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ACBD3文献资料
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ACBD3基因片段真核表达载体的构建与表达
目的 构建ACBD3基因片段真核表达载体并表达蛋白,为研究其与肺炎衣原体包涵体膜蛋白Cpn0308/Cpn0147相互作用的分子机制奠定基础. 方法 根据与肺炎衣原体包涵体膜蛋白Cpn0308/Cpn0147作用的配体核苷酸序列设计引物,以HeLa细胞cDNA为模板,通过PCR获得ACBD3基因片段,与pcDNA3.1 +/Flag质粒经双酶切后在T4连接酶作用下连接,构建表达载体pcDNA3.1 +/Flag-ACBD3,经菌落PCR、双酶切及质粒测序鉴定后转染He-La细胞,采用Western blot与间接免疫荧光法检测目的蛋白表达. 结果 PCR扩增目的基因片段约883 bp,与预期相符.经菌落PCR、双酶切验证及测序分析重组质粒构建成功.间接免疫荧光法检测重组质粒转染后的HeLa细胞,观察到表达的蛋白位于细胞胞浆;SDS-PAGE检测表达蛋白分子质量单位(Mr)为33.5×103,与预期相符. 结论 成功构建了pcDNA3.1 +/Flag-ACBD3真核表达载体并实现目的蛋白的表达,为进一步研究其生物学功能及其与肺炎衣原体包涵体膜蛋白Cpn0308/Cpn0147之间的相互作用奠定了基础.
关键词： ACBD3 真核表达载体 Western blot 间接免疫荧光
