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垂体腺苷酸环化酶激活肽拮抗lactacystin细胞毒性作用的机制研究
目的 探讨垂体腺苷酸环化酶活化肽(pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide,PACAP)对蛋白酶体抑制剂lactacystin诱导的帕金森病多巴胺能细胞凋亡作用的影响及其分子机制.方法 用神经生长因子将鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞诱导分化成神经元的细胞模型,经20 μmol/L的lactacystin作用24 h,建立帕金森病细胞实验模型.实验分为对照组、lactacystin组、PACAP1-27干预组(干预1组)、PACAP1-27和PACAP6-27共同干预组(干预2组).Western blot法检测线粒体凋亡相关蛋白bcl-2、bax、bcl-2/bax比值、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3)的表达情况.结果 与对照组比较,lactacystin组bcl-2表达、bcl-2/bax比值明显降低(P＜0.01),bax表达无明显变化,Caspase-3表达明显升高(P＜0.01);与lactacystin组比较,干预1组bcl-2表达、bcl-2/bax比值明显升高(P＜0.01),bax表达无变化,Caspase-3表达明显降低(P＜0.01);与干预1组比较,干预2组Caspase-3表达明显升高(P＜0.01).结论 蛋白酶体抑制剂lactacystin引起线粒体损伤导致细胞损伤;PACAP1-27通过调节上述信号通路发挥保护作用.而PACAP1-27的受体拮抗剂PACAP627则减弱了PACAP1-27的这一作用.
关键词： 受体 垂体腺苷酸环化酶激活多肽 帕金森病 多巴胺 细胞凋亡 PC12细胞 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 -
垂体腺苷酸环化酶激活多肽38及其衍生物的表达、纯化和活性
目的 提高垂体腺苷酸环化酶激活多肽38(Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide 38,PACAP38)的体内稳定性、延长其生物学活性.方法 对PACAP38的氨基酸序列进行改造(命名为PACAP38衍生物cPACAP38),并根据大肠杆菌密码偏爱性设计并合成PACAP38及其衍生物的基因片段;分别将两基因片段克隆至表达载体pET-32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;表达的融合蛋白经镍离子亲和层析纯化,肠激酶切割获得目的 多肽;通过小鼠饮食抑制试验比较两多肽的体内活性;长期给药观察小鼠腹腔糖耐量及小鼠血清甘油三酯、HDL、LDL和胆固醇的变化.结果 两种融合蛋白Trx-PACAP38和Trx-cPACAP38的表达量分别占菌体总蛋白的22%和25%,为可溶性表达,纯化后纯度分别为90%和98%;PACAP38及cPACAP38均有抑制小鼠饮食的作用,cPACAP-38的效果优于PACAP38;连续给药10 d后,小鼠腹腔糖耐量、血清甘油三酯、HDL、LDL、胆周醇均无明显变化.结论 已成功获得体内活性更稳定的PACAP38衍生物,为PACAP38的基础研究及应用奠定了基础.
关键词： 垂体腺苷酸环化酶激活多肽 饮食抑制 长期给药 葡糖耐量试验 -
垂体腺苷酸环化酶激活多肽对胰腺癌细胞的生长调控
目的观察垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)对人胰腺癌细胞株的生长调控作用；并确定神经鞘磷脂是否作为第二信使参与受体后信息传导。方法人胰腺癌细胞株JF305，HS766T，ASPC-1进行细胞培养，传代。分别加入不同浓度的PACAP1-38(10-6～10-12 mol/L)于三种癌细胞中。应用MTT法观察细胞增殖程度。薄层层析法测定细胞神经鞘磷脂。放射免疫法测定细胞内cAMP含量。Fura-2/AM测定细胞内游离Ca2+浓度。结果PACAP1-38促进JF305，HS766T，ASPC-1细胞的生长；PACAP1-38增加细胞内神经鞘磷脂、cAMP、Ca2+的生成；生长抑素可明显抑制PACAP1-38诱导的JF305细胞的生长等作用。结论PACAP1-38促进人胰腺癌细胞株的增殖。PACAP受体后信息传递途径：(1)腺苷酸环化酶途径；(2)钙-钙调素途径。神经鞘磷脂作为第二信使也参与此过程。
关键词： 垂体腺苷酸环化酶激活多肽 神经鞘磷脂 人胰腺癌细胞株 -
垂体腺苷酸环化酶激活多肽调节LPS激活的树突状细胞免疫功能
目的:研究垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide,PACAP)能否调节小鼠骨髓起源的LPS激活的树突状细胞(dendritic cell,DC)的免疫功能.方法:联合应用rmGM-CSF和rmIL-4自C57BL/6小鼠骨髓细胞制备DC,以LPS和(或)PACAP刺激DC;收集被激活的DC及其上清液行ELISA和流式细胞术分析;自DC提取总RNA行RT-PCR和RNase分析.结果:PACAP能明显抑制LPS激活的DC分泌细胞因子IL-2、IL-12和TNF-α(P<0.05,P<0.01,P<0.01),以及LPS激活的DC分泌趋化因子MIP-2(P<0.01),但抑制细胞因子IL-6,趋化因子MIP-1α和MIP-1β 的作用并不明显(P>0.05).结论:PACAP对LPS激活的DC的免疫功能具有负性调节作用.
关键词： 垂体腺苷酸环化酶激活多肽 树突细胞 脂多糖类 免疫 -
A型肉毒毒素拮抗变应性鼻炎大鼠鼻黏膜VIP/PACAP表达的实验研究
目的:探讨血管活性肠肽/垂体腺苷酸环化酶激活多肽(VIP/PACAP)在变应性鼻炎(AR)大鼠鼻黏膜中的表达和意义,以及A型肉毒毒素(BTX-A)对其的抑制作用.方法:将30只SD大鼠随机分为AR组、干预组和对照组.AR组用卵清蛋白致敏健康大鼠,干预组为致敏后应用BTX-A滴鼻7次,对照组用生理盐水滴鼻.观察各组大鼠行为变化、血清IFN-7及IL-4水平、大鼠鼻黏膜形态变化和VIP/PACAP的表达情况,并进行统计学分析.结果:①AR组大鼠剧烈搔鼻、频繁喷嚏、大量清涕等典型行为评分(7.50士0.50)明显高于干预组(1.00±0.27)和对照组(0.80±0.31),均差异有统计学意义(均P＜0.01);②与干预组和对照组比较,AR组大鼠血清IFN-γ降低、IL-4升高、IFN-γ/IL-4比例降低(均P＜0.05).③与干预组和对照组比较,AR组大鼠鼻黏膜出现纤毛倒伏缺失、炎性细胞浸润、腺腔内炎性细胞渗出明显增多(均P＜0.01);干预组上述指标较对照组高;④AR组VIP阳性细胞数(13.27±2.74)高于干预组(5.21±2.18)和对照组(3.56±5.30),PACAP阳性细胞数(20.97士2.14)高于干预组(6.33±3.04)和对照组(4.63±1.25),均差异有统计学意义(均P＜0.01);⑤各组间VIP和PACAP的表达量与Thl/Th2细胞浸润均呈负相关(r=-0.340、-0.223,均P＜0.05).结论:大鼠鼻黏膜内VIP/PACAP可能共同参与了AR的发病机制,BTX-A可能通过抑制VIP/PACAP的表达而改善AR的症状.
关键词： 鼻炎 变应性 血管活性肠肽 垂体腺苷酸环化酶激活多肽 拮抗剂 -
垂体腺苷酸环化酶激活多肽与胰岛细胞功能
垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP)是一种普遍存在于中枢和外周神经系统、并起着各种不同作用的神经多肽.近年研究发现,PACAP在调节胰岛素方面有着重要的生理学意义,是一个潜在的抗糖尿病发生的因子.
关键词： 垂体腺苷酸环化酶激活多肽 胰岛 胰岛素 糖尿病 -
山莨菪碱对大鼠内囊出血并应激性溃疡治疗作用研究
目的 探讨山莨菪碱对大鼠内囊出血并应激性溃疡的治疗作用.方法 用放射免疫分析(RIA)方法测定内囊出血及山莨菪碱治疗后血浆及胃组织匀浆中垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP)、血管活性肠肽(VIP)含量的变化.结果 内囊出血时血浆PACAP、VIP含量明显高于对照组(P＜0.01),胃组织匀浆中PACAP、VIP含量明显低于对照组(P＜0.01);而山莨菪碱治疗后血浆PACAP、VIP含量明显低于出血组(P＜0.01),胃组织匀浆中PACAP、VIP含量明显高于出血组(P＜0.01).结论 血浆及胃组织匀浆中PACAP、VIP可能是参与内囊出血后的应激性溃疡过程中的一个重要因素,山莨菪碱对大鼠内囊出血并应激性溃疡起重要治疗作用.
关键词： 山莨菪碱 内囊出血 垂体腺苷酸环化酶激活多肽 血管活性肠肽 应激性溃疡 -
垂体腺苷酸环化酶激活多肽可加剧实验性急性胰腺炎
脑肠肽垂体腺苷酸环化酶激活多肽(Pituitary adenylate cyclase activating polypeptide, PACAP)在急性胰腺炎(Acute pancreatitis, AP)发病机理和治疗中的作用尚不清楚,为此,本实验观察外源性PACAP对正常大鼠胰腺、实验性AP病程的影响.结果发现:5～30 μg/kg的PACAP可促使血清淀粉酶轻微增高、胰腺水肿形成(实验组23.88%±2.532%～25.86%±1.974% vs 正常组29.21%±5.657%)、炎性细胞浸润、腺泡细胞空泡化、部分病例可见脂肪坏死和实质坏死灶.15 μg/kg和30 μg/kg PACAP可加重蛙皮缩胆囊肽诱发的AP,胰腺组织水肿更明显(实验组13.45%±2.045%～17.66%±4.652% vs 蛙皮缩胆囊肽组21.83%±3.013%,P<0.05),血清淀粉酶增高,出现腹水、胰腺出血、脂肪坏死和实质坏死,腺泡细胞明显空泡化.5 μg/kg和10 μg/kg PACAP对牛磺胆酸钠诱发的急性出血坏死性胰腺炎病程的影响有所不同,可稍减轻胰腺水肿(实验组19.18%±2.102%～20.87%±5.597% vs 牛磺胆酸钠组17.52%±1.505%;下同)、降低血清淀粉酶(1986.91%±710.97%～2944.33±1182.47 IU/L vs 3690.87±2277.99 IU/L,P<0.05),而胰腺出血和坏死加剧.除蛙皮缩胆囊肽诱发的AP外,其余各组机能毛细血管密度(Functional capillary density, FCD)均减少;考虑到胰腺组织水肿导致FCD被低估,我们引入校正FCD(FCD×正常组干湿比/干湿比),结果各组校正FCD均高于正常组.实验结果表明,在大鼠AP发病中,PACAP有促炎性反应作用;合并使用PACAP和蛙皮缩胆囊肽可作为研究急性出血坏死性胰腺炎的新模型;蛙皮缩胆囊肽诱发的AP与牛磺胆酸钠诱发的AP对PACAP的反应可能有所不同;实测FCD不能真实地反映胰腺毛细血管的开放情况.
关键词： 垂体腺苷酸环化酶激活多肽 急性胰腺炎 胰腺 发病 机能毛细血管密度 -
垂体腺苷酸环化酶激活多肽拮抗剂对实验性急性胰腺炎的影响
目的探讨垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP)受体拮抗剂PACAP6-27和(4-Cl-D-Phe6, Leu17)VIP对实验性急性胰腺炎(AP)发生发展的影响.方法将Wistar大鼠分为正常对照组、AP组和PACAP受体拮抗剂干预组等;使用蛙皮缩胆囊肽和牛磺胆酸钠诱发AP,4 h后观察胰腺改变并测定血清淀粉酶、胰腺干湿比和PACAP含量等.结果静脉输注PACAP6-27(10, 100 μg/kg)可导致胰腺组织水肿和炎性细胞浸润,血清淀粉酶显著高于正常对照组[(1464.33±265.6)IU/L和(1692.17±312.18) IU/L vs 正常对照组(520.8±163.27) IU/L,P<0.05];PACAP6-27和(4-Cl-D-Phe6, Leu17)VIP促使蛙皮缩胆囊肽诱发AP胰腺腺泡细胞空泡化加剧,胰腺组织有出血、脂肪和实质坏死,病变严重程度与牛磺胆酸钠诱发AP相似;PACAP6-27加剧牛磺胆酸钠诱发AP胰腺出血、腺泡细胞空泡化和实质坏死.ELISA检测显示,蛙皮缩胆囊肽和牛磺胆酸钠诱发AP胰腺和十二指肠组织的PACAP水平较正常对照显著增高.结论 PACAP6-27和(4-Cl-D-Phe6, Leu17)可诱发轻型胰腺炎,加重实验性AP;PACAP可能参与了实验性AP的发生发展.
关键词： 急性胰腺炎 胰腺 垂体腺苷酸环化酶激活多肽 -
偏头痛模型大鼠三叉神经脊束核和三叉神经节中PACAP及CGRP表达的变化
目的 测定偏头痛模型大鼠三叉神经脊束核(TNC)和三叉神经节(TG)内垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)、降钙素基因相关肽(CGRP)含量,从而探讨其参与偏头痛发病和慢性化过程的机制.方法 SD大鼠32只,随机分为4组,分别为炎症汤连续刺激7d组(IS-7d组)、14 d组(IS-14d组)、21 d组(IS-21d组)以及生理盐水连续刺激21d组(NS-21d组).连续21d给予大鼠上矢状窦旁硬脑膜炎症汤化学刺激构建偏头痛模型,测定大鼠疼痛阈值,应用免疫组化方法测定大鼠TNC和TG内PACAP、CGRP的表达水平.结果 炎症汤反复化学刺激大鼠可导致偏头痛慢性化和痛觉敏化的现象.PACAP在TG的阳性细胞数先增多后减少,在TNC中逐渐减少.CGRP在TNC和TG的阳性细胞数缓慢减少.结论 PACAP与CGRP在偏头痛的发病机制中存在相互影响,对于二者的共存释放关系以及受体拮抗剂的研究可以为未来偏头痛治疗药物的开发提供依据.
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血管活性肠肽/垂体腺苷酸环化酶激活多肽对JF305细胞作用机制的探讨
目的:研究血管活性肠肽(vasoactive intestinal po1ypeptide,VIP)/垂体腺苷酸环化酶激活多肽(Pituitaryadenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)对中国医科大学肿瘤研究所建立一株导管型人胰腺癌细胞株JF305生长的影响,并对该细胞株的受体、磷酸化ERK进行研究.方法:应用MTT法观察细胞的增殖;用RT-PGR法检测细胞膜VPAC1的mRNA的表达,用Western-blotting检测磷酸化ERK(属MAPK).结果:VIP和PACAP1138对表达VPAC1 mRNA的胰腺癌细胞株F305都有明显促进生长作用,且呈浓度依赖性;各自能被其受体的拮抗剂(D-P-cL-Phe6-Len17)VIP及PACAP6 38所阻断;同时VIP/PACAP 3 38作用本细胞5min后增加ERK磷酸化强度.结论:VIP/PACAP对胰腺癌细胞株JF305的生长有明显的促进作用,其受体后促生长作用机制之一可能与MAPK信号传导通路有关.
