞株生长、细胞周期、调控细胞周期基因和调控凋亡基因表达水平的影响.结果:1 μmol/L的1,25二羟基维生素D3对A549细胞的生长有抑制作用,1 μmol/L的1,25二羟基维生素D3作用后A549细胞G1期比例由59.7%增加至73.2%,P=0.001;S期比例由26.4%降至21.1%,P=0.018;细胞凋亡率由2.6%增至7.2%,P=0.015;可明显上调Fas/FasL的表达量,下调bcl-2表达量;可抑制细胞周期蛋白D1的表达量由0.762减至0.207,P=0.001;同时抑制细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4的表达量由0.642减至0.129,P=0.002.但较低浓度的1,25二羟基维生素D3上述作用不明显.结论:1 μmol/L的1,25二羟基维生素D3可通过多种途径发挥抗肺腺癌作用.
关键词： 骨化二醇 肺肿瘤 细胞凋亡 细胞周期蛋白D1 细胞周期蛋白依赖激酶类 -
2001年诺贝尔生理学或医学奖获得者及其研究成果简介
介绍3位英美科学家因发现调控细胞周期的关键分子,获2001年诺贝尔生理学或医学奖.这一基本发现对于全面了解细胞的生长过程具有重大意义,多数生物医学研究课题将因之受益,并会在许多不同领域得到应用.从长远来看,有可能为癌症治疗开辟新的途径.
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DNA依赖性蛋白激酶在石英诱导的细胞周期蛋白E和细胞周期蛋白依赖激酶2蛋白表达及细胞周期改变中的作用
目的 探讨DNA依赖性蛋白激酶(DNA dependent protein kinase,DNA-PK)在石英诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)中细胞周期蛋白E(CyclinE)、细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)蛋白表达及细胞周期改变中的作用.方法 200μg/ml石英处理阴性对照细胞(H-NC)及采用RNAi技术分别抑制DNA-PKcs和Ku80蛋白表达的细胞系(H-PKcs和H-Ku80)0、3、6、12、24 h,采用流式细胞术检测石英刺激24 h不同细胞系的细胞周期变化情况,免疫印迹(Western blot)技术检测不同细胞系各时间点CyclinE、CDK2蛋白的表达水平,并用Image-Pro plus 6.0软件对条带光强度进行半定量分析.结果 石英刺激H-NC,G1期细胞所占比例从83.53%±2.24%下降到69.11%±3.12%;石英刺激H-Ku80,石英诱导的G1期细胞的比例进一步减少,从85.16%±3.73%下降到59.92%±3.31%;石英刺激H-PKcs,G1期细胞比例也显示进一步减少,从75.06%±2.23%下降到58.32%±1.35%,差异均有统计学意义(P＜0.05).石英刺激H-NC,CyclinE和CDK2蛋白表达随时间延长有增高趋势,并在12 h达峰值;石英刺激H-Ku80,H-PKcs和CyclinE蛋白表达水平在各时间点均低于H-NC,差异有统计学意义(P＜0.05),CDK2蛋白的表达水平变化不明显.结论 DNA-PK参与石英诱导的细胞周期改变,对CyclinE的表达呈正性调节作用.
关键词： 石英 细胞周期 细胞周期蛋白E 细胞周期蛋白依赖激酶类 -
双黄升白颗粒对化疗所致骨髓抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠细胞周期的双重调控作用及其机制
目的:探讨双黄升白颗粒对化疗所致骨髓抑制荷瘤小鼠骨髓和肿瘤细胞周期双重调控的作用机制.方法:本研究采用Lewis肺癌荷瘤小鼠,30只小鼠随机分为空白组、模型组和治疗组.除空白组外,腹腔注射环磷酰胺制作骨髓抑制模型.治疗组用40 g/(kg·d)双黄升白颗粒治疗6 d后,流式细胞仪检测细胞周期情况,并计算增殖指数(proliferation index,PI);蛋白印迹法和免疫组织化学法检测骨髓及肿瘤组织中细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)、细胞周期蛋白依赖激酶6(cyclin-dependent kinase 6,CDK6)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达.结果:模型组骨髓及肿瘤的G0/G1期细胞比例均低于空白组(P＜0.05),PI和CDK4、CDK6、cyclin D1表达高于空白组(P＜0.05).治疗组骨髓G0/G1期细胞比例低于模型组及空白组,PI及CDK4、CDK6、cyclinD1表达均高于模型组及空白组;肿瘤组织G0/G1期细胞比例高于模型组及空白组,PI及CDK4、CDK6、cyclin D1表达均低于模型组及空白组.结论:双黄升白颗粒对骨髓抑制Lewis肺癌荷瘤鼠的细胞周期具有双重调控作用,其机制可能与双重调节cyclin D1、CDK4和CDK6表达有关.
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吲哚美辛对结肠癌细胞中细胞周期蛋白的影响
目的体外观察吲哚美辛对含突变型p53的SW480细胞及经野生型p53转染的结肠癌细胞株SW480(wtp53/SW480)的影响,探讨吲哚美辛抗结肠癌作用的分子机制.方法不同浓度的吲哚美辛作用于细胞株,采用Western斑点免疫印迹方法,分别检测SW480细胞及wtp53/SW480细胞中CDK2、CDK4和p21WAF1/PIC1蛋白的表达水平.结果吲哚美辛作用于wtp53/SW480细胞24 h后,其CDK2、CDK4蛋白表达水平随吲哚美辛浓度的增加而逐渐下调,呈浓度依赖性,以600μmol/L时抑制作用强;而p21WAF1/PIC1蛋白表达水平上调,其表达水平随着一定范围内吲哚美辛浓度的增加而逐渐上调,以400μmol/L吲哚美辛时作用强,600μmol/L时回到基础水平.在未经转染的SW480细胞中CDK2、CDK4和p21WAF1/PIC1蛋白表达没有发生明显改变.结论吲哚美辛抗结肠癌作用部分分子机制可能是通过下调CDK2、CDK4蛋白的表达和上调p21WAF1/PIC1蛋白来实现且存在p53-p21WAF1/CIP1依赖途径.
关键词： 吲哚美辛 结肠肿瘤 SW480细胞 细胞周期蛋白依赖激酶类 -
胃癌中Cks1、P27Kip1、Skp2蛋白表达相关性及其意义
目的:探讨Cks1在胃癌发生及Skp2调节P27Kip1降解过程中的作用.方法:应用流式细胞术检测正常胃黏膜、胃不典型增生组织及胃癌组织中Cks1、P27Kip1、Skp2蛋白的表达.结果:由正常胃黏膜、胃不典型增生组织到胃癌中Cks1、Skp2的表达均呈上升趋势(P＜0.05),P27Kip1表达则呈下降趋势(P＜0.05).胃癌中Cks1、Skp2表达均与P27Kip1表达呈负相关(r=-0.649,P＜0.05;r=-0.732,P＜0.05);而Cks1蛋白表达与Skp2蛋白无相关性(P＞0.05).胃癌中Cks1表达与肿瘤分化程度相关(P＜0.05),而与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及临床分期不相关(P＞0.05).结论:Cks1可能参与胃癌的发生;胃癌中Cks1可能参与Skp2调节P27Kip1泛素化的降解过程.
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CDK12与肿瘤相关性的研究进展
恶性肿瘤一般表现为细胞分裂不受控制的病理过程.细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases,CDKs)是一类调节细胞周期进程和基因转录过程的关键因子.CDKs的功能失调能够驱动肿瘤的发生,因此常被检测用来指导恶性肿瘤的治疗.CDK12是一种参与包括DNA损伤修复、细胞生长和分化、前体mRNA剪接和处理加工等多种细胞进程的转录相关性激酶.近期研究发现,多种肿瘤中存在着CDK12基因突变和扩增现象,如在高级别浆液性卵巢癌中CDK12基因发生功能缺失性突变,提示CDK12可能是一种抑癌基因.然而,CDK12在某些肿瘤中过表达,表明CDK12还可能具有一些癌基因的特性.本文就CDK12基因的结构、功能以及与恶性肿瘤的关系等新研究进展进行综述.
关键词： 肿瘤 细胞周期蛋白依赖激酶类 DNA修复 细胞周期 CDK12基因 -
小檗碱抑制人黑素瘤A375细胞增殖的机制研究
目的 探讨小檗碱对人黑素瘤A375细胞周期相关miRNA及其靶基因表达的影响.方法 体外培养人黑素瘤A375细胞,经不同浓小檗碱(20、40、60、80 μmol/L)处理48 h后,采用qRT-PCR检测miRNA-582-5p及其靶基因CDK1 mRNA的表达,以及miRNA-188-5p和其靶基因CDK2、Cyclin D1、Cyclin A mRNA的表达.Western印迹检测细胞周期相关蛋白CDK1、CDK2、Cyclin D1和CyclinA的表达.结果 qRT-PCR显示,与空白对照组相比,20、40μmol/L小檗碱组miRNA-582-5p的表达无明显变化(均P＞ 0.05),60、80μmol/L组miRNA-582-5p的表达明显上调(均P＜0.05).与空白对照组相比,各浓度小檗碱组miRNA-188-5p表达均增强(F=22.600,P=0.002),CDK2、CDK1、Cyclin A、Cyclin D1mRNA表达随小檗碱浓度增加逐渐减弱(F=51.976、248.510、626.671、312.740,均P＜ 0.001).Western印迹显示,小檗碱可降低CDK1、CDK2、Cyclin D1、Cyclin A蛋白的表达(F=138.124、110.966、278.772、140.167,均P＜0.001).结论 小檗碱可能通过降低mRNA表达量与升高miRNA-582-5p和miRNA-188-5p含量共同使黑素瘤A375细胞周期相关蛋白CDK1、CDK2、Cyclin D1和Cyclin A表达降低,进而阻滞细胞周期进程,抑制肿瘤生长.
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Egr-1诱骗性寡脱氧核苷酸对大鼠动脉损伤后PCNA和CDK4表达的影响
目的:观察局部转染早期生长反应因子-1(Egr-1)的诱骗性寡脱氧核苷酸(Decoy ODN)对球囊损伤颈总动脉后内膜增生及增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)表达的影响,并初步探讨Egr-1 decoy ODN抑制球囊损伤后内膜增生的机制.方法:应用HE染色,Realtime RT-PCR和Western-blot方法观察大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生情况、Egr-1、CDK4和PCNA的表达及Egr-1 decoy ODN对它们的影响.结果:Egr-1 decoy ODN组内膜增生明显减轻,Egr-1、PCNA和CDK4的表达减少,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01).结论:Egr-1 decoy ODN可能是通过特异性抑制Egr-1的表达,进而抑制PCNA和CDK4的表达,而减轻血管损伤后内膜增生.
