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microRNA-21参与调控膀胱癌细胞增殖及多柔比星敏感性的研究
目的：膀胱移行细胞癌是一种常见的恶性肿瘤，且复发率很高。由于 microRNA-21（miR-21）在多种类型肿瘤中参与肿瘤发生及耐药，故通过此次研究探索其在膀胱移行细胞癌中的功能。方法肿瘤组织及癌旁正常组织中的miR-21及目的蛋白PTEN表达水平分别采用实时qRT-PCR及Western blot方法进行测量。采用MTT法评估miR-21对于癌细胞增殖以及多柔比星敏感性的影响。采用流式细胞术探究T24细胞系中多柔比星引起的细胞凋亡。结果与癌旁正常膀胱组织相比， miR-21在膀胱肿瘤组织中的表达水平显著上调，而PTEN蛋白表达低水平。活体内研究发现miR-21与PTEN表达呈负相关。miR-21过表达可显著促进T24细胞系的细胞增殖与多柔比星敏感性。结论 miR-21可能是膀胱移行细胞癌的致癌因素，有望成为膀胱移行细胞癌的治疗新靶点。
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循环miRNA-21在肿瘤中的研究进展
微RNA(miRNA)是一类具有基因调控功能的非编码小分子RNA,参与了生物的发育、生长等重要的生命活动,且与恶性肿瘤的形成、发展、转移与复发有关,其中miR-21在多种肿瘤组织中异常表达;外周血miR-21作为肿瘤诊断、治疗和预后的潜在生物标志物备受关注.该文围绕外周血miR-21在肿瘤诊断、疗效评价以及预后等方面的作用予以综述.
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MicroRNA-21与胃癌关系的研究进展
胃癌的发生和发展是一个复杂、多步骤的过程,涉及原癌基因和抑癌基因的遗传失调,近研究较多的微RNA(miRNA)起着重要作用.miRNA是一种长为21～ 23个核苷酸的非编码RNA分子,参与细胞增殖、凋亡和分化以及恶性肿瘤的发生,是重要的调节器.近些年来,人们针对miR-21在恶性肿瘤中的表达研究为广泛深入,该文就miR-21与胃癌的关系进展予以综述.
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微RNA-21在乳腺浸润性导管癌中的表达及与磷酸酶张力蛋白基因的相关分析
目的 探讨微RNA-21(mir-21)和第10染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)在乳腺浸润性导管癌中的表达情况及临床意义.方法 采用茎环实时荧光逆转录聚合酶链反应(realtime RT-PCR)检测40例乳腺浸润性导管癌及其对应的癌旁正常乳腺组织中mir-21表达,免疫组化Envision法检测相应癌组织中PTEN表达,分析mir-21表达和PTEN表达的相关性及其与临床病理特征的关系.结果 茎环realtime RT-PCR检测mir-21表达的敏感性和特异性良好;mir-21在乳腺癌组织中的表达显著高于正常组织(P<0.001);PTEN在癌组织中的低表达率为45%(18/22).PTEN低表达组mir-21的表达显著高于PTEN高表达组(P=0.013).mir-21的高表达还和较高的TNM分期、淋巴结转移及高增殖指数有关(P值分别为0.021,0.010和0.030).结论 mir-21在乳腺浸润性导管癌中的表达升高,可能和乳腺癌的增殖、侵袭转移有关;在乳腺癌中PTEN可能为其靶基因之一.
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miR-21通过Wnt信号通路对前列腺癌生物学行为的影响
目的 探讨miR-21通过Wnt信号通路影响前列腺癌的生物学行为的机制.方法 应用qPCR检测前列腺癌DU145、PC-3和LNCaP细胞株中miR-21 mRNA的表达水平.通过转染miR-21-mimic模拟物和miR-21-inhibi-tor模拟物上调和下调DU145细胞中miR-21的表达.细胞凋亡实验检测上调miR-21表达对DU145细胞凋亡行为的影响;划痕愈合实验检测上调miR-21表达对DU145细胞迁移能力的影响;Western blotting检测上调miR-21表达与Wnt信号通路蛋白表达的关系.结果 DU145细胞株miR-21 mRNA表达水平明显高于PC-3和LNCaP细胞株(P<0.05).上调miR-21表达可以抑制DU145细胞的凋亡,增强DU145细胞的迁移能力,还可以上调Wnt信号通路蛋白的表达水平(P<0.05).结论 miR-21可能通过Wnt信号通路影响前列腺癌的生物学行为.
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微RNA-21在49例活动期炎症性肠病患者肠黏膜和外周血CD4+T细胞中的表达
目的 探讨miRNA-21在IBD发生、发展过程中的作用及意义.方法 采用荧光定量PCR分析26例CD患者、23例UC患者和19名健康对照者的肠黏膜及外周血CD4+T细胞中miRNA-21表达水平.比较11例CD患者经英夫利西单克隆抗体(IFX)治疗前后肠黏膜及外周血CD4+T细胞中miRNA-21相对表达量,并分析其与血清TNF-α的相关性.组间比较采用t检验,外周血CD4+T细胞中miRNA-21表达与血清TNF-α的关联性采用Spearman相关性分析.结果 CD患者和UC患者肠黏膜中miRNA-21表达水平分别为4.720±0.397和4.993±0.415,均高于健康对照组的1.101±0.284,差异均有统计学意义(t=7.657、8.356,P均＜0.01);CD患者和UC患者外周血CD4+T细胞中miRNA-21表达水平分别为3.254±0.323和3.450±0.311,均高于健康对照组的0.891±0.220,差异均有统计学意义(t=6.007、7.098,P均＜0.01).IFX治疗后12周,CD患者肠道炎性反应的简明克罗恩病内镜评分(SES-CD)为8.019±0.349,低于治疗前的21.502±1.185,差异有统计学意义(t=10.910,P＜0.01);CD患者肠黏膜组织及外周血CD4+T细胞miRNA-21表达水平分别为1.039±0.153和1.005±0.092,分别低于治疗前的4.720±0.397和3.254±0.323,差异均有统计学意义(t=5.763、7.004,P均＜0.01);血清TNF-α水平为(61.570±6.252) pg/mL,低于治疗前的(173.500±12.670) pg/mL,差异有统计学意义(t=7.926,P＜0.01).相关性分析发现血清中TNF-α水平与外周血CD4+T细胞miRNA-21表达水平呈正相关(r=0.780 4,P＜0.01).结论 miRNA-21在IBD中表达升高与血清TNF-α水平及疾病活动性密切相关,miRNA-21可能成为IBD治疗新靶点.
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不同严重程度哮喘患者血清外泌体中微RNA-21的表达水平及其诊断价值
目的 研究血清外泌体中微RNA-21(miR-21)表达水平及其对哮喘严重程度的诊断效能.方法 以82例未经治疗的哮喘患者和80名健康人作为研究对象.将哮喘患者根据病情严重程度分为4组:间歇状态20例、轻度持续22例、中度持续22例、重度持续18例.用qPCR检测各组血清外泌体中miR-21的表达水平,并进行比较.用Spearman相关分析研究血清外泌体中miR-21表达水平与哮喘严重程度的相关性.通过受试者工作特征(ROC)曲线评价外泌体中miR-21表达水平对哮喘严重程度的诊断效能.结果 间歇状态、轻度持续、中度持续和重度持续的哮喘患者血清外泌体中miR-21表达水平均高于健康对照组,差异均有统计学意义(P均<0.01),且哮喘患者各组间miR-21表达水平差异也有统计学意义(P均<0.01).Spearman相关分析结果显示,血清外泌体中miR-21的相对表达量与哮喘严重程度呈正相关(r=0.974,P=0.0167).血清外泌体中miR-21对间歇状态、轻度持续、中度持续、重度持续哮喘患者诊断效能的ROC曲线下面积分别为0.657、0.769、0.847、0.916(P均<0.01).结论 血清外泌体中miR-21表达水平对治疗前哮喘严重程度有较高的诊断效能,有望成为判断哮喘严重程度的一种无创性诊断标志物.
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胸腔积液中miRNA-21和miRNA-155表达的诊断价值
目的 探讨胸水miRNA-21和miRNA-155含量检测的临床意义.方法 分别从43例恶性胸水患者和27例良性胸水患者胸水中提取miRNA,采用荧光定量PCR技术检测miRNA-21和miRNA-155在良性和恶性胸水中表达量,常规细胞学方法检测胸水脱落细胞.应用受试者工作特征曲线(ROC)分析方法评价其诊断价值.结果 恶性胸水组miRNA-21和miRNA-155的表达量明显高于良性胸水组(P＜0.05),胸水脱落细胞学检查肿瘤细胞阳性组miRNA-21和miRNA-155的表达量明显高于阴性组.胸水中miRNA-21表达量对肺癌的诊断价值:当特异性为100％时,诊断的敏感性为67.4％,ROC曲线下面积0.891.胸水中miRNA-155表达量对肺癌的诊断价值:当特异性为100％时,诊断的敏感性为65.1％,ROC曲线下面积0.848.结论 检测胸水miRNA-21和miRNA-155的表达对诊断恶性胸水具有较高的特异性和敏感性.
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急性B淋巴细胞白血病病儿miR-21表达及意义
目的 了解microRNA-21 (miR-21)在急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)骨髓单个核细胞(BMMCs)中的表达水平及其意义.方法 收集36例B-ALL病儿(其中高危型13例,标危型23例)化疗前后及12例骨髓常规正常非造血系统疾病病儿(对照组)的骨髓标本,采用实时荧光定量PCR方法检测BMMCs中miR-21表达.结果 化疗前B-ALL组miR-21表达水平明显高于对照组,高危型组miR-21表达水平明显高于标危型组,差异有统计学意义(t=20.75、23.23,P＜0.05).化疗后B-ALL病儿miR-21表达水平较化疗前明显减低(t'=10.56,P＜0.05),其中以化疗敏感组减低为明显(t=13.57,P＜0.05);化疗耐药组miR-21表达水平化疗前后无明显变化(P＞0.05).结论 miR-21过表达在B-ALL发病中发挥着重要作用,可作为判断儿童B-ALL预后指标之一.
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microRNA-21在口腔鳞状细胞癌中的表达与预后关系
目的:探讨microRNA-21在口腔鳞状细胞癌中的表达情况,以及与预后关系.方法:选取98例口腔鳞状细胞癌患者组织及正常黏膜组织标本,同时,选取50例非肿瘤患者黏膜组织,分别提取标本中总RNA,利用RT-PCR检测microRNA-21在口腔鳞状细胞癌及正常黏膜组织中相对表达量,探讨其与临床病理特征的关系,利用Kaplan-Meier法分析其与预后的关系.结果:microRNA-21在口腔鳞状细胞癌组织中相对表达量(2.37±1.01),显著高于正常黏膜组织中的(0.97±0.08)和非肿瘤患者黏膜组织中的(0.94±0.07),差异具有统计学意义(P＜0.05),;microRNA-21表达与患者性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤大小和TNM分期无关,而与分化程度和是否发生淋巴结转移有关(P＜0.05);将microRNA-21相对表达量的中位值2.41为界,将所有患者分为高表达组和低表达组,高表达组患者中位生存期38个月,低表达组患者中位生存期44个月,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:microRNA-21在口腔鳞状细胞癌中呈高表达,且与分化程度和淋巴结转移有关,并可影响患者预后.
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人microRNA-21真核过表达载体的构建及其在 HepG2．2．15细胞中上调c-myc基因的表达
目的：构建人微小RNA‐21（microRNA‐21，miRNA‐21）真核过表达载体pmR‐21，探讨其在 HepG2．2．15细胞中对c‐myc基因表达的调控作用。方法 PCR扩增miRNA‐21的前体基因片段（pre‐miRNA‐21），双酶切后连接到pmR‐mCherry载体上，通过双酶切和测序验证重组载体的准确性；将重组载体转染到 HepG2．2．15细胞中为实验组，另设空载体组（转染 pmR‐mCherry空质粒组），空白组（未转染组），阳性对照组（HepG2细胞），24 h后观察载体荧光蛋白表达情况，流式细胞术检测转染效率，实时荧光定量PCR评估miRNA‐21的表达情况；转染72 h后，RT‐PCR和Western blot检测c‐myc mRNA及蛋白表达水平；CCK‐8法检测各组细胞增殖情况。结果经双酶切和测序验证，目的基因片段插入载体中；实验组及空载体组转染24 h后细胞内可见强荧光，转染效率大于50％；实验组细胞 miRNA‐21表达较空载体组、空白组水平升高；转染72 h后实验组细胞c‐myc mRNA表达较空载体组、空白组升高；实验组细胞增殖快于空载体组及空白组，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论成功构建miRNA‐21真核过表达载体 pmR‐21，该重组载体可稳定表达 miRNA‐21；miRNA‐21可上调 c‐myc基因的表达，c‐myc基因是miRNA‐21发挥促癌作用的靶点之一。
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血液中microRNA-21对肺癌诊断价值的Meta分析
目的 通过Meta分析已报道文献中的微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)对肺癌的诊断价值,探讨血液中的miR-21对肺癌的诊断价值.方法 检索中国知网、维普、万方、PubMed和Embsase等数据库,按照已定的纳入和排出标准筛选文献.采用Quadas量表评估纳入文献质量.通过Stata12和Meta-Disc软件合并纳入文献的诊断值并检测评估异质性和发表偏倚.结果 共检出994篇相关文献,通过筛选,7篇文献(含1 088例样本)纳入本次Meta分析.通过合并文献得出,miR-21对肺癌的诊断灵敏度、特异度、阳性似然比、和阴性似然分别为0.68(95％CI:0.55～0.79),0.82(95％CI:0.76～0.86),3.70(95％CI:2.60～5.25)和0.39(95％CI:0.27～0.58);综合诊断指标综合曲线下面积(SROC)和诊断比值比(DOR)分别为0.84(95％CI:0.80～0.87)和9.90 (95％CI:4.75～20.63).结论 目前研究证据表明,miR-21对肺癌具有较好诊断价值,可作为肺癌诊断的潜在指标.
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细胞外信号调节激酶及蛋白激酶B信号通路在微RNA-21促进胆管癌细胞侵袭转移中的作用
目的 观察细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)及蛋白激酶B(Akt)信号通路在微RNA-21(miR-21)促进胆管癌细胞侵袭转移中的作用.方法 采用实验研究方法.体外培养胆管癌细胞QBC939细胞,通过构建合成无关序列、miR-21 mimics和miR-21 inhibitor并转染到细胞中,将细胞分为4组:cell组:自然生长细胞,21-NC组:转染无关序列,21-M组:转染miR-21 mimics,21-Ⅰ组:转染miR-21 inhibitor.另取21-M组细胞进一步分为2组,分别加入20 μmol/L LY294002和10 μmol/L U0126处理48 h,用于后续实验.检测指标:(1) RT-qPCR检测miR-21在各组胆管癌细胞中的表达.(2) Werstern blot检测各组胆管癌细胞第10号染色体缺失的张力同源性磷酸酶(PTEN)、ERK及Akt蛋白的相对表达量.(3)划痕实验检测各组胆管癌细胞迁移能力.(4) Transwell实验检测各组胆管癌细胞迁移与侵袭能力的影响.正态分布的计量资料以(x)±s表示,两组均数比较采用t检验,多组均数比较采用方差分析,组间两两比较采用Bonferroni检验,重复测量数据采用重复测量方差分析.结果 (1) miR-21在cell组、21-NC组、21-M组及21-Ⅰ组中的相对表达量分别为1.010±0.010、0.980±0.050、4.900±0.350、0.260±0.010,4组比较,差异有统计学意义(F=78.23,P＜0.05).21-NC组miR-21表达分别与cell组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).21-M组miR-21表达较cell组增加,21-Ⅰ组较cell组减少,21-M组和21-Ⅰ组分别与cell组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2) cell组、21-NC组、21-M组、21-Ⅰ组细胞PTEN蛋白相对表达量分别为0.360±0.020、0.400±0.030、0.140±0.010、0.680±0.110,ERK蛋白相对表达量分别为0.045±0.126、0.470±0.140、0.460±0.060、0.440±0.110,p-ERK蛋白相对表达量分别为0.310±0.020、0.380±0.040、0.590±0.060、0.160±0.010,Akt蛋白相对表达量分别为0.400±0.010、0.390±0.080、0.410±0.090、0.380±0.070,p-Akt蛋白相对表达量分别为0.440±0.110、0.510±0.120、0.980±0.150、0.190±0.010,4组细胞PTEN、p-ERK、p-Akt蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(F=10.23,12.78,18.11,P＜0.05),与cell组比较,21-NC组PTEN、ERK、p-ERK、Akt、p-Akt表达,差异均无统计学意义(P＞0.05);而21-M组与cell组比较,PTEN表达减少,p-ERK和p-Akt表达增加,差异有均有统计学意义(P＜0.05);21-Ⅰ组与cell组比较,PTEN表达增加,而p-ERK和p-Akt表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)cell组、21-M组、miR-21+ LY294002组、miR-21+U0126组细胞6～48 h迁移率变化范围为12.0％±3.0％～23.0％±5.0％,21.0％±4.0％～43.0％±7.0％,6.0％±1.0％～18.0％±4.0％,9.0％±2.0％～26.0％±6.0％.与cell组比较,21-M组细胞迁移能力各时间点迁移率更高,两组迁移率变化趋势比较,差异有统计学意义(F=16.23,P＜0.05).miR-21+ LY294002组、miR-21+ U0126组迁移率较21-M组下降,3组迁移率趋势比较,差异有统计学意义(F=25.21,P＜0.05),3组迁移率变化趋势与时间交互效应,具有统计学意义(F=35.31,P＜0.05).(4) cell组、21-M组、miR-21+ LY294002组、miR-21+U0126组迁移细胞数分别为(198±32)个、(248±39)个、(187±23)个、(174±28)个,4组比较,差异有统计学意义(F=8.48,P＜0.05);21-M组与cell组比较,差异有统计学意义(=4.13,P＜0.05);miR-21+LY294002组、miR-21+U0126组迁移细胞数较21-M组下降,3组比较,差异有统计学意义(F=21.98,P＜0.05).cell组、21-M组、miR-21+ LY294002组、miR-21+ U0126组侵袭细胞数分别为(102±22)个、(211±36)个、(55±9)个、(67±13)个,4组比较,差异有统计学意义(F=11.32,P＜0.05);21-M组与cell组比较,差异有统计学意义(t=6.67,P＜0.05);miR-21+ LY294002组、miR-21+ U0126组侵袭细胞数较21-M组下降,3组比较,差异有统计学意义(F=36.23,P＜0.05).结论 ERK及Akt信号通路参与了miR-21促进胆管癌细胞侵袭迁移,PTEN可能介导了miR-21通过ERK及Akt通路促进胆管癌侵袭转移的过程.
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microRNA-21在胆管癌发生发展中的研究进展
microRNA (miRNA)是一种内源性非编码蛋白短链RNA,通过靶向抑制mRNA翻译或切割mRNA调控癌基因或抑癌基因的表达,参与多种恶性肿瘤的演进,是肿瘤发生及发展过程中的重要分子.近年来,研究者发现miRNA在胆管癌中的作用越来越显著,miR-21参与胆管癌细胞的增殖、凋亡、侵袭等多种生物过程,有可能作为胆管癌早期诊断、预后判断及化疗效果评价的新型生物标志物.
