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利用CRISPR/Cas9技术构建微RNA-155基因敲除小鼠模型
目的 探讨利用CRISPR/Cas9技术构建微RNA-155(miR-155)基因敲除小鼠模型.方法 选择健康C57BL/6J小鼠,首先进行小鼠基因组靶序列的扩增和测序,明确miR-155序列及位点,然后设计并构建Cas9载体质粒(Cas9 RNA)及打靶载体单导向RNA(sgRNA),随后将体外转录的Cas9 RNA及sgRNA显微注射入小鼠的受精卵,并将受精卵体外培养.将培养合格的胚胎移植到代孕小鼠的输卵管中,待小鼠生育后得到F0代小鼠.通过对F0代小鼠基因型检测确定基因敲除情况,进而繁育并建立基因敲除小鼠模型.结果 利用CRISPR/Cas9技术构建模型小鼠得到F0代小鼠18只,其中4号小鼠出现DNA单链碱基片段缺失,且基因型可以稳定传代.对其进行繁育后,得到F1代杂合子小鼠3只.杂合子小鼠交配繁育,得到F2代纯合子基因敲除小鼠,电泳及测序结果证实其缺失114 bp碱基序列,成功敲除miR-155基因.miR-155基因敲除小鼠在清洁级动物饲养环境中可以正常繁育.结论 CRISPR/Cas9技术能够快速、有效地构建miR-155基因敲除小鼠模型.
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纳米壳聚糖递送分子信标成像肺癌细胞的研究
目的 采用纳米技术和分子信标(MB)技术,研究纳米壳聚糖(CS)作为miR-155 MB载体用于肺癌细胞成像的效果.方法 设计并合成锁核酸修饰的miR-155MB,采用自组装方法合成纳米壳聚糖分子信标复合物(CS-MB)并对其抗DNase Ⅰ特性、粒径大小、zeta电位等理化性质进行检测.以CS作为载体转染miR-155MB,激光共聚焦检测miR-155 MB对肺癌细胞中的miR-155的识别能力并进行成像,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)进行进一步验证,以随机序列分子信标(RS MB)作为阴性对照.结果 按照7∶1的质量比合成的CS-MB,其包封率高,能抵抗DNase Ⅰ的降解,粒径小,带正电荷,适合基因转染.CS转染miR-155MB后可在肺癌细胞中看到较强的红色荧光,RS MB组未检测到荧光信号(P＜0.05),且荧光信号强弱趋势与实时荧光定量PCR检测的miR-155表达趋势较一致.结论 CS可作为miR-155MB载体检测肺癌细胞中miR-155的表达并进行肺癌细胞成像,为肺癌的诊断提供了新思路和新技术.
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微RNA-155与Th1/Th17异常相关性疾病关系的研究进展
微RNA(miRNA/miR)-155为一种多功能miRNA,参与到感染、免疫、炎症、肿瘤等多种病理生理过程中.miR-155可通过作用于靶基因对免疫细胞产生强大的调控作用,参与到多种免疫相关性疾病的发生、发展中.在银屑病、特应性皮炎、扁平苔藓、硬化性苔藓等多种免疫相关性疾病中均存在miR-155表达异常,并且伴随着辅助性T细胞(Th)1/ Th17细胞的分化异常,提示miR-155表达异常与Th1/ Th17细胞分化相关,因此miR-155表达异常的研究,对于揭示Th1/ Th17细胞分化异常的机制,Th1/ Th17异常相关性疾病的发生机制及治疗具有重要意义.
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微RNA-155与肾脏疾病的研究进展
微RNA(miRNA)是一类内源性基因表达调节因子,在免疫相关性疾病的体液和细胞免疫调控中发挥重要作用,免疫细胞中miRNA的异常分布、表达可导致疾病的发生.其中,miR-155作为免疫系统主要的多功能miRNA之一受到广泛关注,是目前研究的热点.成熟的miR-155可通过调控特定的靶基因在免疫系统中发挥生物学作用,而免疫系统异常是肾脏疾病发生的主要原因之一,影响其发生、发展及预后.因此,miR-155有望成为肾脏疾病治疗的新靶点,从而为揭示肾脏疾病的作用机制、临床诊断和治疗提供新思路.
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胸腔积液中miRNA-21和miRNA-155表达的诊断价值
目的 探讨胸水miRNA-21和miRNA-155含量检测的临床意义.方法 分别从43例恶性胸水患者和27例良性胸水患者胸水中提取miRNA,采用荧光定量PCR技术检测miRNA-21和miRNA-155在良性和恶性胸水中表达量,常规细胞学方法检测胸水脱落细胞.应用受试者工作特征曲线(ROC)分析方法评价其诊断价值.结果 恶性胸水组miRNA-21和miRNA-155的表达量明显高于良性胸水组(P＜0.05),胸水脱落细胞学检查肿瘤细胞阳性组miRNA-21和miRNA-155的表达量明显高于阴性组.胸水中miRNA-21表达量对肺癌的诊断价值:当特异性为100％时,诊断的敏感性为67.4％,ROC曲线下面积0.891.胸水中miRNA-155表达量对肺癌的诊断价值:当特异性为100％时,诊断的敏感性为65.1％,ROC曲线下面积0.848.结论 检测胸水miRNA-21和miRNA-155的表达对诊断恶性胸水具有较高的特异性和敏感性.
