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胰腺良恶性组织p16基因缺失突变和蛋白表达
目的:旨在从分子水平探讨p16基因在胰腺组织中缺失突变和蛋白表达情况及其与临床病理的联系.方法:利用免疫组织化学染色ABC法及聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析技术分别检测29例胰腺良性组织和54例胰腺癌组织中p16蛋白表达和基因缺失突变情况.结果:正常胰腺及良性病变组织中p16蛋白表达率为75.86%,显著高于胰腺癌组织p16蛋白表达率(40.74%)(P＜0.005),临床分期中Ⅰ、Ⅱ期p16蛋白表达率(68.18%)高于Ⅲ、Ⅳ期病例(21.88%)(P＜0.05).p16基因缺失突变率良性组织(10.34%)低于胰腺癌组织(42.59%)(P＜0.005).Ⅰ、Ⅱ期癌组织(18.18%)低于Ⅲ、Ⅳ期癌组织(59.38%)(P＜0.05).在胰腺癌不同病理类型及不同组织学分化程度中p16蛋白表达和基因缺失突变无明显差别.结论:p16基因缺失突变和蛋白表达的检测可作为胰腺癌预后评定的一个分子生物学指标.
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胰腺癌组织c-Ki-ras基因点突变分析
目的研究14例胰腺癌的c-K-ras基因的点突变.方法采用PCR和DNA直接测序方法(direct sequencingmethod)分析14例胰腺癌的福尔马林固定一石蜡包埋的癌组织结果在14例胰腺癌组织中,12例有c-k-ras基因的点突变,突变发生率为86%.点突变发生在第12,13位密码子,点突变的形式为甘氨酸(GGT)→天冬氨酸(GAT)8例→缬氨酸(GTT)3例→精氨酸(CGT)1例.结论胰腺癌ras基因点突变发生率高(86%),可为有争议胰腺癌病例的诊断提供一个可靠的新方法,并可为其基因治疗开辟新途径.
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中国胰腺癌的研究
0 引言胰腺癌(PC)已成为消化系统常见的恶性肿瘤之一.由于胰腺的位置深,其功能复杂(内外分泌均有),故此癌的症状隐匿,并缺乏特征性.迄今,PC在诊断和治疗中仍是棘手的一种恶性肿瘤,并被列为21世纪医学顽固堡垒[1,2].近年来国内外的文献[3,4]报道,PC的发病率不仅呈上升趋势,而且死亡率也较高.虽然这一严峻的现实已引起世界的关注,而且目前的诊治水平也有所提高,但攻克PC的道路仍很陂陀陡峭.因此,为进一步加强对PC的研究,我们仅就我国近年来在此癌研究方面的有关现状、问题及今后努力的方向等概述如下.
关键词： 胰腺肿瘤/诊断 胰腺肿瘤/治疗 胰腺肿瘤/遗传学 增殖细胞核抗原/分析 综述文献 -
胰腺癌组织中cyclin D1和rasp21表达的研究
目的:探讨细胞周期素(cyclin) D1和rasp21蛋白在胰腺癌中的相互关系.方法:应用免疫组化方法检测cyclin D1和rasp21在胰腺癌中的表达.结果:cyclin D1和rasp21在胰腺癌中的阳性表达率分别为60.0%和72.5%,二者在胰腺癌中的表达差异有统计学意义,P<0.05.cyclin D1阳性表达与肿瘤的分化程度密切相关,P<0.05.结论:cyclin D1和rasp21过表达在胰腺癌发生过程中具有协同作用.
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胰腺癌组织中5-LOX的表达及临床意义
目的:探讨胰腺癌组织中5-脂质加氧酶(5-lipoxygenase,5-LOX)的表达及临床意义.方法:应用免疫组化技术检测了46例胰腺癌组织、9例胰腺良性肿瘤、10例慢性胰腺炎、8例正常胰腺组织中5-LOX的表达情况.结果:5-LOX在胰腺癌、胰腺良性肿瘤、慢性胰腺炎和正常胰腺组织中的阳性率分别是73.9%、2/9、3/10和0,其在胰腺癌中的表达显著高于其他组织.5-LOX与肿瘤的发生部位、分化程度、组织学类型之间差异无统计学意义;与TNM分期有关,Ⅲ～Ⅳ期表达明显高于Ⅰ～Ⅱ期,χ2=4.57,P<0.05.结论:5-LOX与胰腺癌的发展、转移有关系,5-LOX抑制剂在胰腺癌的化学预防和治疗方面有广泛的前景.
关键词： 胰腺肿瘤/遗传学 花生四烯酸盐5-脂氧合酶 免疫组织化学 -
MRP及GST-π在胰腺癌中的表达及临床意义
目的:了解胰腺癌中多药耐药相关蛋白及谷胱甘肽-S-转移酶π2种多药耐药基因产物的表达与其临床意义.方法:采用免疫组化的方法检测胰腺癌中上述2种蛋白的表达.结果:多药耐药相关蛋白、谷胱甘肽-S-转移酶π在胰腺癌中的阳性率分别为81%和59%,并且多药耐药相关蛋白与谷胱甘肽-S-转移酶π的表达具有相关性,二者的表达与临床分期、病理分型、病理分级及淋巴结转移无明显相关,同时有2种蛋白阳性者的生存期短于相应阴性者.结论:多药耐药相关蛋白及谷胱甘肽-S-转移酶π在胰腺癌的多药耐药现象中占有重要地位.
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胰腺癌p16、Bcl-2、Bax和VEGF基因表达及新生血管密度计数的意义
目的:研究胰腺癌组织中p16、Bcl-2、Bax和VEGF基因的表达及新生血管计数的意义.方法:采用免疫组织化学法及形态半定量方法对33例胰腺癌和6例正常胰腺组织进行新生血管密度记数和p16、Bcl-2、Bax和VEGF基因表达检测.结果:P16蛋白表达:高、中分化胰腺癌高于低分化(P＜0.05),生存期长者表达高于生存期短者(P＜0.05);Bcl-2表达:高、中分化者高于低分化者;Bax表达:正常胰腺组织高于胰腺瘤组织,高、中分化者高于低分化者,生存期≥12个月者高于＜12个月者;VEGF表达:有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者;MVD记数:正常胰腺组织低于胰腺瘤组织,有淋巴转移者高于无淋巴结转移者;MVD与VEGF表达呈正相关(r=0.79,P＜0.05);p16基因表达与VEGF表达和MVD呈负相关(r=-0.69,P＜0.05;r=-0.87,P＜0.05),Bcl-2表达与其他基因表达结果无相关关系.Bax表达与p16表达呈正相关(r=0.54,P＜0.05),与VEGF表达和MVD呈负相关(r=-0.66,P＜0.05).结论:综合检测胰腺癌组织中p16、Bcl-2、Bax和VEGF基因的表达及微血管密度对判断胰腺癌恶性程度及估计肿瘤的预后有较大帮助.
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抗HIF-1α和survivin基因双靶位miR-RNAi载体的构建及其对胰腺癌细胞的作用
目的:构建抗HIF-1α单靶位(anti-H)、抗Survivin单靶位(anti-S)以及抗HIF-1α和Survivin基因双靶位微小RNA表达载体(anti-H+S),观察和比较这3种载体对胰腺癌Panc-1细胞增殖的影响.方法:设计4组靶向HIF-1α和Survivin基因的寡核苷酸序列,连接至pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR质粒,构建两组共8个载体,依次为anti-H(Ⅰ)、anti-H(Ⅱ)、anti-H(Ⅲ)、anti-H(Ⅳ)和anti-S(Ⅰ)、anti-S(Ⅱ)、anti-S(Ⅲ)、anti-S(Ⅳ).实时定量RT-PCR检测靶基因mRNA的表达水平,将两组中mRNA下调作用强的质粒串联,构建anti-H+S.用anti-H+S及mRNA下调作用强的anti-H和anti-S转染胰腺癌Panc-1细胞,Western blot测定靶蛋白表达情况,MTT法检测细胞增殖活性.结果:经测序鉴定,所有anti-H、anti-S及双靶位质粒anti-H+S装载位点核苷酸序列与设计序列完全相符.anti-H的靶基因mRNA沉默效率依次为48％、2％、44％和30％；anti-S的靶基因mRNA沉默效率依次为72％、75％、58％和59％.由anti-H(Ⅰ)和anti-S(Ⅱ)串联得到双靶位质粒anti-H+S.anti-H+S的靶基因mRNA沉默效率为53％ (HIF-1α)和42％(survivin).anti-H(Ⅰ)、anti-S(Ⅱ)及anti-H+S与对照质粒相比均使靶基因蛋白的表达明显下降,细胞增殖受到明显抑制(P＜0.05).其中anti-H+S对细胞的增殖抑制作用强于anti-H(Ⅰ)和anti-S(Ⅱ),72h后差异有统计学意义(P＜0.05).结论:本研究成功构建了抗HIF-1α和Survivin的单靶位质粒和双靶位质粒；其中,anti-H+S抑制胰腺癌Panc-1细胞增殖作用强于anti-H(Ⅰ)和anti-S(Ⅱ).
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胰腺癌组织中p16、VEGF蛋白的表达及意义
胰腺癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一,其发展快、向周围侵袭转移早,且早期诊断率低,预后极差.近年来胰腺癌的发病有增高趋势[1].作者应用免疫组化方法检测了胰腺癌组织中p16、血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达,探讨其与胰腺癌发生、发展及其侵袭转移等生物学行为的关系.
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Livin mRNA及Bcl-2,p53蛋白在胰腺癌中的表达
目的 探讨凋亡抑制蛋白Livin在胰腺癌组织中的表达及其与Bcl-2和p53蛋白表达的关系.方法 采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法测52例胰腺癌和12例正常胰腺组织中LivinmRNA的表达;用免疫组织化学法检测胰腺癌组织中Bel-2和p53蛋白的表达.结果 Livin RNA胰腺癌中的表达率为71.2%,明显高于正常胰腺组织(P<0.01).Livin基因表达与胰腺癌的分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05).Livin因表达与Bcl-2蛋白表达有关,而与p53蛋白无关.结论 Livin基因在胰腺癌的发生发展中起重吟用;Livin与Bcl-2的异常表达可能在腺癌的发生中起协同作用;Livin基因过表达与抑癌基因p53的失活无关.
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胰腺癌中VEGF mRNA, bFGF mRNA和PDGF mRNA及相应受体的表达与意义
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)mRNA,碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA和血小板衍生生长因子(PDGF)mRNA及相应受体(flt-1,bFGFR1,PDGFR)与肿瘤微血管(microressel, MV)生成在胰腺癌生成、侵袭、转移中的作用及它们的相互关系.方法应用原位分子杂交技术检测51例胰腺癌及32例急、慢性胰腺炎病人病变组织中VEGF mRNA,bFGF mRNA,PDGF mRNA的表达,应用免疫组化方法检测相应病例中flt-1,bFGFR,PDGFR的表达和肿瘤微血管计数(MVC).分析其表达与胰腺癌病理参数及预后的关系.结果 胰腺癌中3种血管生长因子mRNA及受体阳性率明显高于急慢性胰腺炎(P<0.05或P<0.01),它们的高表达与胰腺癌的分化程度呈负相关(P<0.05);与肿瘤的浸润、淋巴及血道转移(肿瘤的进展阶段)呈正相关(P<0.05或P<0.01),而与肿瘤大小无关;癌组织中MVC明显高于急慢性胰腺炎(P<0.01);3种血管因子及受体与胰腺癌MVC呈正相关(P<0.05或P<0.01);癌组织中3种血管因子mRNA及bFGFR与术后生存率呈显著负相关(P<0.01).结论 VEGF mRNA,bFGF mRNA,PDGF mRNA及受体的表达及MVC的测定可作为判定胰腺癌生长、转移及预后的重要指标,阻断3种生长因子及受体有助于胰腺癌的治疗.
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Her-2/neu和MMP2在胰腺癌中的表达及其意义
笔者应用免疫组织化学法检测Her-2/neu和MMP2基因在34例胰腺癌、5例胰腺囊腺瘤、5例胰腺囊肿和2例正常胰腺组织中的表达水平.结果示胰腺癌中Her-2/neu和MMP2表达明显高于胰腺正常组织和良性病变(P<0.05).Her-2/neu的表达在有淋巴结转移的胰腺癌中明显低于无淋巴结转移的胰腺癌(P<0.05);随TNM分期增高,其表达阳性率显著降低.MMP2表达在肿瘤直径大于4.5cm及有淋巴结转移的胰腺癌中均明显高于肿瘤直径小于4.5cm及无淋巴结转移者(P<0.05);随TNM分期增高,其表达阳性率也增高.MMP2在预后不良组中表达水平较生存组高,但差异无显著性 (P>0.05).提示Her-2/neu和MMP2过度表达可能与胰腺癌的发生发展有关;Her-2/neu可能在胰腺癌发生转移之前发挥作用,而MMP2与胰腺癌的侵袭、转移密切相关.检测二者表达水平对指导临床治疗和评估预后可能有较重要价值.
关键词： 胰腺肿瘤/遗传学 基因表达 基因MMP2 基因Her-2/neu -
胰腺癌细胞凋亡与bcl-2,bax基因的表达
目的探讨胰腺癌组织中的bcl-2和bax的表达及bcl-2/bax比值与胰腺癌细胞凋亡的关系.方法对30例胰腺癌标本应用免疫组化SP方法测定胰腺癌切片中的凋亡抑制基因bcl-2和凋亡促进基因bax的表达;同时应用TUNEL法测定胰腺癌细胞原位凋亡情况.结果高分化腺癌的凋亡指数(AI)为(5.70±1.21)%;中低分化腺癌为(6.80±2.01)%.AI与bcl-2/bax比值呈负相关关系(r=- 0.5583,P<0.05 ).结论 bcl-2和bax在胰腺癌细胞凋亡调节过程中起着重要作用.
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胰腺癌组织smad4mRNA,TGF-β1和TGF-βR1的表达及意义
目的研究胰腺癌组织中smad4mRNA,TGF-β1和TGF-βR1的表达及其生物学意义.方法采用原位杂交方法检测癌及癌旁组织的smad4mRNA,免疫组化方法检测TGF-β1和TGF-βR1.结果 53例胰腺癌smad4mRNA,TGF-β1和TGF-βR1表达阳性率明显地低于25例癌旁上皮(均P＜0.05).高分化腺癌smad4mRNA,TGF-β1和TGF-βR1表达阳性率明显高于低分化腺癌(P＜0.05～0.01),无转移癌明显高于转移癌(P＜0.05～0.01).三者在胰腺癌中表达阳性率均存在密切相关系.结论 smad4mRNA,TGF-β1和TGF-βR1表达与胰腺癌的发生发展、生物学行为和预后有密切关系,检测三者表达水平对早期发现胰腺癌及指导临床治疗和评估预后可能有较重要价值.
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胰腺癌的分子生物学研究进展
近年,与胰腺癌相关的新的癌基因和抑癌基因不断被克隆和发现,为胰腺癌的发病机制的探讨、诊断和治疗提供了许多新的靶点.基于此,笔者就胰腺癌的分子发生机制、基因诊断和基因治疗作一综述.
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抑癌基因DPC4/SMAD4的缺失表达与胰腺肿瘤的关系
目的综述DPC4/SMAD4的缺乏表达与胰腺癌发生的关系.方法复习相关文献,并综述成文.结果与结论 DPC4/SMAD4是一种新的肿瘤抑制基因,定位于第18号染色体长臂18q21.1的位置.它编码的蛋白SMAD4参与了转移生长因子β(TGF-β)超家族细胞内信号传导.SMAD4是信号传递蛋白SMADS的功能活动中心.DPC4/SMAD4基因的缺失表达与胰腺癌发病密切有关.
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Survivin在胰腺癌中的表达及其与胰腺癌增殖活性的关系
目的探讨Survivin在胰腺癌中的表达及其与胰腺癌增殖活性的关系.方法用RT-PCR法检测62例胰腺癌、1 2例慢性胰腺炎和10例正常胰腺组织中Survivin mRNA的表达;用免疫组织化学法检测胰腺癌中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,并观察两者的关系.结果Survivin mRNA在胰腺癌中表达率为74.2%,在慢性胰腺炎及正常胰腺组织中不表达,前者与后两者差异有显著性(P＜0.01);与胰腺癌的分化程度、临床分期及淋巴结转移无明显关系(P＞0.05).Survivin的表达与胰腺癌增殖活性有关;Survivin阳性肿瘤具有较高的增殖活性,其PCNA指数为(46.4±15.2)%,明显高于Survivin表达阴性肿瘤者(28.4±14.8)%(P＜0.01).结论Survivin基因在胰腺癌中过表达,并与胰腺癌的高增殖有关.提示该基因对胰腺癌的发生和发展起重要作用.Survivin基因有望成为胰腺癌诊断和治疗的新靶点.
