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双重PCR和RAPD技术在宁夏鼠疫菌鉴定中的应用研究
目的 应用多重PCR和RAPD结合鼠疫常规检测方法对可疑鼠疫菌和自毙鼠脏器进行鉴定,应用多种实验室检测方法联合检测和鉴定鼠疫菌,为科学、快速、有效地判定鼠疫疫情提供实验室支持.方法 采用双重PCR对2009年宁夏2个鼠间鼠疫监测点分离获得的可疑菌株和部分自毙鼠脏器进行目标基因fra和pla片段扩增,并利用RAPD技术对2个监测点分离获得的鼠疫菌进行随机引物扩增基因表征分析.结果 共分离获得16株菌,所有菌株扩增出2条目标条带,分别为249 bp和456 bp.自毙鼠脾脏扩增出目标基因,肝脏扩增的目标基因条带较弱.RAPD显示所有菌株的扩增条带一致,表明此次分离得到的鼠疫菌株未发生变异.结论 双重PCR可作为实验室快速诊断和迅速判定鼠疫疫情的有效方法,用RAPD法筛选的鼠疫菌扩增的随机引物可为确定宁夏分离鼠疫菌株的标识图谱提供参考.
关键词： 鼠疫菌鉴定 双重PCR 随机扩增多态性DNA(RAPD) -
我国不同地区马来丝虫DNA多态性的比较分析
目的分析我国周期型马来丝虫DNA多态性. 方法收集长爪沙鼠保种的湖北谷城(H)株、四川乐山(S)株和浙江安吉(Z)株马来丝虫成虫,提取基因组DNA,采用RAPD技术分析DNA多态性. 结果得到17个DNA扩增片段,大小为50～1 000 bp.其中a、c为H、S、Z株共有条带, d、e、f、g为H、S株共有条带,b、h、i为H株特有条带.结论 RAPD分析3个地区株马来丝虫在基因结构上既有同源性,又存在差异,表明我国马来丝虫似有种内分化的趋向.
关键词： 丝虫 马来 基因组DNA 随机扩增多态性DNA(RAPD) -
随机扩增多态性技术在院内肺炎逆行感染途径研究中的应用
目的 为确证胃→咽→下呼吸道逆行感染途径存在与否，研究胃液pH值变化与院内感染性肺炎(nosocomial pneumonia,NP)发生的关系。方法 以气管切开(或插管)患者为对象，用防污染标本刷(PSB)采集标本，由细菌表型分型，直至质粒DNA、酶切、随机扩增多态性(RAPD)等基因分型，前瞻性观察NP的发生情况。结果 11名患者有逆行感染存在(发生率为22%)，即在胃部分离出病原菌1～2 d后，PSB在咽部及下呼吸道也检出相同的细菌，应用质粒图谱、酶切图谱和RAPD等分子生物学技术进行同源性分析，证明其具有很高的同源性；将美蓝经胃管注入患者胃内，1～2 d后在咽部及下呼吸道可检出蓝色分泌物；随着胃液pH值升高胃内细菌定植增加，NP的发生率升高。结论 存在胃→咽→下呼吸道的逆行感染途径；NP的发生与胃液pH值显著相关。
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小鼠肝癌H22细胞克隆株的RAPD分析
目的 应用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术检测小鼠肝癌H22细胞克隆株的遗传变异.方法 用47条引物对小鼠肝癌H22细胞的4个克隆株H22-H8D8,H22-H2G4,H22-H2E10,H22-H2C4基因组DNA进行RAPD分析.结果 47条引物均能扩增出明显的条带,条带数多为4～10条,片段大小在200～2000 bp之间.其中4条引物的扩增条带具有多态性,表现为带的有无、移动和强弱差异.结论 RAPD技术可以用来检测小鼠肝癌H22细胞克隆株基因组之间的差异.
关键词： 小鼠肝癌H22 克隆细胞株 随机扩增多态性DNA(RAPD) 遗传检测 -
肠炎沙门菌随机扩增多态性DNA分子分型
目的 对不同来源的12株肠炎沙门菌分离株进行分子分型.方法 分别提取不同菌株基因组DNA,建立和优化随机扩增多态性DNA(RAPD)反应体系,试用22条随机引物对不同菌株进行RAPD扩增,筛选清晰稳定的扩增条带做统计分析.结果 筛选到OPG-03、OPG-06、OPG-07和OPG-13共4条随机引物具有鉴别作用,每一菌株均可扩增出4～10条DNA片段,大多数片段在100～2 000bp之间,共扩增出42条RAPD条带,其中共有条带7条,多态性条带35条,多态性为83.3%.不同来源的肠炎沙门菌分离株之间的遗传相似系数在42.6%～100%之间,在0.850的相似性水平上可将12株肠炎沙门菌分离株分为5个不同的亚型.结论 应用RAPD技术在分子水平上对肠炎沙门菌进行鉴别和分型具有简便、快速和辨别能力高的优势,对肠炎沙门菌的分子流行病学研究具有较好的应用前景.
关键词： 肠炎沙门菌 随机扩增多态性DNA(RAPD) 分型 -
我国4省9株牛带绦虫RAPD分子鉴别分析
目的 分别对4省9株牛带绦虫标本进行分子鉴别.方法 分别取台湾桃园株(TW1),贵州都匀株(DY1、DY2)、贵州从江株(CJ1、CJ2、CJ3、CJ4)、云南大理株(DL1)和新疆乌什株(XJ1)成虫节片,提取DNA,以13条随机引物进行PCR扩增,用随机扩增多态性DNA(RAPD)分析,并构建不同地理株系统发育树.结果 13条引物共扩增RAPD片段331个(以相同bp数为依据).单条引物扩增的RAPD片段数在3～28个之间,13条引物平均扩增RAPD片段在6.11～24.56个,平均14.15个;9个不同地理株牛带绦虫平均RAPD片段在9.85～16.62,平均14.08个.系统发育树显示:9个不同地理株牛带绦虫分为两支,DY1、DY2、DLI和TW1聚为一支,属于牛带绦虫亚洲亚种;CJ1、CJ2、CJ3、CJ4和XJ1聚为另一支,属牛带绦虫指名亚种.结论 我国4省9株牛带绦虫分别属于牛带绦虫亚洲亚种和牛带绦虫指名亚种.RAPD分析可用于区分牛带绦虫亚洲亚种与牛带绦虫指名亚种的分类学参考.
关键词： 牛带绦虫 牛带绦虫亚洲亚种 随机扩增多态性DNA(RAPD) -
我国境内几种红豆杉的RAPD分析和染色体鉴定
用随机扩增多态性方法对6个红豆杉品种进行了基因组DNA多态性分析,从64条引物中共筛选出9个引物,获得RAPD谱带96条,其中多态条带(PPB)比率接近44.8%.D=0.60时,可将供试材料分为2类:第一类是西藏红豆杉,第二类包括其它5种红豆杉;D=0.50时,可将供试材料分为3类:第一类是西藏红豆杉,第二类是曼地亚红豆杉,第三类包括其它4种红豆杉;D=0.44时,进一步细分了其它4种红豆杉间的遗传差异,将东北红豆杉与其它3种区分开来.聚类分析结果表明:6个不同的红豆杉种间,中国红豆杉与南方红豆杉的亲缘关系近,西藏红豆杉与曼地亚红豆杉的亲缘关系远.几种红豆杉在染色体数目上并无差异.
关键词： 红豆杉 随机扩增多态性DNA(RAPD) 遗传多样性 -
分子生物学技术在寄生虫病防治研究中的应用
分子生物技术在寄生虫病诊断、分类以及流行病学调查方面得到广泛应用,本文就PCR、PCR-RFLP、RAPD等目前常用的分子技术作一综述,旨在为寄生虫病防治提供一定的参考价值.
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随机扩增多态性DNA(RAPD)技术用于青海田鼠鼠疫菌株亲缘性的研究
目的对青海省称多县境内和四川省石渠县境内青海田鼠体内分离的32株鼠疫耶尔森氏菌的基因进行分析,明确两地鼠疫耶尔森氏菌间的亲缘关系.方法用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术.结果扩增产物在凝胶电泳上显示的条带,除7株菌略有不同外,其余25株均相同.TreeView[Win32]统计软件分析的结果也显示两地鼠疫耶尔森氏菌之间具有很近的亲缘关系.结论青海省称多县和四川省石渠县青海田鼠体内分离到的鼠疫耶尔森氏菌在遗传学上属同一来源.
关键词： 随机扩增多态性DNA(RAPD) 青海田鼠 鼠疫耶尔森氏菌 -
安徽省三种常见蜚蠊基因组多态性DNA的研究
目的研究随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,用于蜚蠊分子分类.方法提取3种蜚蠊的基因组DNA,鉴定及定量分析.确定RAPD反应总体积、反应条件.选取3条不同的随机排列碱基顺序的多聚核苷酸单链为引物,进行RAPD-PCR扩增反应.将扩增产物制备成DNA图谱,通过对DNA图谱和遗传距离的分析,研究这三种蜚蠊基因组DNA的多态性.结果分别扩增出不同数量和分子大小的DNA片段.3种蜚蠊基因组DNA扩增产物中具有相同的DNA条带,这反映了各蜚蠊基因组DNA具有同源性 ;3种蜚蠊基因组DNA扩增产物又具有各自独特的DNA条带,DNA条带亮度也有差别.结论 RAPD技术可以精确地区别这三种蜚蠊.
关键词： 蜚蠊 基因组DNA 分类 随机扩增多态性DNA(RAPD) -
肺炎克雷伯菌随机扩增多态性DNA的分子流行病学研究
目的 采用随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型方法监测肺炎克雷伯菌医院感染.方法 对临床分离的36株肺炎克雷伯菌进行RAPD基因分型,并通过指纹图谱比较与分析,确证医院感染爆发.结果 36株肺炎克雷伯菌共分得33型,肺炎克雷伯菌医院感染局部流行共1起.结论 RAPD可对肺炎克雷伯菌进行分子流行病学调查.
关键词： 肺炎克雷伯菌 随机扩增多态性DNA(RAPD) 医院感染 -
应用RAPD技术检测小鼠肝癌H22细胞克隆株的遗传学改变
目的:用RAPD技术检测小鼠肝癌H22细胞克隆株的遗传变异.方法:小鼠肝癌H22细胞的4个克隆株H22-H8D8、H22-H2G4、H22-H2E10、H22-H2C4,用47条随机引物经PCR扩增,对扩增产物进行电泳,凝胶分析系统观察结果并照相.结果:47条引物均能扩增出明显的条带,条带数多为4～10条,片段大小在200～2 000 bp之间.其中4条引物的扩增条带具有多态性,表现为带的有无、移动和强弱差异.结论:RAPD技术可以用来对小鼠肝癌H22细胞克隆株进行遗传检测.
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院内感染性肺炎逆行感染途径的基因多态性研究
目的为确证胃→咽→下呼吸道逆行感染途径存在与否,研究胃液pH值变化与院内感染性肺炎(Nosocomial pneumonia,NP)发生的关系.方法以气管切开(或插管)病人为对象,用防污染标本刷(PSB)采集标本,由细菌表型分型,直至质粒DNA、酶切、随机扩增多态性DNA(RAPD)等基因分型,前瞻性观察NP的发生情况.结果 11名患者有逆行感染存在(发生率为22%),即在胃部分离出病原菌1、2 d后,PSB在咽部及下呼吸道也检出相同的细菌,应用质粒图谱、酶切图谱和RAPD等分子生物学技术进行同源性分析,证明其具有很高的同源性.将美蓝经胃管注入病人胃内,1、2 d后在咽部及下呼吸道可检出蓝色分泌物.随着胃液pH值升高,胃内细菌定植增加,NP的发生率升高.结论存在胃→咽→下呼吸道的逆行感染途径.NP的发生与胃液pH值显著相关.
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淋球菌的RAPD基因分型研究
目的探索RAPD指纹图谱测量淋球菌临床分离株间的遗传距离,建立淋球菌基因分型方法.方法采用随机扩增多态性DNA技术,应用6组随机引物对待测淋球菌现场分离样本株的基因组DNA进行图谱分析,相似性距阵构建和进化树分析.结果同一地区的淋球菌分离株之间存在相当大的DNA多态性,但有一定亲缘关系.TreeView[win32]统计软件分析结果也支持这一结果.结论RAPD可用于鉴别淋球菌临床分离株流行病学关联,是一种实用而敏感的分子技术,有助于了解菌株来源,菌株间的克隆相关性及抗生素耐药性菌株的传播特点.
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采用RAPD技术对人参属的亲缘关系和鉴别的分析
目的:分析人参属3种植物的亲缘关系及其可用于鉴别的特异性DNA片段.方法:采用随机扩增多态性DNA分子标记技术(RAPD)对人参属3种药材的基因组DNA进行多态性分析,筛选特异性片段并进行切胶回收、克隆及测序.结果:从120条随机引物中筛选出12条随机引物用于聚合酶链式反应(PCR)扩增,共扩增出111条扩增片段,其中多态性位点107,多态性百分率为96.40％;从聚类分析图可以看出:人参与西洋参的种间亲缘关系近,聚为一类,而三七相对其他2种较远,单独聚为一类;将筛选出的显性标记的特异性片段进行切胶回收、克隆并测序获得其DNA序列.结论:aRAPD标记技术从分子水平提示了人参属3种植物的亲缘关系,并为后期的特异性鉴别提供基础.根据序列设计用于鉴别人参、西洋参、三七的特异性PCR引物,实现从理论研究向药材鉴别实际运用的转变.
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大麻的DNA分析检验技术
本文简要回顾了大麻的一些常规检验方法,并重点综述了大麻植物的DNA分析检验技术,包括随机扩增多态性DNA(RAPD)、测序扩增区段(SCAR)、短串联重复序列(STR)、扩增片段长度多态性(AFLP)、单核苷酸多态性(SNP)等DNA分子标记检测法.并且对这几种技术的应用范围及前景做了简要分析,以期为实践工作提供基础理论帮助.
