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激动维甲类X受体抑制心肌细胞缺氧/复氧损伤
目的 探讨激动维甲类X受体(retinoid X receptor,RXR)对大鼠心肌细胞H9c2缺氧/复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)损伤的保护作用及其机制.方法 将心肌细胞缺氧2h/复氧4h,建立H/R损伤模型.以9—顺式维甲酸(9-cis retinoid acid,c-RA)为RXR激动剂,HX531为RXR拮抗剂,实验随机(随机数字法)分4组:健康对照组(N组)、H/R损伤组、H/R+ 100nmol/L c-RA组(RA组)、H/R+ 100 nmoL/L c-RA +2.5 μmol/L HX531组(HX组),MTF法检测细胞活性,流式细胞技术检测细胞凋亡比例,荧光探针JC-1测定线粒体膜电位,Western blot印迹法检测Bcl-2、Bax及活性片段Caspase-9蛋白表达.所有计量资料以均数±标准差(-x±s)表示,采用单因素方差分析,Dennett-t检验,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 c-RA明显抑制H/R损伤引起的细胞活性下降、凋亡增加、线粒体膜电位下降,Western blot印迹检测发现,H/R损伤组Bax、Caspase-9活性片段蛋白表达明显增加,Bcl-2表达明显下降,c-RA预处理后能明显下调Bax、Caspase-9活性片段蛋白表达及上调Bcl-2表达,而所有这些保护作用均被RXR拮抗剂HX531阻断.结论 激动核受体RXR可以保护心肌细胞H/R氧化应激损伤,其机制与抑制线粒体凋亡通路有关.
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激动维甲类X受体抑制过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡
目的 探讨维甲类X受体(retinoid X receptor,RXR)激动剂9-顺式维甲酸(9-cis retinoid acid,c-RA)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)诱导的体外培养大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制.方法 以培养的新生Sprague-Dawley(SD)大鼠心肌细胞为实验对象,随机分为三组:正常对照组(N组)、100 μmol/ H2O2刺激组(H组)和100 nmol/L c-RA干预组(H+R组).应用MTT法检测细胞活力,以Hoechst 33258荧光染色观察凋亡细胞,流式法检测细胞凋亡比率,JC-1荧光染色法检测细胞线粒体膜电位(△(ψ)m)变化,CM-H2DCFDA荧光探针测定细胞内活性氧(reactive oxygenspecies,ROS)水平.所有计量资料以均数±标准差(x±s)表示,采用单因素方差分析,Dunnett-t检验,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 c-RA明显增强H2O2刺激后的心肌细胞活力,减少凋亡比例,稳定线粒体膜电位,减轻细胞活性氧产生.结论 RXR受体激动剂c-RA能够部分抑制H2O2诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与减轻细胞氧化应激损伤有关.
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PPARγ在子宫内膜癌中的研究进展
过氧化氢酶增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptors,PPARs)是细胞核雌激素受体家族成员,包括PPAR α、β/δ和γ.PPAR γ参与脂肪与碳水化合物的代谢过程,因与多种代谢性疾病及肿瘤形成密切相关而成为研究的热点.PPAR γ是配体依赖的转录因子,与子宫内膜癌细胞的增殖、侵袭和转移有关,但在子宫内膜癌中的研究较少,且具体作用机制尚不明确.综述PPAR γ在子宫内膜癌相关的研究进展,旨在探讨PPAR γ参与子宫内膜癌发生发展的机制,为临床后续的抗肿瘤治疗提供理论依据.
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白色脂肪组织向棕色脂肪组织转化——治疗肥胖的新策略
肥胖已成为全球性健康问题,但目前仍没有安全有效的治疗方法.棕色脂肪组织和白色脂肪组织在能量代谢中发挥着截然相反的作用,人们一直试图促使白色脂肪组织向棕色脂肪组织转化,以求开辟治疗肥胖的新途径.本文对白色脂肪组织向棕色脂肪组织转化的发生机制进行总结,并对其相关问题进行了综述.
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PPARγ和RXR激动剂抑制人卵巢颗粒细胞芳香化酶活性和其mRNA的水平
目的探讨过氧化酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和维甲类X受体(RXR)激动剂对人卵巢颗粒细胞芳香化酶活性的调节作用.方法测定人卵巢颗粒细胞(KGN)在PPARγ激动剂曲格列酮、吡格列酮和前列腺素J2以及RXR激动剂LG100268处理前后芳香化酶活性、雌酮(E1)的变化以及P450芳香化酶(P450arom)mRNA的表达水平.对P450arom启动子Ⅱ进行分析,以确定PPARγ和RXR是否直接抑制P450arom mRNA的转录.结果 (1)PPARγ激动剂和RXR激动剂均能显著抑制芳香化酶活性,两者结合使用抑制作用进一步增强并且使E1的生成减少;(2)芳香化酶活性的降低与P450arom mRNA水平下降有关;(3)PPARγ和RXR激动剂对1.0 kb长的P450arom启动子Ⅱ控制的荧光素酶蛋白无调节作用.结论 PPARγ和RXR激动剂对人卵巢颗粒细胞的芳香化酶活性和P450arom mRNA的水平有抑制作用.
关键词： 过氧化物酶体增殖体激活受体γ 维甲类X受体 芳香化酶 人卵巢颗粒细胞 -
维甲酸和维甲类X受体各亚型基因在原发性肝癌组织中表达
目的维甲类药物的分化诱导作用受特定组织表达受体的影响,了解肝癌组织表达维甲酸受体和维甲类X受体的表达,以便选择特异的维甲类药物治疗肝癌.方法根据GeneBank的序列,设计对RARα、RARβ、RARγ、RXRα、RXRβ、RXRγ基因的6对引物,用RT-PCR的方法检测18例肝癌组织和相应癌周肝硬化组织这些基因的表达.结果这些基因在肝癌组织表达率分别为44.4%(8/18),16.7%(3/18),77.8%(14/18%),88.9%(16/18),77.8%(14/18),16.7%(3/18);癌周肝硬化组织分别为27.8%(5/18),0%(0/18),61.1%(11/18),77.8%(14/18),55.6%(10/18),0%(0/18).这些受体亚型表达的阳性率在肝癌组织似高于癌周肝硬化组织,但统计学无显著意义(P＞0.05).以β-actin为内标测定RARs和RXRs的相对表达量,RXRβ相对表达量高于癌周肝硬化组织(配对秩和检验,P=0.0208).结论由于肝癌组织表达有RARs和RXRs,提示除了应用全反式维甲酸治疗肝癌外,尚探讨RXRs选择性维甲类药物治疗价值.
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核受体激动剂对人卵巢颗粒细胞和乳腺癌MCF-7细胞芳香化酶的调节作用
目的:探讨各种核受体包括过氧化酶体增生物激活受体γ(PPARγ)和α(PPARα)、维甲酸受体(RAR)、维甲类X受体(RXR)、维生素D受体(VDR)、甲状腺素受体(TR)和糖皮质激素受体(GR)的激动剂对人卵巢颗粒细胞和乳腺癌MCF-7细胞芳香化酶活性的调节作用.方法:测定人卵巢颗粒细胞和MCF-7细胞在上述各种核受体激动剂处理前后芳香化酶活性的变化和细胞色素P450芳香化酶(P450arom) mRNA的表达水平.结果:(1) PPARγ和RXR激动剂均能显著抑制人卵巢颗粒细胞芳香化酶活性,两者结合使用抑制作用更进一步增强,并且伴有P450arom mRNA水平下降;(2)RAR和RXR激动剂合用能显著刺激乳腺癌MCF-7细胞芳香化酶活性,并使P450arom mRNA表达水平升高.结论:人卵巢颗粒细胞和乳腺癌MCF-7细胞芳香化酶活性受不同的核受体激动剂调节.
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激动核受体RXR对大鼠心肌细胞饥饿损伤中自噬和凋亡的双重调控作用
目的 探讨激动维甲类X受体(RXR)对大鼠心肌细胞无糖无血清(SGD)饥饿状态下的调控作用及其机制.方法 将大鼠心肌细胞株H9c2置于无糖DMEM中培养6h,建立饥饿模型.用9-顺式维甲酸(c-RA)为RXR激动剂,HX531为RXR拮抗剂,并将细胞实验按以下分组:对照组(C组)、SGD干预组(SGD组)、SGD+ 100nmol/L c-RA干预组(RA组)、SGD+ 100nmol/Lc-RA+2.5μmol/L HX531干预组(HX组),MTT法检测细胞活性,流式细胞法检测细胞凋亡比例及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3活力,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及下游活性片段Caspase-9蛋白表达,以及自噬相关蛋白LC3、Beclin 1表达,透射电镜检测心肌细胞自噬小体.结果 与C组比较,SGD组和HX组心肌细胞活力均下降,凋亡百分比、Bax/Bcl-2比值和Caspase-9蛋白水平均上升(均P＜0.01);与SGD组比较,RA组心肌细胞活力均上升,凋亡百分比、Bax/Bcl-2比值和Caspase-9蛋白水平均下降(均P＜0.01).SGD组平均荧光强度(MFI)波峰明显右移,为C组的2.3倍(P＜0.01);而RA波峰出现明显左移,MFI值仅为C组的1.3倍,明显低于SGD组(P＜0.01);HX组波峰与SGD组相似,MFI值显著高于C组(P＜0.01).透射电镜下观察到C组中细胞质内细胞器完整,而SGD组和HX组自噬小体数增加,内含有被吞噬的线粒体等结构,部分呈空泡样改变,同时自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ比值上升,Beclin 1表达增加(均P＜0.01);RA组心肌细胞自噬小体数量明显减少,LC3-Ⅱ/Ⅰ比值下调,Beclin 1蛋白表达水平降低(均P＜0.01).结论 激动核受体RXR可以保护心肌细胞SGD状态下的损伤,其机制与对凋亡和自噬通路的双重调控作用有关.
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维甲酸类受体、PKC-α在食管鳞癌中的表达及临床意义
目的 探讨维甲酸类受体(RAR-α、RAR-β、RAR-γ;RXR-α、RXR-β、RXR-γ)及蛋白激酶C-α(PKC-α)在食管鳞癌(ESCC)中的表达及其临床意义.方法 采用组织芯片和免疫组化法分析90例ESCC患者的癌组织及手术切缘正常食管黏膜组织中维甲酸类受体、PKC-α的表达情况.结果 ① RAR-α、RAR-β、RAR-γ、RXR-α、RXR-β、RXR-γ、PKC-α在ESCC中的阳性表达率分别是35.6%、31.1%、20.0%、58.9%、36.7%、51.1%、62.2%,在正常食管黏膜组织中的阳性表达率分别是42.2%、53.3%、16.7%、46.7%、72.2%、55.6%、44.4%,其中RAR-β、RXR-β在ESCC中呈低表达,PKC-α呈高表达,表达差异有统计学意义(P<0.05),其余4种维甲酸类受体在ESCC与正常食管黏膜之间的表达差异无统计学意义.② RAR-β、RXR-β的表达随着肿瘤分化程度的降低而减少(P<0.01),在有淋巴结转移组中RAR-β表达低于无淋巴结转移组(P<0.05).RXR-β在临床TNM分期较晚的组(Ⅲ~Ⅳ期)中表达低于分期较早的组(Ⅰ~Ⅱ期)(P<0.05).PKC-α在临床TNM分期较晚的组(Ⅲ~Ⅳ期)中表达高于分期较早的组(Ⅰ~Ⅱ期)(P<0.05).结论 RAR-β、RXR-β的低表达及PKC-α的高表达可能与ESCC的发生、发展、预后密切相关.
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维甲酸类受体与食管癌的研究进展
食管癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,其发病率逐年提高,确诊即是进展期,预后差[1-3].在我国,每年约有15万人死于食管癌,病死率仅次于肺癌、胃癌、肝癌,居第4位.食管癌的发生、发展过程涉及大量基因表达水平的改变,包括细胞周期调控发生改变,DNA修复,核受体改变等.其中核受体改变就有维甲酸类受体(retinoic aid receptors, RARs),RARs与食管癌的发生、发展关系密切.1999年Xu等[4]首次研究了RARs与食管癌的关系,指出食管癌的发生可能与维甲酸(retinoicoid, RA)β受体表达缺失有关.近年来已受到国内外学者重视,陆续有文献报道RARs在食管癌的发生、发展中的作用,本文就此进行综述.
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维甲类X受体与维甲酸反应元件β2RARE结合的研究
目的:确定人真皮成纤维细胞中维甲类X受体(RXR)与维甲酸反应元件(β2RARE)的结合.方法:培养成纤维细胞,反式维甲酸(At-RA)刺激细胞不同时段,抽提核蛋白,32P标记β2RARE作为探针,并加入RXRα和β抗体,进行凝胶阻滞分析.结果:对照组细胞核蛋白与β2RARE形成复合体Ⅰ;At-RA刺激细胞后,迅速诱导产生明显的复合体Ⅱ.选择两组核蛋白(对照组和At-RA刺激4 h组),分别加入RXRα和β抗体,凝胶阻滞分析发现RXRβ抗体可使这两组核蛋白产生新的上移复合体SS,RXRα抗体则无此作用.结论:RXRβ能与β2RARE结合,它们的结合不受AT-RA的影响;提示RXRβ可能是作为一辅助因子参与了RARβ2的转录调节.
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凝胶阻滞检测核蛋白-DNA结合方法的探讨
目的:探讨改良的凝胶阻滞法用于核蛋白-DNA结合的检测.方法:培养人真皮成纤维细胞,用维甲酸刺激不同时段,抽提其核蛋白,与32P-标记维甲酸反应元件(RARE)及维甲类X受体抗体α、β(RXR α、β)结合,进行凝胶阻滞分析.结果:细胞于不同状态可出现迁移率不同的条带,加入RXR β抗体可产生新的上移条带.结论:改良后的凝胶阻滞法较简单灵敏,可用于核蛋白-DNA结合的检测.
