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解脲脲原体对红霉素体外耐药性与ermB基因相关性研究
目的 探讨解脲脲原体(Uu)临床株对红霉素体外耐药性与ermB耐药基因之间的关系.方法 采用微量肉汤稀释法体外测定143株临床分离的Uu对红霉素的低抑菌浓度(MIC),以MIC≥8μg/ml为耐药判读标准;设计引物扩增ermB基因,并以多条带抗原基因为靶位设计引物对Uu进行生物学分群.结果 Uu对红霉素MIC范围为≤0.125μg/至≥128μg/ml,MIC50为16 μg/ml,MIC90≥128 μg/ml,耐药率为64.38%.ermB基凶总的阳性率为27.97%,主要分布在MIC≥8 μg/ml的菌株.两生物群之间不存在红霉素耐药性及ermB基因阳性率的差异.结论 ermB基因可能是介导Uu对红霉素耐药的基因,两生物群在对红霉素耐药性机制的差异需进一步研究.
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肠球菌的耐药基因研究
目的 了解肠球菌属的耐药性趋势和耐药基因分布,为临床合理用药提供依据.方法 采用VITEK2 COMPACT全自动微生物鉴定系统对2008年1月至2012年5月间临床送检标本中分离的319株肠球菌进行鉴定和药敏试验,采用PCR方法对ermB、mef、gyrA耐药基因进行研究.结果 319株肠球菌中以屎肠球菌多205株(64.26％),其次为粪肠球菌63株(19.75％),其他种类肠球菌51株(15.99％).肠球菌常用抗生素药敏结果显示屎肠球菌和粪肠球菌耐药率低的是万古霉素(1.0％,1.6％),其次是利萘唑胺和替考拉宁(3.9％,3.2％),耐药率高的是红霉素(94.6％,79.4％).肠球菌中ermB基因阳性率为73.4％(234/319),gyrA基因阳性率为67.1％(214/319),mef基因均为阴性.结论 肠球菌获得gyrA基因和ermB基因是肠球菌对氟喹诺酮类药物和红霉素类药物耐药的主要原因.
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肺炎链球菌对大环内酯类抗菌药物耐药机制的研究
目的 调查烟台地区肺炎链球菌对抗菌药物的敏感性,研究烟台地区肺炎链球菌对大环内酯类抗菌药物耐药机制.方法 收集社区和临床分离的肺炎链球菌.根据美国临床实验室标准化研究所/美国临床实验室标准化委员会(CLSI/NCCLs)的推荐,用K-B法、Etest法检测肺炎链球菌对青霉素等11种抗菌药物的耐药性及对大环内酯类抗菌药物的耐药表型;用聚合酶链反应(PCR)扩增耐药基因ermB和mefE基因.结果 42株肺炎链球菌中25株对青霉素低度耐药(65.0%),无对青霉素高度耐药株;肺炎链球菌对大环内酯类和克林霉索表现出极高的耐药率,对红霉素和克林霉素耐药率为98.0 %和93.0%;42株肺炎链球菌中40株检测到ermB基因、1株检测剑mefE基因,其中9株菌同时检测到ermB和mefE基因.结论 烟台地区对青霉素不敏感肺炎链球菌检出率高;对红霉素和克林霉素近乎全部耐药,ermB基因介导的靶位改变是烟台地区肺炎链球菌对大环内酯类抗菌药物的主要耐药机制.
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肺炎链球菌红霉素相关耐药基因与耐药表型的关系
目的 了解肺炎链球菌(SPN)临床分离株红霉素耐药基因的流行状况及和耐药表型的关系.方法 对2004年12月-2005年10月,住院患儿分离到的43株肺炎链球菌进行红霉素药敏试验,并用PCR法检测与红霉素耐药相关的红霉素核糖体甲基化酶基因(ermB)、主动外排转运基因(mefA).结果 43株肺炎链球菌红霉素药敏试验40株耐药(93.0%)、3株敏感;红霉素ermB基因总检出率为76.7%,mefA基因总检出率为23.3%,3株红霉素敏感肺炎链球菌均未检出ermB基因和mefA基因;40株耐红霉素肺炎链球菌ermB基因和mefA基因的PCR检出率分别为82.5%和25.0%;共有35株肺炎链球菌检出ermB基因或(和)mefA基因,其中单独携带ermB基因的耐药表型为25株,单独携带mefA基因的耐药表型2株,同时携带ermB基因和mefA基因的耐药表型8株.结论 ermB基因和mefA基因同时表达或单独表达均可导致红霉素耐药,ermB基因表达是儿童肺炎链球菌对红霉素耐药的主要原因,mefA基因表达是造成对红霉素耐药的次要原因,红霉素已不是治疗肺炎链球菌的有效药物.
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肺炎链球菌耐药表型及红霉素耐药基因分析
肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)是引起人类肺炎、脑膜炎及败血症的常见病原菌.近年来,肺炎链球菌对青霉素、红霉素等常用抗生素的耐药率逐年增高,导致经验用药失败,给抗感染治疗带来困难~([1]).为了解肺炎链球菌的耐药表型及红霉素耐药相关基因,本研究对2006-2007年分离自郑州大学第五附属医院就诊患者的87株肺炎链球菌株进行了药物敏感试验,并进行红霉素耐药相关基因核糖体甲基化酶基因(ermB)及主动外排转运基因(mefA)检测.结果报告如下.
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肺炎链球菌对抗菌药物的耐药性调查及对大环内酯类抗生素耐药机制研究
目的:调查成都地区肺炎链球菌对抗菌药物的敏感性,研究成都地区肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药机制.方法:收集2001年9月-2002年9月成都地区临床分离的肺炎链球菌,测定其对13种抗菌药物的耐药性及对大环内酯类抗生素的耐药表型;用聚合酶链反应(PCR)扩增耐药基因ermB和mefA,并对ermB和mefA进行基因序列分析.结果:82株肺炎链球菌中13株对青霉素低度耐药(占15.9%),肺炎链球菌对大环内酯类抗生素和克林霉素表现出较高的耐药率,对红霉素和克林霉素耐药率分别为80.5%(66/82)和68.3%(56/82).耐大环内酯类肺炎链球菌中,96.4%菌株表现为内在型耐药.标准菌株ATCC49619及16株红霉素敏感菌株均未检测到ermB基因及mefA基因;ermB基因和mefA基因分别在62和11株耐红霉紊肺炎链球菌中检测到,其中7株菌同时检测到ermB基因和mefA基因.所测ermB和mefA基因序列与基因库收录序列高度一致.结论:成都地区临床分离的肺炎链球菌对青霉素耐药率较低,但对大环内酯类抗生素和克林霉素耐药却非常普遍.ermB基因介导的靶位改变是成都地区肺炎链球菌对大环内酯类抗生素的主要耐药机制.
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肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药情况及耐药基因研究
目的调查上海地区肺炎链球菌对红霉素的敏感度,研究肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药机制.方法对中山医院57株临床分离肺炎链球菌进行红霉素药敏试验;应用聚合酶链反应(PCR)技术对上海4所医院中分离的53株红霉素耐药肺炎链球菌检测耐药基因(ermB,mefA,mefE).结果 57株肺炎链球菌中12株(21.0%)敏感,3株(5.3%)中介,42株(73.7%)耐药.53株红霉素耐药肺炎链球菌中,ermB基因、mefE基因、mefA基因分别在51株(96.2%)、22株(41.5%)和1株(1.9%)中检测到.其中21株(39.6%)同时检测到ermB基因和mefE基因,1株(1.9%)同时检测到ermB基因和mefA基因,1株(1.9%)未检测到ermB基因、mefE基因或mefA基因.结论上海地区肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药率较高.ErmB介导的靶位改变是常见的耐药机制,mef(特别是 mefE)介导外排机制引起者也较常见.
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住院婴儿呼吸道脲原体生物群和耐药性分析
目的 观察住院婴儿呼吸道脲原体的生物群构成和耐药情况,为预防和治疗婴儿脲原体感染提供依据.方法 于2012年11月-2015年12月1日采集某综合性三甲儿童医院住院婴儿鼻咽部咽拭子(痰液)标本,采用Mycoplasma IST-2 (bioMerieux)试剂盒对标本进行培养鉴定及药敏试验,采用PCR方法进行脲原体生物分群、红霉素甲基化酶(ermA、ermB、ermC)和主动外排泵(mefA/E、msrA/B、mreA)可转移耐药基因检测.比较不同生物群脲原体对9种常见抗生素耐药率和红霉素耐药基因检出率差异.结果 78株脲原体培养阳性,其中48株(61.54％)脲原体分离自早产儿.生物1群51株,占65.38％;生物2群27株,占34.62％.不同生物群在患儿性别、是否早产儿、年龄、出生胎龄、出生体重及住院天数等方面差异均无统计学意义(P＞0.05).78株脲原体对环丙沙星和氧氟沙星的耐药率较高,均为80.77％;对四环素的耐药率为1.28％;对多西环素、交沙霉素和原始霉素高度敏感;对大环内酯类抗生素(红霉素、阿奇霉素和克拉霉素)耐药率较低,均＜12％.不同生物群对这9种抗生素的耐药率差异均无统计学意义(P＞0.05).仅有甲基化酶耐药基因(ermB)、主动外排泵可转移耐药基因(msrA/B)阳性扩增,检出率分别为39.74％和12.82％.ermB主要存在于生物2群,检出率为55.56％ (P ＜0.05),msrA/B在脲原体两大生物群中分布较均衡(P＞0.05).78株脲原体分别来自新生儿败血症24例,先天感染性肺炎30例,早产儿视网膜病9例,新生儿颅内出血9例,支气管肺发育不良15例.这些疾病在生物1群和2群的分布差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 婴儿呼吸道分离的脲原体以生物1群为主,在早产儿中检出率更高;对大环内酯类抗生素耐药率较低,可作为治疗婴儿脲原体感染的首选药物;红霉素耐药基因ermB主要分布在生物2群.
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乐清地区儿童肺炎链球菌耐药性及大环内酯类耐药表型和耐药基因型
目的：了解乐清地区儿童患者分离的肺炎链球菌耐药性及大环内酯类耐药表型和耐药基因型分布情况。方法对2014年乐清地区儿童患者分离的124株肺炎链球菌采用细菌鉴定分析仪进行9种抗菌药物的低抑菌浓度（MIC）检测，同时对大环内酯类耐药肺炎链球菌用红霉素和克林霉素双纸片协同试验确定其耐药表型，用聚合酶链反应（PCR）扩增这些菌株的耐药基因ermB和mefE。结果124株肺炎链球菌中，红霉素、克林霉素、四环素和复方新诺明的耐药率依次为96.77％、93.55％、84.68％和81.45％；青霉素、氯霉素和左旋氧氟沙星的耐药率较低，分别为20.16％、5.65％和0.81％，未发现对阿莫西林/克拉维酸和万古霉素耐药的菌株。120株大环内酯类耐药肺炎链球菌中，大环内酯类耐药表型cMLS占96.67％、iMLS占0.83％、M型占2.50％；耐药基因ermB检出率为97.50％，mefE的检出率为6.67％。结论乐清地区儿童肺炎链球菌对大环内酯类抗生素的耐药性严重，ermB基因介导的cMLS型耐药是大环内酯类耐药的主要原因，大环内酯类抗生素已不是治疗乐清地区儿童肺炎链球菌感染的有效药物。
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肺炎链球菌耐药性检测及其对大环内酯类抗生素耐药机制的研究
目的 了解浙江地区肺炎链球菌临床菌株对临床常用抗生素耐药性以及肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药机制.方法 从浙江省不同地区病人临床标本中分离并鉴定肺炎链球菌138株.采用K-B纸片法和E-test检测上述肺炎链球菌临床菌株对9种抗生素的敏感性.采用PCR检测上述菌株中与大环内酯类抗生素耐药性密切相关的ermB和mefE基因携带情况.分析ermB和mefE基因携带、分布状况与红霉素耐药性关系.结果 138株肺炎链球菌临床菌株中,对红霉素耐药率高达93.5%(129/138),对头孢噻肟、头孢呋辛、阿莫西林和左氧氟沙星的耐药率较低(2.9%～4.3%).上述菌株ermB基因检测阳性率(91.3%,126/138)明显高于mefE基因(33.3%,46/138)(P<0.05),其中27.5%菌株(38/138)同时携带.不携带ermB和mefE基因菌株均对红霉素敏感,仅携带mefE基因菌株对红霉素耐药率(62.5%)明显低于同时携带两种基因菌株耐药率(100%)及仅携带ermB基因菌株耐药率(97.7%)(P<0.05).结论 红霉素已不适合作为治疗肺炎链球菌感染性疾病的药物.ermB基因是肺炎链球菌临床菌株携带的红霉素耐药相关优势基因.ermB基因可使肺炎链球菌产生较mefE基因更强的红霉素耐药性.
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长春地区猪链球菌对大环内酯和林克酰胺类耐药的分子机制研究
目的分析长春地区猪链球菌耐大环内酯类和林克酰胺类的分子机制.方法采用微量稀释法和双纸片扩散法分别测定相关抗生素的耐药谱和红霉素耐药型,并以猪链球菌的染色体DNA为模板,PCR扩增ermB基因和mefA/E基因,然后将其克隆到pMD18-T载体中,用双脱氧链末端终止法测定DNA序列后进行序列分析.结果22株猪链球菌的临床分离菌株均扩增出ermB基因,而未扩增出mefA/E基因;对四环素、环丙沙星和大环内酯和克林霉素有高的耐药率和耐药水平;红霉素的耐药型以CR型为主.同源性分析显示,ermB基因的差异为36%～100%,与GenBank中的肺炎链球菌、粪肠球菌等的erm基因有98%～100%的同源性.结论长春地区猪链球菌对MLSB的耐药是红霉素甲基化转移酶所介导的,以CR型为主的耐药,编码该类耐药的是ermB基因,并与人源及动物源性的耐药基因可能存在着广泛的交换.
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β溶血链球菌中诱导型克林霉素耐药的检测和分析
目的 了解β溶血链球菌对红霉素及克林霉素的耐药性,探讨红霉素对克林霉素诱导耐药的表型和基因型.方法 按CLSI推荐的K-B法测定并判读β溶血链球菌对红霉素及克林霉素的耐药性,用D试验检测红霉素诱导β溶血链球菌对克林霉素耐药的表型,并且用PCR方法确定所检测的菌株是否携带的ermB基因和mefA基因.结果 49株红霉素耐药的β溶血链球菌结果显示有35株β溶血链球菌只扩增到ermB基因,有9株只扩增到mefA基因,有3株同时扩增到ermB和mefA基因,有2株没有扩增到ermB和或mefA基因;17株红霉素耐药克林霉素敏感菌株中D试验阳性8株细菌都只扩增到ermB,D试验阴性9株细菌中都只扩增到mefA;红霉素敏感的β溶血链球菌没有扩增到ermB或mefA基因.结论 β溶血链球菌的耐药表型与基因型高度一致,临床上可用PCR方法和D试验检测,D试验检测更为简单方便,临床应该用D试验检测β溶血链球菌的iMLS型耐药.
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儿童肺炎链球菌红霉素、四环素相关耐药基因的研究
目的:了解儿童肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,SP)临床分离株红霉素、四环素耐药基因的流行状况及和耐药表型的关系.方法:对2005年1月～12月从温州附属育英儿童医院住院儿童分离到的47株肺炎链球菌进行了红霉素、四环素药敏试验,并用PCR法检测与红霉素耐药相关的红霉素核糖体甲基化酶基因(ermB)、主动外排转运基因(mefA),与四环素耐药相关的tetM基因.结果:47株肺炎链球菌红霉素敏感3株、耐药44株;四环素敏感5株、耐药42株.3株红霉素敏感的肺炎链球菌均未检出ermB基因和mefA基因;44株红霉素耐药肺炎链球菌ermB基因和mefA基因的PCR检出率分别为81.8%和29.5%.共有39株肺炎链球菌检出ermB基因或/和mefA基因,其中单独携带ermB基因的耐药表型为29株,占74.4%;单独携带mefA基因的耐药表型2株,占5.1%;同时携带ermB基因和mefA基因的耐药表型8株,占20.5%.47株肺炎链球菌tetM基因的检出率为87.2%,其中四环素耐药组的检出率是95.2%,敏感组为25%.结论:ermB基因和mefA基因同时表达或单独表达均可导致红霉素耐药,ermB基因表达是儿童肺炎链球菌对红霉素耐药的主要原因,mefA基因表达是造成对红霉素耐药的次要原因.tetM基因是造成儿童肺炎链球菌四环素耐药的主要原因.红霉素和四环素已不是治疗肺炎链球菌的有效药物.肺炎链球菌四环素耐药尚存在其他的耐药机制.
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儿童A族链球菌emm分型变迁与大环内酯类耐药的关系
目的 通过对1993-1994年和2005-2008年456株儿童A族β溶血性链球菌(GAS)分离株抗生素敏感性、耐药基因及转座子Tn916的emnm分型检测,探讨GAS对抗菌药物敏感性的变化与转座子Tn916的关系.方法 采用琼脂稀释法检测临床分离株对8种抗生素敏感性;PCR检测大环内酯类耐药基因ermB、ermTR、mefA,四环素耐药基因tetM和Tn916家族转座子基因int、xis; PCR扩增及测序对菌株进行emm分型;对每种emm型的代表菌株进行PFGE分型.结果 与1993～1994年比较,2005～2008年GAS菌株,红霉素、克林霉素、泰利霉素的耐药率增加(79.7％ vs 94.0％,75.4％ vs 96.9％,20.37％vs 87.93％);大环内酯类抗生素耐药菌株int、xis、tetM和ermB基因的携带率增加(P ＜0.05);emm型和emm12型菌株ermB基因携带率增加(65.20％vs 86.23％,7.7％vs 91.8％).结论 我国儿童GAS大环内酯耐药性在16年间增加,可能与emm型变化及大环内酯类抗生素耐药机制的变化有关,分离菌株的Tn916族变化可能与耐药性增加相关.
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解脲脲原体ermB基因与转座子遗传标记int-Tn的相关性
[目的]探讨解脲脲原体(Uu)临床株ermB耐药基因与接合转座子遗传标记int-Tn基因之间的关系.[方法]采用微量肉汤稀释法体外测定76株Uu对红霉素的低抑菌浓度(MIC),设计引物扩增ermB和int-Tn基因.[结果]Uu对红霉素MIC范围为≤0.125～≥128 μg/mL,MIC_(50)为32 μg/mL,MIC_(90)≥128μg/mL,耐药率为78.95%.共21株Uu菌株检测到ermB基因,其中19株的MIC≥8 μg/mL,2株的MIC=4μg/mL.21株Uu携带int-Tn基因,ermB基因与int-Tn基因之间有显著相关性.[结论]ermB基因可能是介导Uu对红霉素耐药的一种重要的基因,ermB与转座子遗传标记int-Tn基因密切相关.
