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MicroRNA-20a通过调节CKIP-1促进小鼠C3H/10T1/2成骨分化
目的:研究microRNA-20a (miR-20a)对小鼠C3H/10T1/2细胞成骨分化作用的影响及其调控机制.方法:对贴壁培养的小鼠C3H/10T1/2细胞成骨诱导不同时间,ALP染色及应用qRT-PCR验证其诱导结果,同时观察MiR-20a在诱导过程中表达变化;细胞转染MiR-20a mimics,CKIP-1 siRNA,在荧光显微镜下观察转染效果,应用qRT-PCR测定过表达及干扰效率;qRT-PCR检测过表达MiR-20a及干扰CKIP-1对细胞成骨分化的影响及过表达MiR-20a对CKIP-1基因表达的影响.结果:成骨标记基因ALP、OSX、OCN、BSP随小鼠C3H/10T1/2细胞诱导过程逐渐升高,且成骨诱导分化过程中MiR-20a表达上调.过表达MiR-20a促进C3H/10T1/2细胞成骨分化,成骨标记基因碱性磷酸酶(ALP)、RUNX2、OSX、OCN、BSP显著高于对照组,并且抑制CKI P-1的表达;干扰CKIP-1能促进细胞成骨标记基因表达.结论:MiR-20a可能通过下调骨形成负调节因子CKIP-1的表达促进C3H/10T1/2细胞成骨分化.
关键词： miR-20a CKIP-1 C3H/10T1/2 成骨分化 -
CKIP-1过表达对大鼠体外破骨细胞增殖影响的研究
目的 分离培养大鼠破骨细胞,构建CKIP-1过表达慢病毒,观察被CKIP-1过表达慢病毒感染的体外大鼠破骨细胞的细胞增殖情况,探讨CKIP-1基因对体外大鼠破骨细胞增殖的影响.方法 分离、培养SD大鼠原代破骨细胞,用抗酒石酸酸性磷酸酶染色法鉴定.构建CKIP-1过表达载体,完成慢病毒包装.将破骨细胞分为A组(破骨细胞空白对照组)、B组(破骨细胞+空载病毒组)、C组(破骨细胞+CKIP-1过表达病毒组),分别进行对应处理,qRT-PCR检测CKIP-1基因表达效果,CCK-8试剂盒检验破骨细胞的相对数量.结果 成功鉴定大鼠原代破骨细胞分离培养.qRT-PCR检测破骨细胞中CKIP-1的mRNA水平结果显示:相比A组和C组,在感染CKIP-1病毒的C组,CKIP-1的基因水平有较高表达(P<0.01),CKIP-1过表达载体过表达效果明显,载体构建成功.CCK-8试剂盒检测各组细胞增殖的结果显示:相比A组和C组,感染CKIP-1病毒的C组的细胞增殖比例显著升高(P<0.01).结论 成功分离培养出大鼠破骨细胞.成功构建CKIP-1过表达慢病毒,并感染体外大鼠破骨细胞.CKIP-1的过表达具有促进体外大鼠破骨细胞增殖的功能.
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CKIP-1、p-Akt在大肠癌组织中的表达及意义
目的 研究CKIP-1与大肠癌的发生发展、预后的关系及与PI3K/Akt通路的相关性,为大肠癌及分子靶向治疗提供可能的靶点.方法 收集大肠癌患者手术标本,通过免疫组化方法检测CKIP-1蛋白、p-Akt蛋白在大肠癌组织中的表达；分析CKIP-1的表达与大肠癌临床病理参数、p-Akt表达的相关性.结果 CKIP-1蛋白主要位于胞质及包膜上,部分位于胞核；CKIP-1蛋白在大肠癌组织中的阳性表达率显著低于癌旁正常组织；CKIP-1在腺瘤组织中的表达率显著低于癌旁正常组织.p-Akt阳性染色大部分定位于胞核；少部分也定位于胞质；p-Akt在大肠癌组织中的表达明显高于腺瘤组织,p-Akt在腺瘤组织中的表达明显高于癌旁正常组织,3者均具有显著性差异.CKIP-1的表达与大肠癌的分化程度显著相关,p-Akt的表达与大肠癌的分化程度、临床分期显著相关.在大肠癌中,CKIP-1蛋白的表达与p-Akt蛋白的表达呈负相关.结论 CKIP-1可能参与了大肠癌的发生发展,并可能通过下调PI3K/Akt介导的细胞信号转导通路发挥作用.
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CKIP-1基因对骨质疏松影响机制的研究进展
骨质疏松症（OP）主要是因为骨重塑过程平衡被打破，骨形成与骨吸收过程中后者占主导地位，导致骨量减少、骨微结构破坏、骨折概率增大的一种严重危害患者生命健康的骨代谢疾病。大量研究表明，酪蛋白激酶2相互作用蛋白1（CKIP-1）在骨组织增殖、分化过程中起重要作用，其主要与Smad泛素调节因子1（Smurf1）相互作用进而影响骨代谢，从而改变骨质疏松的发生和发展。主要概述CKIP-1及其对骨组织成骨分化方向的影响及其机制，并对相关研究进行展望，为今后骨科相关疾病的临床治疗提供新的思路和方法。
关键词： 骨质疏松症 CKIP-1 成骨分化 BMP通路 Smad泛素调节因子1 -
蛋白组学在骨质疏松中的应用
蛋白质组学技术的迅速发展使疾病特异性生物标记物的快速筛选成为可能,为疾病发病机制研究及新治疗方法探索提供了新途径,骨质疏松相关研究中双向电泳及质谱分析技术等蛋白质组学技术的应用较多,研究中探索了不同标本的预处理流程,并通过与网上数据库的比对可迅速确定蛋白质相关信息,目前已发现几个与骨质疏松相关的蛋白质,但研究均处于初级阶段,所发现的差异蛋白质尚需进一步研究,骨质疏松重要目标蛋白CKIP-1对骨质疏松的影响研究对于深入揭示骨质疏松的诊断和进一步治疗有重要作用.
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丹皮酚激活CKIP-1对高糖诱导的肾小球系膜细胞纤维化的影响
目的 观察丹皮酚通过激活CKIP-1,活化Nrf2抗氧化应激通路,进而抵抗高糖诱导的肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells,GMCs)中纤维连接蛋白(fibronectin,FN)和细胞间黏附分子1(intercellular cell adhension molecule-1, ICAM-1)表达增加的作用.方法 采用高糖刺激的 GMCs体外模型,观察丹皮酚对模型细胞FN、ICAM-1等炎性纤维化成分表达及CKIP-1、Nrf2抗氧化通路的影响;采用小分子RNA干扰GMCs CKIP-1的蛋白表达,免疫印迹法检测GMCs内Nrf2、HO-1、SOD1蛋白表达,DHE荧光探针技术检测细胞内超氧化物含量.结果 在高糖诱导的GMCs,丹皮酚能上调CKIP-1蛋白的表达,增加Nrf2的水平,以及Nrf2信号通路下游靶因子HO-1、SOD1的表达,有效减少胞内超氧化物和H2O2含量,终逆转 FN、ICAM-1表达的增加.在干扰CKIP-1表达后,丹皮酚升高Nrf2及HO-1、SOD1的作用明显减弱,不能有效减少胞内活性氧水平,终不能下调 FN、ICAM-1的蛋白表达.结论 激活CKIP-1,活化Nrf2信号通路,可能是丹皮酚抑制高糖引起的FN、ICAM-1上调的分子机制之一.
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益气温经方对CKIP-1介导的破骨细胞凋亡的影响
目的:观察益气温经方对酪蛋白激酶2相互作用蛋白1(Casein Kinase 2 Interaction Protein 1,CKIP-1)介导的破骨细胞凋亡程度的影响.方法:从SD乳鼠中分离破骨细胞体外培养,建立CKIP-1过表达和低表达载体,病毒包装构建稳定表达的细胞系.分为以下5组:破骨细胞对照组(A组),破骨细胞十空载病毒组(B组),破骨细胞+CKIP-1过表达病毒组(C组),破骨细胞+CKIP-1过表达病毒十益气温经方处理组(D组),破骨细胞+ CKIP-1低表达病毒组(E组).病毒感染96 h后,Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡.结果:在破骨细胞中,与A组相比,过表达CKIP-1病毒组凋亡细胞比例显著降低,差异有统计学意义(P=0.017),而益气温经方处理后,凋亡细胞比例有升高的趋势,与A组相比差异无统计学意义(P=0.059),与C组相比差异有统计学意义(P=0.000 6);与A组相比,低表达CKIP-1组凋亡细胞比例显著升高,差异有统计学意义(P＜0.000 1).结论:CKIP-1具有抑制破骨细胞凋亡的功能,益气温经方可能通过逆转这种趋势,抑制骨吸收,从而起到治疗骨质疏松的作用.
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Let-7i-5p靶向Ckip-1的验证
验证let-7i-5p可靶向小鼠Ckip-1(成骨负调控因子之一)的3'-UTR区域.PCR构建Ckip-1基因3'-UTR双荧光素酶野生型、突变型报告载体;生物信息学预测与Ckip-13'-UTR区域相互作用的miRNA;将双报告基因野生、突变型载体、Non-target Control共转染293T细胞.构建出野生、突变型Ckip-1基因3'-UTR双荧光素酶载体,用野生型质粒和let-7i-5p mimics共转染293T组的荧光素酶活性分别比对照组低60%.结果 表明含Ckip-1基因3'-UTR双荧光素酶野生、突变型载体构建成功,Ckip-1是let-7i-5p的靶标基因,let-7i-5p很可能通过靶向Ckip-1调节骨形成.
关键词： let-7i-5p 野生型、突变型报告载体 CKIP-1
