首页 > 文献资料
-
我国西北地区蜱土拉弗菌感染的检测与基因分型研究
目的:了解我国西北部分地区蜱土拉弗菌自然感染状况及基因型别特征.方法:采用布旗法收集蜱标本,鉴定种属后采用巢式PCR检测土拉弗菌的fopA基因,阳性标本用型特异性引物鉴定细菌种,通过两短串联重复序列(SSTR9、SSTR16)位点扩增进行基因型分析,用生物学软件对序列进行比较.结果:共捕获11个蜱种、2460只蜱标本,PCR扩增土拉弗菌fopA基因7个蜱种75只阳性,总阳性率为3.05%,不同蜱种阳性率差异有统计学意义(x2=20.91,P<0.01),以日本血蜱的阳性率高,为17.39%.所有阳性标本均属于B亚种.75份阳性蜱标本在SSTR9区共有9种不同的基因型,其中拷贝数为9的基因型在阳性蜱标本中占40.o0%(30/75);不同地区的阳性标本在SSTR9区基因型别存在明显交叉,而在SSTR16区有完全相同的序列及重复序列的拷贝数.结论:我国西北部分地区存在蜱土拉弗菌感染,且细菌的基因型丰富、复杂.
-
应用AFLP方法对我国土拉弗菌基因分型的研究
土拉菌病又称"野兔热",是由土拉弗菌经患病野生动物、吸血昆虫或遭受污染的水或食物传播的一种自然疫源性疾病,呈世界性分布.其致病菌是革兰阴性胞内寄生菌,包括4种基因型.由于不同基因型在地理分布、毒性等方面存在较大差异,基因分型研究一直是该领域的研究热点,而近年来随着16S rRNA的序列分析、随机引物扩增多态性(RAPD)、限制性片段长度多态性(RFLP)、扩增片段长度多态性(AFLP)等分子生物学方法在细菌分型中的应用,世界范围内许多地区的土拉弗菌株得到了很好的基因型鉴别,也对一些传统认识提出了新的质疑,如欧亚地区是否也存在致病性较强的A型菌株?事实上在1998年科学家们证实了这一疑问[1].
-
应用短串联重复序列分析技术对我国土拉弗菌的分型研究
目的对我国土拉弗菌进行基因分型研究. 方法应用短串联重复序列(SSTR)分析技术对我国不同地区分离出的5株土拉弗菌菌株进行分型.SSTR9和SSTR16两个区域扩增后测序,并将结果与国外其它分离株进行比较. 结果 5株菌在SSTR9区重复序列的个数分别为21、9、12、9、15,片段长度分别为396bp、 288bp、315bp、288bp和342bp.在SSTR16区域扩增序列完全相同,拷贝数为2,片段长度为361bp.其中4株菌重复序列多态性与瑞典、芬兰等欧洲株接近,而分离自新疆的114菌株在SSTR9区存在独特的重复序列多态性,可能是我国特有的基因型. 结论 5个分离株均属于B型土拉弗菌,与型特异性引物分型结果一致.PCR-SSTR分析可作为国内土拉弗菌分型及进行个体菌株区分的可靠方法.
-
我国北方部分地区土拉弗菌感染宿主动物的分子流行病学研究
目的:了解我国北方部分地区宿主动物感染土拉弗菌状况和基因型别.方法:鼠夹诱捕鼠,从鼠脾组织提取DNA,应用巢式PCR检测土拉弗菌,计算并比较各地区及各鼠种阳性率.阳性标本用型特异性引物及短串联重复序列(SSTR9、SSTR16)引物扩增两区域并测序,用ClustalX(5.0)和DNA Club软件对序列进行比较分析.结果:共捕获鼠421只,分属14种鼠种,其中7个鼠种20份标本PCR检测阳性,总阳性率为4.75%.吉林、新疆、黑龙江、内蒙古和浙江的阳性率分别为11.65%,10.00%,6.54%,1.76%和0%.地区间阳性率差异显著(χ2 = 20.90,P = 0.0003);不同鼠种间阳性率未见差异(χ2 =11.82,P = 0.066).对20份扩增阳性标本进行型特异性扩增及SSTR9、SSTR16序列测定并对比分析,结果显示均为土拉弗菌B亚型,但型内差别较大,标本及菌株相互比较均显示基因多态性程度高且地区间有交叉.结论:我国北方部分地区可能依然存在B亚型土拉弗菌型感染(宿主动物)情况,且其基因型内差异较大.
