您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
AF239799-1基因文献资料
-
猪囊尾蚴膜联蛋白基因的原核表达和免疫学分析
目的 对猪囊尾蚴AF239799-1膜联蛋白基因进行高效原核表达,对表达产物进行免疫学分析. 方法 通过DNA自动合成仪,用固相亚磷酸酰胺法合成一段5'端有Nde Ⅰ内切酶位点,3'端有Xho Ⅰ内切酶位点的猪囊尾蚴AF239799-1基因序列,并将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,经测序、PCR及双酶切鉴定后,将其转入到宿主菌E.coli BL21 (DE3)中,用IPTG诱导表达,表达产物采用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,并用Ni-NTA亲和层析柱纯化,纯化的重组蛋白用Western blot进行免疫学分析. 结果 该基因全长为1 250 bp,编码区为2～1 042 bp,编码346个氨基酸,理论分子质量、等电点分别为40.39 ku和6.80.经DNA测序、PCR及双酶切鉴定,pET28a(+)-AF239799-1重组质粒构建成功.重组质粒在E.coli BL21 (DE3)主要以包涵体形式表达,Westernblot显示重组蛋白可被猪带绦虫病猪血清识别. 结论 猪囊尾蚴AF239799-1基因可在原核表达系统中高效表达,表达产物具有免疫反应性.
关键词： 猪囊尾蚴 AF239799-1基因 原核表达 免疫反应性
