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Liddle综合征研究进展
Liddle综合征是一种常染色体显性遗传的单基因高血压病,其临床特征是早发的高血压,低血钾,低肾素,低醛固酮血症,对上皮钠离子通道(ENaC)抑制剂敏感,而对醛固酮抑制剂不敏感.虽然在该综合征的诊断和治疗方面已取得很大进展,但仍有部分患者被误诊以致早年发生心肾功能不全等靶器官损害、脑卒中甚至猝死.近年来,由于分子生物学和分子遗传学的发展,对Liddle综合征发病机制的研究不断深入.该综合征的遗传基础为编码ENaC的基因发生突变引起上皮钠通道过度激活导致肾脏远曲小管对钠水重吸收增强所致,一旦诊断明确,单服阿米洛利即可取得良好的疗效.本文将对Liddle综合征的研究现状作一综述.
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糖皮质激素对大鼠各组织ENaC的影响
上皮钠离子通道由α、β、γ三个亚单位组成,负责钠离子的限速重吸收,对于维持钠的自身平衡、细胞外液量和血压起重要作用.糖皮质激素可以通过影响钠离子通道的活性,进而影响许多疾病的产生和痊愈.
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β2肾上腺素受体激动剂增强肺泡液体转运的信号转导机制进展
β2肾上腺素受体激动剂增强肺泡液体清除作用被高度关注,已在肺水肿和急性呼吸窘迫综合征患者中进行了多项临床实验.近年来其具体的信号转导机制的短时间作用和长时间作用两种途径都被进一步阐明,如前者高选择性Na+通道的膜插入机制,后者Na+,K+-ATP酶的转录后调节机制,为肺水肿治疗药物的开发奠定了理论基础.
关键词： β2肾上腺素受体激动剂 信号转导 上皮钠离子通道 Na+ K+-ATP酶 -
SCNN1基因突变与呼吸系统疾病
SCNN1是编码上皮钠离子通道(ENaC)蛋白的一类基因,目前发现的已经被克隆的哺乳类SCNN1基因包括SCNN1A、SCNN1B、SCNN1G、SCNN1D,分别表达ENaC的α、β、γ、δ亚基.ENaC在维持钠、水平衡中起着重要作用,而SCNN1基因的突变将会影响ENaC的结构与功能,进而导致一系列的疾病.随着研究的深入,人们对SCNN1基因的结构与功能也有了进一步的认识.这篇文章将综述SCNN1基因结构和功能以及它的突变引起的呼吸系统疾病,目的是总结SCNN1基因突变型与呼吸系统疾病表型的关系.
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血清和糖皮质激素调节蛋白激酶对糖尿病视网膜病变的作用及研究进展
血清和糖皮质激素调节蛋白激酶-1(protein kinase regulation of serum and glucocorticoid,SGK1)是一个与丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶等第二信使具有极高同源性的蛋白激酶.它作为多种信号转导通路和细胞磷酸化的级联交汇点,参与离子通道调节、细胞增殖、存活的细胞转导.在糖尿病病人中,高糖诱导SGK1活化,SGK1使得上皮钠离子通道(Epithelial sodium channel,ENaC)的表达增加.近些年来各种研究发现ENaC表达于非上皮组织,且对糖尿病血管病变,尤其是糖尿病视网膜病变的发病将发挥一定的作用.ENaC通过肾素-血管紧张素-醛固酮系统(Renin-angiotensin-aldosterone system,RAAS系统)介导,血管内皮NO生成减少,血管功能障碍;NADPH氧化酶功能障碍,参与病理性血管的生成;在高血糖条件下SGK作用于下游转录调控因子核转录因子κB(Nuclear factorκB,NF-κB),使得其在细胞核中含量增加,上调凋亡基因的表达,周细胞的凋亡增加.
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黄芪汤对肾脏集合管细胞ENaC活性的影响作用研究
目的:研究黄芪汤对肾集合管上皮钠离子通道(ENaC)活性的影响,探索其治疗肾病综合征(NS)水肿的药理机制.方法:将体外培养的小鼠肾集合管M-1细胞分为空白对照组、黄芪汤组和阿米洛利组,分别予纯化的纤溶酶刺激后,以膜片钳测定其膜电流变化.结果:纤溶酶刺激后,空白对照组的膜电流显著增强(P<0.001),黄芪汤组和阿米洛利组的膜电流虽也有升高趋势,但幅度均未达统计学显著水平(P>0.05).该两组的膜电流增幅间无显著差异(P>0.05),但均显著低于空白对照组(P<0.05).结论:黄芪汤可抑制肾集合管细胞的ENaC活性,该方治疗NS水肿的药理机制可能与此有关.
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鼻内窥镜术后普米克令舒鼻雾化吸入对ENaC蛋白表达的影响
目的 探讨鼻内窥镜术(ESS)后普米克令舒鼻雾化吸入对鼻腔黏膜上皮钠离子通道(ENaC)蛋白表达的影响.方法 44例行ESS的鼻息肉患者随机分为普米克令舒治疗组(n=21)和雷诺考特对照组(n=23),治疗组术后予以普米克令舒鼻雾化吸入治疗,对照组术后予以常规雷诺考特喷鼻治疗,连续10 d.两组患者均于术后第14天鼻内窥镜下行术侧中鼻甲残端黏膜活检,术中及术后标本均于显微镜下行嗜酸性粒细胞(Eos)和中性粒细胞(Neu)计数,免疫荧光检测ENaC蛋白的表达.结果 治疗后,两组Eos和Neu计数均下降,但普米克令舒治疗组Neu低于雷诺考特对照组(P<0.05);普米克令舒治疗组上皮细胞ENaC蛋白的表达也低于雷诺考特对照组(P<0.01).结论 ESS术后应用普米克令舒治疗可减少Neu的浸润,抑制ENaC蛋白的表达,有利于减轻鼻黏膜急性炎症和水肿反应.
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丝氨酸蛋白酶调控酸敏感离子通道及上皮钠离子通道机制研究进展
酸敏感离子通道(ASICs)属非电压门控钠离子通道,ASIC1a、2a、2b存在于中枢神经系统,ASIC1a与学习、记忆、恐惧感等海马功能密切相关,在缺血损伤等胞外酸性环境下可被瞬时激活.上皮钠离子通道(ENaC)是一种高选择性阳离子通道,分布于远端肾小管、膀胱上皮、大肠上皮、外分泌腺管以及气道上皮,由α-、β-和γ-ENaC 3种同源亚单位组成,在水钠平衡、血压及血容量的调节中起重要作用,该调节作用受多种因素(如丝氨酸蛋白酶)的影响.
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血清药理学研究车前子对成骨细胞功能的影响
目的:研究车前子含药血清对大鼠颅骨成骨细胞体系增殖、分化及成骨能力的影响,并初步探讨上皮钠离子通道(ENaC)参与车前子调节成骨细胞功能的作用.方法:按血清药理学实验方法制备车前子含药血清和对照血清,采用酶消化法分离培养大鼠成骨细胞,CCK-8试剂盒和AKP试剂盒分别测定车前子含药血清对细胞增殖和分化的影响,半定量PCR方法测定车前子含药血清对成骨细胞ENaC和成骨功能指标基因表达的影响.结果:不同浓度的车前子含药血清均能显著刺激成骨细胞增殖、分化,其促进作用与药物浓度呈正相关关系,具有浓度依赖性；与对照组比较,低浓度车前子含药血清能显著上调成骨细胞α-ENaC基因的表达水平,其增加趋势与成骨功能指标基因(OC、ALP、OP)mRNA表达的增加趋势一致.结论:车前子含药血清不仅刺激成骨细胞增殖分化,在促进骨形成的同时也增加α-ENaC mRNA表达,提示其作用机理可能与ENaC介导的调节途径有关,为中药治疗骨代谢疾病的研究提供了一个新思路.
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Adipolin／CTRP12对LPS致ARDS小鼠的保护作用及肺泡上皮钠离子通道的调节
目的：探讨adipolin／CTRP12对LPS致ARDS小鼠的作用及肺泡上皮钠离子通道（ ENaC）的调节。方法：40只C57BL／6J小鼠按随机数字表分为对照组、LPS组、adipolin组和wortmannin（PI3K抑制剂）组，每组10只。苏木精－伊红（HE）染色观察肺组织病理改变；伊文氏蓝标记蛋白检测肺水清除率（AFC），BCA法测支气管肺泡灌洗液（BALF）中蛋白含量，评估肺组织通透性改变；ELISA检测BALF中白细胞介素（IL）－1β和肿瘤坏死因子（ TNF）－α含量，髓过氧化物酶（ MPO）试剂盒检测MPO活性，吉姆萨染色计数BALF总细胞数和多形核白细胞数， Western blot法检测肺组织α－ENaC蛋白表达和Akt磷酸化水平，实时荧光定量PCR检测肺组织α－ENaC的mRNA转录水平。结果：与control组相比，LPS组表现出典型的ARDS病理改变，肺损伤明显（P＜0．05），湿干重比（W／D）和BALF蛋白含量明显增高而AFC明显减弱（P＜0．05），BALF细胞计数、MPO活性、IL－1β含量和TNF－α含量明显升高（P＜0．05），而肺α－ENaC表达和Akt磷酸化水平显著下调（P＜0．05）。与LPS组相比，adipolin组肺损伤明显减轻（P＜0．05），W／D和BALF蛋白含量明显降低而AFC明显增强（P＜0．05），且BALF细胞计数、MPO活性、IL－1β含量和TNF－α含量均较LPS组显著降低（P＜0．05），伴α－ENaC表达和Akt磷酸化水平显著上调（P＜0．05）。而PI3K抑制剂wortmannin组与adipolin组相比，其肺损伤明显加重（P＜0．05），W／D和BALF蛋白含量明显增高， AFC明显减弱（P＜0．05），BALF细胞计数、MPO活性、IL－1β含量和TNF－α含量明显升高（P＜0．05），同时伴α－ENaC表达和Akt磷酸化水平显著下调（P＜0．05）。结论： Adipolin／CTRP12可通过PI3K／Akt信号通路介导的α－ENaC上调机制，增强肺水肿液清除能力，从而对LPS所致ARDS小鼠发挥保护性调控作用。
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醛固酮对成骨细胞增殖分化及成骨相关基因表达的影响
目的 探讨外源性醛固酮对大鼠原代培养的成骨细胞增殖、碱性磷酸酶活性及成骨相关基因表达的影响及其机制.方法采用酶消化法体外培养大鼠成骨细胞,CCK-8试剂盒和AKP试剂盒分别检测成骨细胞的增殖和碱性磷酸酶活性情况,半定量RT-PCR和Western blotting检测成骨细胞骨形成活性相关标志物和上皮钠离子通道(α-ENaC)基因的mRNA和蛋白表达.结果与对照组相比,醛固酮浓度为1×10-2~1μmol/L范围内可以促进成骨细胞增殖,浓度为1×10-3μmol/L和10μmol/L时对成骨细胞增殖无显著影响;但醛固酮在1×10-3~10μmol/L浓度范围内对成骨细胞碱性磷酸酶活性均无明显影响.与对照组相比,醛固酮浓度为1×10-2~1μmol/L时均能上调成骨细胞中成骨细胞骨形成活性相关标志物I型胶原蛋白(Coll-Ia)、碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)和α-ENaC基因的mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05).结论醛固酮(1×10-2~1μmol/L)能明显促进成骨细胞增殖并上调成骨细胞骨形成活性相关标志物的表达,且同时上调ENaC基因的表达,提示ENaC可能是醛固酮调节成骨细胞功能的作用靶点之一.
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上皮钠离子通道对大鼠破骨细胞分化和骨吸收功能的影响
目的：本文探讨上皮钠离子通道（ENaC）对破骨细胞功能和活性的影响。方法采用大鼠巨噬细胞集落刺激因子和核转录因子-κB受体活化因子配体诱导大鼠骨髓单核细胞使其分化为破骨细胞。以1.5×104密度接种到12孔板，查随机表分3孔为1组，分为4组：Control组和不同浓度阿米洛利（Ami, ENaC的抑制剂）组。抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色进行阳性破骨细胞鉴定；将破骨细胞和骨片共同培养，测定骨吸收陷窝的数目；用RT-PCR技术分析破骨细胞标志酶基因组织蛋白酶K（CK）的表达。结果不同浓度的Ami处理破骨细胞后，TRAP染色阳性破骨细胞减少，抑制破骨细胞的形成和骨吸收，而且降低破骨细胞特异性基因CK的表达。结论本次实验在细胞水平证明ENaC在破骨细胞上的表达并且调控破骨细胞的分化和骨吸收，说明ENaC可能参与破骨细胞的功能调节，提示破骨细胞可能存在一个与ENaC相关调节的新途径，为骨代谢的研究提供了一个新思路。
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特布他林短时间作用增强急性肺损伤大鼠肺泡液清除的机制与αENaC的相关性
目的 探讨β2受体激动剂特布他林短时作用增强成体大鼠肺泡液清除的机制与肺泡上皮钠离子通道α亚基(αENaC)的相关性.方法 建立油酸急性肺损伤(ALI)大鼠模型;以PaO2、氧合指数,肺组织HE染色,血管外肺水含量(EVLW)为指标验证特布他林经气管给药作用1h促进ALI大鼠肺泡液重吸收的效果:通过实时荧光定量RT-PCR、Western blot测定各组大鼠肺组织的αENaC mRNA、αENaC蛋白的表达并比较它们的差异.结果 特布他林治疗组大鼠的PaO2、氧合指数、EVLW较ALI组有显著差异;各组大鼠αENaC mRNA、αENaC蛋白表达差异无统计学意义.结论 特布他林经气管给药作用1 h能显著促进ALI大鼠肺泡液重吸收;特布他林短时作用增强成体大鼠肺泡液清除没有通过αENaC基因表达实现.
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钠离子对成骨细胞的影响及其与上皮钠通道的关系
目的 探讨不同浓度钠离子(Na+)对大鼠成骨细胞(Ob)成骨功能的影响,及其与上皮钠通道(ENaC)的相关性.方法 Ob经1x10-4～1 mol/L Na+处理后,检测Ob的增殖和分化情况.再从中选3个浓度Na+处理Ob,RT-PCR测定成骨功能相关基因(Cbfal,OPN,OC)及ENaC-α的表达变化.结果 在1×104～1 mol/L范围内,Na+对Ob具有双向影响作用,与对照组相比低浓度Na+明显促进Ob分化,升高Na+浓度则抑制Ob分化,而Na+对Ob的增殖无影响.RT-PCR示:Na+对Ob中Cbfa1、OPN及OC表达同样具有双向作用,低浓度促进表达,高浓度抑制；并且ENaC-a mRNA在Na+调控下的变化情况与成骨功能相关基因及Ob分化活性的变化相一致.结论 Na+可直接影响Ob的分化及成骨功能相关基因的表达,而且Na+对Ob的影响作用与ENaC相关.
