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稳定下调血管内皮钙黏蛋白表达对K562细胞药物敏感性的影响
目的:探索稳定下调VE-cadherin蛋白对K562细胞药物敏感性的影响及其可能的机制.方法:设计靶向人VE-cadherin的特异性干扰序列,连同IRES-GFP及NEO基因片段,构建重组慢病毒载体;三质粒系统包装慢病毒颗粒,感染K562细胞,筛选稳定下调VE-cadherin的K562细胞.应用CCK8法测定K562细胞对伊马替尼药物敏感性的变化,Annexin V/7-AAD标记细胞,流式细胞术检测细胞凋亡;荧光定量PCR检测白血病细胞CD133、ALDH1的转录水平;Western blot方法检测白血病细胞VE-cadherin、BCR-ABL和β-catenin表达水平.结果:成功构建重组慢病毒载体pLB-shVEC-NEO-IRES-GFP,并包装慢病毒,筛选出稳定下调VE-cadherin蛋白的K562细胞株.稳定下调K562细胞VE-cadherin表达后,在相同药物浓度处理下白血病细胞增殖率降低,凋亡率升高,CD133及ALDH1转录水平降低,BCR-ABL融合蛋白表达水平无明显变化,总β3-catenin蛋白表达水平下降,细胞核β-catenin蛋白水平亦下降.结论:稳定下调K562细胞VE-cadherin蛋白的表达可使白血病细胞药物敏感性增高,其机制可能与降低β-catenin蛋白的稳定性、减少β-catenin蛋白的核转位有关的.
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黄芪多糖联合多柔比星抗白血病细胞HL-60/A耐药的机制研究
目的:探讨黄芪多糖联合多柔比星对耐药白血病细胞HL-60/A的协同抗肿瘤机制.方法:RT-PCR、Westem blot及CCK-8试验鉴定急性早幼粒细胞耐药株HL-60/A的耐药表型;然后通过CCK-8试验检测黄芪多糖协同多柔比星对HL-60/A的抗肿瘤作用;Annexin-Ⅴ细胞凋亡实验检测不同药物处理后的细胞凋亡情况;Westem blot检测细胞内caspase级联系统激活情况;实时定量PCR及Western blot实验分析黄芪多糖对多药耐药蛋白MRP的表达及功能影响.结果:与敏感细胞相比,HL-60/A表现出明显的耐药特征,对多柔比星的耐药倍数约为HL-60的27倍.CCK-8试验证实,黄芪多糖可有效促进多柔比星对耐药细胞HL-60/A的杀伤,且黄芪多糖与多柔比星联用可显著诱导HL-60/A细胞凋亡,同时伴随凋亡级联信号系统激活.进一步研究发现,黄芪多糖可降低HL-60/A细胞表面的MRP表达,进而抑制MRP的外排功能,增加进入耐药细胞中的药物浓度.结论:黄芪多糖联合多柔比星可有效发挥对耐药白血病细胞HL-60/A的协同抗肿瘤作用,该作用可能是通过黄芪多糖抑制HL-60/A细胞表面的MRP表达、抑制药物外排,从而增加耐药细胞内药物浓度,诱导HL-60/A细胞凋亡实现的.
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异搏定逆转急性白血病耐药一例
多药耐药(MDR)的出现与肿瘤细胞内药物聚集降低有关,表明药物转运的改变(外排增加)可能是发生耐药的原因.P-糖蛋白(P-ap)是由MDR-1基因编码的分子量为170KD的跨膜糖蛋白,它是一种以能量依赖性的"药泵" ,能将疏水亲脂性的药物泵出细胞外,降低白血病细胞内抗癌药物的浓度,而无法构成对白血病细胞的有效杀伤.我们用异搏定联合化疗药物逆转急性白血病耐药1例.现报告如下.
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大黄素甲醚对白血病耐药细胞系K562/ADM耐药性的影响及机制研究
目的 评价大黄素甲醚对慢性粒细胞白血病(CML)耐药细胞系K562/ADM多药耐药的逆转作用及其机制.方法 CCK-8、克隆形成实验检测细胞的增殖变化,流式细胞仪、Hoechst染色检测细胞的凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot检测各相关基因的表达,迁移实验检测细胞的侵袭能力.结果 大黄素甲醚能增强K562/ADM细胞对ADM的敏感性,耐药逆转倍数在2和5 μmol/L的浓度下分别为2.03和5.30倍.miRNA-146a在K562耐药细胞系中低于K562细胞,而其在K562/ADM细胞中过表达能恢复细胞对ADM的敏感性.大黄素甲醚可以通过诱导miRNA-146a的表达抑制CXCL12/CXCR4信号通路从而能增强ADM抗肿瘤细胞增殖的作用.结论 大黄素甲醚可以通过上调miRNA-146a的表达抑制CXCL12/CXCR4信号从而逆转K562/ADM细胞对ADM的耐药性.
关键词： 大黄素甲醚 miRNA-146a CXCR4 白血病耐药 -
MRP1和XIAP基因在急性髓系白血病及细胞株中的表达及临床意义
目的 本研究旨在探讨多药耐药相关蛋白1 (MRP1)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因在急性髓系白血病(AML)患者及K562、K562/ADM细胞株中的表达,探讨其在AML发生及多药耐药中的意义.方法 应用实时荧光定量PCR方法和蛋白免疫印迹法检测81例AML患者与20例正常人骨髓细胞(对照组),以及K562、K562/ADM细胞株中MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白表达.结果 K562/ADM细胞MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白水平明显高于K562细胞(P＜0.05).AML患者初治组和复发难治组MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白表达水平均高于对照组(P＜0.05),复发难治组MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白表达水平明显高于初治组(P＜0.05).结论 MRP1、XIAP基因的异常表达与白血病发病及复发密切相关,可能通过诱导白血病细胞耐药及抑制细胞凋亡的途径发挥作用,其表达水平的高低对评估AML患者预后及治疗效果有重要意义.
