首页 > 文献资料
-
干细胞移植治疗帕金森病的研究进展
帕金森病(PD)是一种常见的神经系统变性疾病,其病理改变的大特点是病变只侵犯中脑的多巴胺(DA)能神经元,导致纹状体内DA的减少从而引起运动迟缓,静止性震颤,肌肉强直等锥体外系症状.
-
部分切除并联合自体角膜上皮干细胞移植治疗翼状胬肉
目的::对镜下部分切除联合自体角膜上皮干细胞移植治疗翼状胬肉的术式进行临床评价.方法:本文分干细胞移植组(研究组)33例33只眼,单纯切除术组(对照组)30例30只眼,两组疗效进行对比.结果:术后随访观察6～12个月.干细胞移植组复发2例,复发率为6.06%;单纯切除术组复发10例,复发率为33.3%.经x2检验,两组疗效差异显著.结论:镜下部分切除联合自体角膜上皮干细胞移植术是治疗翼状胬肉的一种非常有效的治疗方法,值得推广.
-
自体外周血干细胞动员时CD34+细胞的监测及其意义
对于自体外周血干细胞移植(peripheral blood stem cell transplantation, PBSCT)时造血干细胞的采集时机及采集量，各家观点不一［1］。本文对北京大学人民医院血液病研究所1994～1999年间37例行自体PBSCT病例进行分析，以了解回输造血干祖细胞含量与造血恢复相关关系，观察动员后外周血干祖细胞动力学改变，进而推测采集干细胞佳时机。
-
骨髓间充质干细胞与肌源性细胞移植改善缺血性心脏病兔心功能的对照观察
目的:探讨骨髓间充质干细胞和肌源性细胞移植治疗缺血性心脏病的可行性.方法:①实验于2001-08/2002-04在北京协和医院血液科细胞培养室和动物实验室完成.选用健康雄性新西兰大白兔70只.由其胸骨获得骨髓间充质干细胞,进行培养并经5-氮杂胞苷诱导分化为肌源性细胞.采取结扎前降支的办法建立兔心肌梗死模型.②实验过程中死亡20只,将剩余50只分为5组:正常组(正常新西兰大白兔,未造模),模型组(建立心肌梗死模型,不给予其他处理),移植干细胞组(建立心肌梗死模型后1个月移植骨髓间充质干细胞),移植肌源性细胞组(建立心肌梗死模型后1个月,移植肌源性细胞),对照组(注射IMDM无血清培养基),每组10只.③采用BL-410生物机能实验系统软件记录其血流动力学变化(左心室内压大上升速率),以了解心功能变化.④两组计量资料间差异比较采用t检验.结果:建立心梗模型时死亡6只,移植过程中及移植后共死亡14只,50只进入结果分析.左心室内压大上升速率:正常组和移植干细胞组及移植肌源性细胞组明显高于模型组和对照组[(6 910±360),(4 830±470),(4 820±510),(2 460±370),(2 500±360)mm Hg/s,t=11.75～27.39,P＜0.05];移植于细胞组及移植肌源性细胞组明显低于正常组(t=11.11,10.59,P＜0.05).结论:移植骨髓间充质干细胞及肌源性细胞均能改善实验动物的心功能,但不能使实验动物的心功能完全恢复正常.
-
转化生长因子β1诱导骨髓间充质干细胞体外构建纤维蛋白胶软骨模块
目的:观察体外构建骨髓间充质干细胞、改良纤维蛋白胶及生长因子的组织工程软骨模块的可行性.方法:实验于2004-07/12在南方医科大学附属珠江医院中心实验室进行.选取新西兰兔10只,密度梯度法分离培养兔骨髓间充质干细胞,在培养系统中加入生长因子(含10μg/L转化生长因子β1,100 mol/L地塞米松,50 mg/L维生素C,以及1%ITS-A.培养第2,4,6,8天采用四甲基偶氮噻唑法在酶标仪上检测吸光度值表示细胞增殖.于培养7,14 d行细胞爬片甲苯胺蓝染色及Ⅱ胶原免疫组化.诱导后骨髓间充质干细胞种植于改良纤维蛋白胶支架上,加入生长因子诱导培养,于培养7,14,21 d行形态组织学及透射电镜检查.结果:实验兔10只均进入实验结果分析.①四甲基偶氮噻唑法测定培养第6和8天后,实验组骨髓间充质干细胞增殖的吸收度值高于对照组(实验组:0.455 4±0.020 6,0.534 8±0.016 9;对照组:0.427 0±0.025 5,0.505 7±0.036 8,P＜0.05).②细胞爬片甲苯胺蓝染色细胞周围有蓝色基质.Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性.③诱导后骨髓间充质干细胞在改良纤维蛋白胶支架中培养,Masson染色可见胞浆及细胞周围有胶原的形成;Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性.透射电镜可见细胞代谢旺盛.结论:骨髓间充质干细胞、改良纤维蛋白胶及生长因子的组织工程模块体外培养系统中,改良纤维蛋白胶支架相容性好,转化生长因子β等生长因子促进骨髓间充质干细胞在改良纤维蛋白胶支架增殖,诱导分化成软骨细胞表型.
-
肝硬化患者骨髓间充质干细胞诱导分化为肝样细胞的实验
目的:探讨肝硬化患者骨髓间充质干细胞向肝样细胞的诱导分化,为患者自体骨髓间充质干细胞移植修复肝损伤提供实验依据.方法:实验于2005-05/06在解放军北京军区总医院肝病中心完成.骨髓来自北京军区总医院肝病中心一例肝硬化患者,应用Ficol1分离液分离培养其骨髓间充质干细胞,应用人肝细胞生长因子对骨髓间充质干细胞进行定向诱导分化,采用倒置显微镜形态观察、反转录聚合酶链反应及免疫组织化学染色检测诱导前后不同阶段骨髓间充质干细胞中白蛋白和角蛋白18核糖核酸和蛋白的表达,通过细胞形态及其白蛋白和角蛋白18的表达等指标确定骨髓间充质干细胞向肝样细胞的分化.结果:①经Ficoll分离液分离得到的人骨髓间充质干细胞体外培养20 d左右细胞生长达80%～90%汇合,其形态呈较均一的长梭形.②人骨髓间充质干细胞经肝细胞生长因子诱导培养3周后,诱导组中出现圆形细胞,呈克隆样生长.③人骨髓间充质干细胞经肝细胞生长因子诱导2周时,表达少量白蛋白核糖核酸,于诱导3周时可见白蛋白核糖核酸的表达明显增多.④应用肝细胞生长因子诱导3周后人骨髓间充质干细胞胞浆中自蛋白及角蛋白18染色均呈阳性.结论:肝硬化患者骨髓间充质干细胞在肝细胞生长因子诱导下能定向分化为肝样细胞.
-
不同发育阶段小鼠纹状体神经干细胞的体外增殖和分化情况比较
目的:分析胚胎、新生以及成年小鼠纹状体神经干细胞的体外培养和分化条件,并比较其体外增殖和分化情况. 方法:实验于2005-02/05在解放军第四军医大学西京医院神经内科实验室完成.选取孕14 d小鼠、出生24 h内的新生小鼠和4月龄的成年小鼠各1只用于实验.①神经干细胞的原代培养:分别将孕14 d小鼠、新生小鼠和成年小鼠处死后取出纹状体组织,轻轻吹打制成单个细胞悬液,接种于无血清的D/F12培养基中,每六七天机械分离克隆传代1次.②神经干细胞的鉴定:采用有限稀释法获得神经干细胞单克隆,继续培养得到大量来自单个细胞的亚克隆.对神经球行免疫荧光染色鉴定.③通过四甲基偶氮唑盐比色法及免疫荧光染色比较胚胎鼠、新生鼠及成年小鼠的神经干细胞的增殖和分化情况.结果:①成功地从胚胎鼠、新生鼠以及成年小鼠的纹状体中分离培养出神经干细胞.②胚胎鼠、新生鼠及成年小鼠的神经干细胞分化为神经元的比例均为7%～11%,分化为星形胶质细胞的比例均为76%～88%,差异无显著性意义(P＞0.01).③与成年小鼠比较,胚胎鼠和新生鼠的神经干细胞增殖旺盛(P＜0.01),而胚胎鼠和新生鼠之间差异无显著性意义.结论:随着小鼠年龄的增加纹状体神经干细胞的增殖能力逐渐减弱,但仍保持着分化为神经元和胶质子细胞的能力.胚胎和新生鼠源性的神经干细胞均具有较强的增殖能力,为寻找理想的移植细胞提供了思路.
-
自体组织工程化角膜上皮修复角膜缘缺陷症
目的:用组织工程方法构建角膜上皮组织,观察自体工程化角膜上皮修复角膜缘缺陷症的可行性.方法:①实验于2000-01/2003-12在南京医科大学第一临床医学院中心实验室和内分泌科实验室完成.选用新西兰白兔15只,雌雄不拘.用手术方法做成单眼角膜缘缺陷动物模型,为移植实验的受体眼.另一只眼为供体眼.15只兔被随机分为3组:自体角膜上皮移植,羊膜移植组,对照组.②自体角膜上皮移植组:取供体眼角膜缘上皮组织约3 mm3,体外培养.对原代培养和传代培养的角膜干细胞进行形态学观察,采用糖原PAS反应鉴定细胞糖原染色;采用免疫组化法鉴定细胞角蛋白AE1表达;对培养细胞进行透射电镜和扫描电镜观察.在去除上皮的保存人羊膜组织上,接种培养细胞,气液界面培养2周构建复层上皮组织.倒置显微镜观察细胞形态和生长特征;组织固定,包埋,切片,染色,观察细胞生长状态和蛋白表达.透射电镜观察超微结构.5只眼成模后4周,受体眼去除角膜浅层新生血管膜,行自体培养角膜上皮移植术.羊膜移植组:5只眼成模后4周,行羊膜移植修复角膜表面;对照组:5只眼成模后不做处理,为模型对照组.③移植实验后7,10,20,30 d,分别行裂隙灯显微镜检查,角膜荧光素染色,眼前部照相.并分别处死各组动物,取手术区域角膜组织,甲醛固定,石蜡包埋,病理切片,染色,镜检观察.结果:①培养细胞的生长状态:原代培养48 h细胞贴壁,15 d左右形成单层.传代培养次日细胞贴壁,10 d形成良好的单层.细胞胞体饱满,呈多角形,大小基本一致.②培养细胞的形态学特征:苏木精-伊红染色,细胞呈多角形,核呈长圆形,细胞大小一致,排列整齐.AE1单克隆抗体染色阳性,PAS染色阴性.③培养细胞的超微结构:透射电镜可见培养细胞之间有桥粒连接,缝隙连接.扫描电镜可见细胞表面有微绒毛结构.④羊膜上接种细胞的生长特征:24 h细胞贴壁生长,1周左右融合成单层.气液界面培养,细胞透明饱满,均匀成片生长,持续培养2周,细胞呈复层生长.⑤组织工程化角膜上皮形态特征:苏木精-伊红染色,细胞呈多角形,在羊膜上融合成片.组织切片,细胞在羊膜上可达到四五层.透射电镜可见桥粒样结构.⑥自体组织工程化角膜上皮修复实验:自体角膜上皮移植组:移植区角膜上皮细胞覆盖,呈复层排列,基底细胞呈柱状,基底膜完整.基质内有炎性细胞和红细胞浸润.供体角膜未出现临床病理性损伤.羊膜移植组:移植区域表层有上皮细胞覆盖,层次紊乱,极性消失.基质内有炎性细胞和红细胞浸润.对照组:角膜上皮排列紊乱,基底膜不完整,基质内有中性白细胞和红细胞浸润.结论:①角膜干细胞在体外能够培养传代.②培养角膜干细胞在保存人羊膜上能够生长,经气液界面培养,构建出复层上皮组织,与正常角膜上皮组织近似.③自体工程化角膜上皮可用于修复角膜缘缺陷症.
-
深低温保存角膜缘干细胞羊膜片的异体移植
目的:探讨深低温冷冻保存角膜缘干细胞羊膜片的活性及异体移植疗效.方法:将兔角膜缘干细胞移植到羊膜上,经简化程序降温后置-196℃深低温保存,并将兔对侧眼制成碱烧伤模型.第30天～第45天后抽样取出冷冻保存的植片分别行电镜检查及兔角膜缘干细胞异体移植,并于术后第1个月时进行印迹细胞学检查.结果:电镜检查显示冷冻保存的角膜缘干细胞超微结构形态正常,线粒体轻微水肿.移植术后第1个月时,角膜上皮稳固愈合,混浊角膜渐转透明,新生血管减少,角膜印迹细胞学检查显示角膜上皮细胞正常,未见杯状细胞.结论:深低温保存的角膜缘干细胞羊膜片能有效用于眼表的重建,但通过简化程序降温的冷冻植片的活性及异体移植的远期疗效有待进一步观察.
-
眼科干细胞研究的现状及进一步研究的问题
干细胞具有自我更新能力和多向分化潜能,能通过非对称分裂的方式产生功能和类型更为局限的前体细胞及多种细胞系,进而再生新的细胞,参与损伤组织的修复和重建,是细胞移植研究和再生医学研究的主要对象.眼是一种由多种组织细胞和神经细胞组成的感觉器官,干细胞移植治疗眼科变性性疾病具有易操作、可视性好、所需种子细胞量少和排斥反应轻的优点,在干细胞基础研究和临床研究中受到广泛关注.国内外研究团队正在进行干细胞移植治疗眼部不可逆疾病的Ⅰ、Ⅱ期临床试验,我国经WHO注册的Ⅰ期临床试验也正处于病例招募阶段,以评估干细胞移植治疗眼部疾病的疗效和安全性.目前,关于干细胞移植治疗眼部疾病的研究仍存在很多尚需解决的问题.本文中评述眼科干细胞移植研究的进展以及进一步的研究方向.
-
肝干细胞及其应用前景
肝干细胞具有向肝细胞和胆管细胞分化的潜能,在肝细胞移植、体外人工肝、基因治疗方面有巨大潜力,对于了解肝细胞发育及肝癌肝硬化等疾病的发生机制有重要帮助.目前认为是肝干细胞的候选者有卵圆细胞、胎肝前体细胞、骨髓造血干细胞、胰腺前体细胞;肝干细胞可通过流式细胞仪分离,在特殊的培养条件下可长期培养.
-
自体角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉31例临床观察
目前治疗翼状胬肉的方法很多,保守疗法除应用药物外还包括冷冻,超声波及激光等方法,但效果欠佳,故目前手术仍是治疗翼状胬肉的主要方法.
-
自体角膜缘干细胞移植治疗重度翼状胬肉
本院于1998年11月至2000年12月,采用胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植术治疗重度翼状胬肉28例32眼,取得较好疗效,现报道如下.
