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荧光定量PCR与普通定性PCR检测乙型肝炎血清HBV DNA结果的比较
目的探讨荧光定量聚合酶链反应(PCR)与普通定性PCR检测血清HBV DNA结果的差异 .方法同时采用荧光标记(AmpliSensor)定量PCR方法及普通定性PCR方法对100例乙型肝炎血清样品进行HBV DNA检测,并分析其相关性,比较其差异.结果 100例荧光定量PCR方法检测HBV DNA阳性率为74.0%(74/100),定性PCR方法检测HBV DNA阳性率为52.0%(52/100),两种方法的HBV DNA检出率比较具有显著性差异(P＜0.01).结论荧光定量PCR与普通定性PCR相比具有一定的优势,完全可以取代定性PCR方法,尤其适用于使用抗病毒药物的患者的疗效观察和病情预测.
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高效液相色谱-荧光检测法测定大鼠骨骼肌组织内微量三甲基组氨酸
目的:建立快速检测肌肉组织内微量三甲基组氨酸(3-MH)含量的方法.方法:利用荧光胺与3-MH在酸性和高温条件下发生柱前衍生反应,在ZORBAX SB-C18(4.6× 150 mmol/L, 5 μm)柱上,用 10 mmol/L 磷酸钠缓冲液(含30%乙腈,pH 7.50)作流动相,以 1.0 ml/min 的流速进行等度洗脱后,荧光(激发波长 365 nm/发射波长 460 nm)检测3-MH含量.结果:应用此方法检测骨骼肌组织内的氨基酸,仅见到3-MH和组氨酸的色谱峰,色谱保留时间分别约为(4.45±0.02)min和(6.92±0.05)min,分离度>16;线性检测范围是 0.005 ～ 10.0 nmol/ml(r=0.9999,P=0.00);衍生回收率为92.6%～96.8%;3-MH荧光衍生后 15 d 分析与衍生后立即检测相比结果无显著差异(P=0.9095,n=24).结论:本方法测定骨骼肌组织内3-MH,衍生步骤简单,重复性好,检测灵敏度高,适合快速、准确、经济地大批量检测肌组织内的微量3-MH,为开展骨骼肌肌纤维蛋白分解代谢研究提供了可行的方法.
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原子荧光法测定复方铝酸铋胶囊中铋的含量
目的 建立复方铝酸铋胶囊中铋的测定方法.方法 利用HNO3-HClO4(5∶1) 湿法消解,对复方铝酸铋胶囊中的铋进行原子荧光测定.结果 铋在0.0～30.0 μg/L范围内线性关系良好,相关系数为0.9996.结论 该方法可有效控制复方铝酸铋胶囊的质量,提高了方法的专属性,方法简单,结果准确,灵敏度高.
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HPLC-FLD法测定豚鼠肺组织中酯型和盐型羟基喜树碱的含量
目的 建立豚鼠肺组织样品中羟基喜树碱酯型(C-HCPT)和盐型(O-HCPT)HPLC-FLD含量测定方法.方法 以5 mg·kg-1剂量给豚鼠雾化吸入羟基喜树碱注射液,于不同时间点取肺组织,样品处理后,分别测定酯型和总酯含量,减量法得到盐型的含量.色谱柱为Lichrospher C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),C18预柱(10 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈:0.01 mol·L-1缓冲液(0.075 mol·L-1醋酸胺,冰醋酸调pH至6.4)= 32:68(V:V);流速为0.9 mL·min-1;激发波长为363 nm,发射波长为550 nm,柱温:30℃.结果 豚鼠雾化吸入羟基喜树碱注射液(5 mg·kg-1)后,0、5、10、20 min时豚鼠肺组织中的酯型浓度分别为(8.8±s 0.8)、(4.5±2.0)、(2±3)、(1±4)μg·L-1;盐型浓度分别(4.6±1.4)、(6.8±0.9)、(3.0±2.7)、(1±5)μg·L-1.结论本法简便,专属性好,定量可靠,可满足羟基喜树碱不同构型定量研究的需要.
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应用荧光定量PCR检测血清中HCV RNA
目的:探讨荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测血清中丙型肝炎病毒(HCV)含量的敏感性、特异性.方法:采用FQ-PCR和逆转录巢式PCR同步检测76份HCV抗体阳性血清标本,并对两种方法的检测结果进行对照比较.结果:FQ-PCR定量HCV RNA拷贝数在102～106拷贝*μl-1,其中低于103拷贝*μl-1占20.93%,103～105拷贝*μl-1占60.47%,高于105拷贝*μl-1占18.60%.76份HCV抗体阳性血清中,巢式PCR检测阳性为45份,FQ-PCR检测阳性为43份,二者相对符合率为97.37%.结论:FQ-PCR检测HCV RNA与常规定性巢式PCR特异性、敏感性基本一致.
关键词： C型肝炎样病毒属/遗传学 RNA 病毒/分析 聚合酶链反应 荧光计 -
基于7-OH香豆素-MnO2复合体系的荧光平台检测谷胱甘肽
目的 构建7-OH香豆素-MnO2复合体系的荧光平台检测谷胱甘肽并用于药物质量控制. 方法 化学法合成MnO2纳米薄片并用于吸附7-OH香豆素形成复合体系,由于MnO2纳米薄片的内滤效应使得7-OH香豆素的荧光猝灭.谷胱甘肽(GSH)可与MnO2发生氧化还原反应,MnO2转变为可溶性的Mn2+从而释放出7-OH香豆素,恢复荧光.对比GSH加入前后荧光的恢复程度,荧光信号增大的幅度与GSH浓度正相关,可实现对GSH的高灵敏检测. 结果 该荧光平台可选择性识别GSH.在优化的实验条件下,荧光恢复值与GSH在0.03～400 μmol/L呈线性关系,检测限为0.01 μmol/L. 结论 构建的7-OH香豆素-MnO2复合体系的荧光平台可简便、准确地检测GSH,可用于实际药品中GSH的测定.
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非荧光法与荧光法芯片检测细菌感染的研究
目的研制一种用于快速检测急症常见感染细菌的芯片反应系统.方法应用生物信息学技术,设计检测细菌的探针和聚合酶链反应扩增引物,探针点制成寡核苷酸芯片,待测样本经扩增并标记生物素或CY5荧光素后与芯片杂交,再经链酶亲和素-碱性磷酸酶显色反应后,获得肉眼可见的杂交信号,或通过荧光检测仪读出样本的检测结果.结果建立了针对临床急症患者标本的非荧光法与荧光法芯片检测系统,芯片的检测灵敏度(大肠埃希菌)为10～100 CFU/反应体系.结论两种方法不仅能快速、灵敏地检测靶细菌感染,且重复性好、信号强及不易出现非特异信号.生物素酶联显色芯片法由于更为经济、简便而有重要的临床价值.
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解脲脲原体感染者与其正常携带者在量值间的区分研究
目的探讨解脲脲原体(UU)感染者与其正常携带者数量的相关性.方法以UU液体培养阳性为基础,选择<24 h,24 h～,48 h～,72 h～,96～120 h培养阳性的标本进行培养鉴定药敏定量一步法和荧光聚合酶链反应(PCR)定量测定.结果液体培养≤48 h阳性26人,其中荧光PCR定量值≥106拷贝22人(84.62%);>48 h阳性39人,荧光PCR定量值<106拷贝35人(89.74%).培养鉴定药敏定量一步法≤48 h培养阳性组与>48 h培养阳性组荧光PCR定量值比较,P<0.05;>48～120 h培养阳性组荧光PCR定量值比较,P>0.05.结论培养鉴定药敏定量一步法培养≤48 h阳性或荧光PCR定量值≥106拷贝可作为界定感染者标准,培养>48 h阳性或荧光PCR测定值<106拷贝可作为正常携带.培养鉴定药敏定量一步法可作为临床判断患者是否需要接受抗菌药物治疗的标准方法.
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静电磁场对牙槽骨新骨成骨的影响
目的:探讨钕铁硼永磁体产生的静电磁场对兔牙槽骨新骨沉积的影响.方法:将10只日本大白兔随机分为实验组和对照组,每组5只.在实验组兔的左侧牙槽骨颊舌侧分别固定一块钕铁硼永磁体的塑料块,两块磁体的异极相对形成静电磁场.在对照组兔的左侧牙槽骨颊舌侧固定相同装置,但钕铁硼磁体未磁化,为实验对照组.10只兔的右侧牙槽骨相对应部位为空白对照组.通过荧光标记技术测量牙槽骨的新骨矿化沉积率来反映静电磁场对牙槽骨新骨沉积的影响.结果:静电磁场中牙槽骨新骨沉积率和实验对照组、空白对照组无统计学差异(P＞0.05).结论:钕铁硼永磁体运用于口腔正畸是安全可靠的.
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邻苯二甲醛消毒剂研究进
邻苯二甲醛(ortho-phthalaldehyde,OPA)是一种医药中间体,曾广泛应用于胺类生物碱、荧光计组胺测定及医药检验方面.
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肺结核56例痰标本FQ-PCR检测价值分析
目的:探讨不同检测方法对肺结核的诊断价值.方法:以实时荧光定量聚合酶链反应法、痰直接涂片找抗酸杆菌法、痰结核杆菌培养法对56 例确诊肺结核患者痰标本检查结果进行比较.结果:荧光定量 PCR法检出结核杆菌阳性率显著高于痰涂片抗酸染色和培养法(P＜0.05),其他非肺结核结果阳性率仅为 2.7 %,特异度较高.结论:实时荧光定量聚合酶链反应法对肺结核诊断方面灵敏度及特异度较高,同时反映抗结核治疗过程中痰标本中的结核杆菌的数量变化,对抗结核药物疗效有良好的监控效果.
