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60 Co辐射血红细胞CR1分子定量及基因表达的研究
随机选择A型ACD抗凝新鲜全血40份分别留取血样，再将血样分为：照射组与未照射组，前者应用30Gy 60Co г射线照射源单次均匀照射，剂量率77cGy/min，源物距80cm。标本均4℃保存。按常规方法测定红细胞CR1分子基因表达并于不同时间测定分子定量(测定时红细胞悬液浓度2.2×108/ml)。 红细胞CR1分子基因表达测定结果，照射组与未照射组高表达均为85%，中表达均为15%。 红细胞CR1分子定量测定：经30Gy60Co照射后1～21d红细胞CR1分子数目分别与未照射组比较差异无显著性(P>0.05)。照射组与未照射组红细胞CR1分子数目几乎与保存时间同步下降，3d分别与1d比较差异有显著性(P<0.01)；但至7d时下降幅度减小，分别与3d比较无明显差异(P>0.05)；然而至14d时下降幅度又明显增加，分别与7d比较差异有显著性(P<0.01)；直至21d时分别与14d比较差异有显著性(P<0.01)。高表达组和中表达组红细胞CR1分子数目照射后1d、3d、7d、14d和21d分别与未照射的高表达组和中表达组比较差异无显著性(P>0.05)。保存至1d、3d、7d时，高表达组(照射与未照射)红细胞CR1分子数目均比中表达组(照射与未照射)高，相互分别比较差异有显著性(P<0.05～0.01)，但在保存至14d、21d时，高表达组分别与中表达组相互比较则差异无显著性(P>0.05)。
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类风湿性关节炎造血干/祖细胞Wnt5a、β-catenin基因表达的研究
类风湿性关节炎( rheumatoid arthritis,RA)是一种以慢性破坏性关节炎为主要特征的系统性自身免疫病，其发病机制尚不清楚。近年来发现，RA患者造血干细胞/祖细胞( hematopoietic stem/progenitor cell，HSC/HPC)增殖能力受损，Wnt信号途径是调控HSC/HPC增殖的重要信号途径，可能参与其调节。本研究旨在对RA患者中外周血CD34+ HSC/HPC中Wnt5a、β-catenin mRNA的表达进行研究，了解Wnt信号途径分子基因表达的异常，为认识RA发病机制在HSC/HPC中的异常提供依据。
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大肠杆菌偏嗜性人胰岛素样生长因子1基因的克隆及表达
目的:提高以大肠杆菌为工程菌制备重组人胰岛素样生长因子1(rhIGF-1)的产率.方法:依据大肠杆菌遗传密码子使用频率表,人工合成3条DNA单链,PCR拼接扩增出适于在大肠杆菌中表达的人IGF-1基因.将此基因克隆入pGEM-T载体进行DNA序列分析后亚克隆入表达载体pBV220,诱导表达,表达产物行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,酶联免疫分析(ELISA)检测表达产物中rhIGF-1的含量.结果:经基因改造后,rhICF-1主要以包涵体的形式存在于碎菌后的沉淀中,其产率较改造前提高近4倍.结论:所构建的大肠杆菌偏嗜性人IGF-1基因可显著提高rhIGF-1的产率.
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尼古丁对炎性细胞活化及细胞间粘附分子基因表达的影响
本文观察了尼古丁对炎性细胞活化、炎性细胞与内皮细胞粘附及内皮细胞粘附分子表达的作用,同时观察764-3(从丹参中提取的单体)对上述部分作用的影响,将有助于阐明尼古丁在COPD等慢性炎症疾病发病中的作用并为防治提供实验资料.方法:按以往报道的方法,收集大鼠腹腔PMN,观察尼古丁作用下PMN释放的β-g及溶菌酶活性,以反映PMN的活化;培养脐静脉内皮细胞,加入PMN,以观察尼古丁对PMN-内皮细胞粘附的影响;转化及扩增含ICAM-IcDNA的质粒,酶切、PEG法纯化及琼脂糖凝胶电泳鉴定ICAM-IcDNA,提取内皮细胞总RNA,进行Northern blot,用光密度扫描仪确定杂交区带的光密度积分面积值代表mRNA水平,以观察尼古丁对ICAM-1 mRNA表达的影响.结果与结论:1.尼古丁对炎性细胞活化的作用.PMN加入尼古丁(500 μg/mL,下同)后β-g的活性(μg/10 7 h)由8.76±1.01(n=6,下同)增至26.01±3.87,溶菌酶的活性(μg/mL*h-1)由20.0±1.5增至47.0±5.8均P>0.05,加入764-3后则使两者活性分别降至17.62±4.10和38.9±6.6,与单加尼古丁相比P>0.05,说明尼古丁可活化PMN,764-3可对抗之.2.尼古丁对PMN和内皮细胞粘附的作用.加入尼古丁组与对照组相比粘附的PMN数(×104)由38.5±9.8(n=13,下同)增至61.0±4.4(P>0.05),加入764-3后则降至31.5±7.8,说明尼古丁可增强PMN与内皮细胞的粘附,764-3可对抗之.3.尼古丁对内皮细胞表达ICAM-1的影响.尼古丁刺激组与对照组相比mRNA的光密度值由479 477增至785 486,说明尼古丁可刺激内皮细胞的ICAM-1 mRNA表达增多.
