首页 > 文献资料
-
丙型肝炎病毒解旋酶活性高通量筛选模型的建立
目的 建立丙型肝炎病毒(HCV)解旋酶抑制剂高通量筛选模型,筛选抗HCV药物. 方法 应用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)法检测丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS3的解旋酶活性,并对反应温度、反应缓冲液pH、解旋酶浓度、底物浓度、ATP浓度等反应条件进行优化,建立筛选模型优化反应体系,通过Doxorubicin对反应体系进行验证. 结果 优化的解旋酶模型测定反应体系和条件为:反应温度为22℃,反应缓冲液pH值为7,酶浓度为5 μg/ml,底物浓度为5 nmol/L,ATP浓度为2.5 mmol/L.用优化的FRET测得2μmol/L Doxorubicin对解旋酶的抑制率为(59.1±17.4)％. 结论 建立了HCV解旋酶抑制剂FRET法高通量筛选模型,为新型HCV NS3解旋酶抑制剂的研发奠定了基础.
-
结核分枝杆菌β-内酰胺酶BlaC抑制剂筛选模型的建立及应用
随着多药耐药和广泛耐药结核的迅速蔓延,迫切需要寻求对抗结核的新手段.结核分枝杆菌对β-内酰胺类抗菌药物的固有耐药性限制了β-内酰胺类抗菌药物在结核治疗上的应用,而A类(Ambler分类)β-内酰胺酶BlaC的表达是结核分枝杆菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的主要原因.抑制BlaC可以恢复结核分枝杆菌对于β-内酰胺类抗菌药物的敏感性,因此BlaC抑制剂可能成为新型的抗结核药物增效剂,并成为治疗结核的新途径.在本研究中,表达并纯化了结核分枝杆菌BlaC,并以此为基础构建了BlaC抑制剂的筛选模型,通过条件优化使该模型适用于高通量筛选.通过对26 400个化合物样品的筛选,得到了22个BlaC抑制剂,阳性率为0.083％.这一研究为可用于临床的新型抗结核药物增效剂的发现奠定了基础.
-
白细胞介素1受体新型拮抗剂研究
采用基因重组白细胞介素1可溶性受体(sIL-1R1)为靶位,构建了新型ELISA高通量筛选模型,从微生物产物中筛选白细胞介素1受体拮抗剂,目前已从放线菌139中分离出一种新型白细胞介素1受体拮抗剂139A,研究表明是一种多糖,对其化学性质进行了深入研究,动物实验显示它对类风湿性关节炎有显著预防和治疗作用,有可能发展成为一种有应用前景的新药.
-
以p-TEFb为靶点抗HIV药物高通量筛选模型建立及在中药初筛中的应用
目的 建立以正向转录延伸因子(p-TEFb)为靶点的抗HIV药物快速高通量筛选模型,并运用此模型筛选抗艾滋病中药.方法 构建BD-Tat和AD-CyclinT1融合的酵母双杂交质粒,分别转入AH109和Y187,经接合实验获得二倍体菌株并对其进行毒性检测、自激活实验和报告基因表达检测,建立基于酵母双杂交的筛选模型.结果 运用此系统筛选具有提高机体免疫功效的20种中药,获阳性中药2种,其抗HIV活性已被体外抑制HIV实验证实.结论 该筛选模型可成功用于抗艾滋病化合物和中药的高效筛选,得到的2种阳性中药狗脊和黄连,值得进一步进行干扰HIV Tat和CyclinT1互作的有效成分分离研究.
-
作用于gp41的HIV融合抑制剂高通量筛选方法的研究
目的对作用于gp41的HIV融合抑制剂筛选方法进行研究和改进,使其成为更加简便的高通量药物筛选模型.方法采用夹心ELISA方法,检测HIV gp41六股α-螺旋束的形成.结果以特异性识别HIV gp41六股α-螺旋束的单克隆和多克隆抗体为基础建立的改良夹心ELISA方法,特异性好,准确性高,更为简便和经济,能稳定有效地检测样品对gp41六股α-螺旋束形成的抑制作用.结论本研究建立的改良方法可作为高通量药物筛选方法,用于从中草药库、噬菌体肽库和微生物发酵液等复杂组分样品中筛选作用于gp41的HIV融合抑制剂,以研究开发抗HIV药物.
-
流感病毒RNA聚合酶PA亚基：潜在抗流感药物靶点
流感是世界范围内的严重传染性疾病，目前抗流感药物面临的主要问题是病毒耐药性和对高致病性流感病毒的效价低。流感病毒RNA聚合酶是病毒在宿主细胞内完成复制和转录过程的关键性酶，其中PA亚基通过内切酶活性为流感病毒的转录过程提供引物，成为潜在抗流感药物靶点。该文对PA亚基的结构、功能及内切酶抑制剂类抗流感药物研究进展进行概述，为PA亚基的深入研究及针对此靶点的抗流感药物发现提供信息指导。
-
31种中药材的乙醇提取物抑制血管生成的活性研究
目的 筛选具有抑制肿瘤新生血管生成作用的药物.方法 建立抑制人血管内皮细胞(HMEC1)生长的高通量筛选模型,采用75％乙醇为溶剂浸提药材,研究提取物对HMEC1生长和鸡胚尿囊血管生成的抑制活性,筛选具有抑制HMEC1增殖活性和鸡胚尿囊血管生成的中药.结果 31种中药中对HMEC1增殖具有明显抑制活性的药材有7种,其中对鸡胚尿囊血管生成有明显抑制活性的有4种.结论 五倍子、钩藤、黄芩、蒲黄等4种中药具有潜在的研究开发的价值.
-
以大肠埃希氏菌肽脱甲酰基酶为靶点的高通量筛选模型的建立
本文用PCR法从大肠埃希氏菌K-12中克隆出肽脱甲酰基酶(peptide deformylase,PDF)基因,通过测序确证与文献报道的pdf基因序列完全一致.将pdf连接到原核蛋白表达载体pET-30-a(+)上,并转化到大肠埃希氏菌BL21(DE3)菌株中,IPTG诱导表达.过量表达的PDF酶用Q Sepharose HP离子交换柱和Superdex 75纯化得到高纯度Ni-PDF.应用荧光测试仪PolarFluostar检测PDF对底物For-Met-Ala-Ser的水解活性,PDF酶的已知抑制剂放线酰胺素(actinonin)为阳性对照,通过优化酶反应条件,建立了以PDF为靶点的高通量药物筛选模型.
-
白细胞介素1受体拮抗剂筛选模型研究
以链霉菌表达的重组hsIL-1RⅠ为靶位,建立了基于受体配基竞争性结合为原理、白细胞介素1受体拮抗剂筛选模型,对500株微生物发酵产物进行了筛选,复筛阳性率为4%～5%,该模型具有新颖性和实用性.
关键词： 重组白细胞介素1受体 ELISA检测 受体拮抗剂 高通量筛选模型 -
人二型大麻受体激动剂高通量筛选模型的建立
目的:基于二型大麻受体( CB2)的信号传递通路,建立体外高通量筛选CB2受体激动剂的药物模型.方法:将目的基因质粒pIRES2-EGFP-CB2、报告基因质粒pGL4.29[ luc2P/CRE/Hygro]、内参质粒PRL-TK共转染CHO细胞,通过检测双荧光素酶报告基因的表达水平变化来筛选人CB2受体的激动剂.并对加入激动剂的浓度和作用时间进行优化及考察模型的稳定性.结果:给予10 μmol/L JWH-015 6 h后能取得大相对诱导率.成功建立CB2受体激动剂的高通量筛选模型,筛选模型Z'因子为0.81,表现为良好的稳定性.结论:成功地建立了CB2受体激动剂的筛选模型,为从中药中高通量筛选有效物质奠定了良好的基础.
