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EV71)文献资料
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肠道病毒71型2C蛋白的异源表达及纯化
目的 获得高纯度、性状均一的可溶蛋白肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)2C. 方法 截取2C蛋白的6个包含ATPase/解旋酶等核心结构域的基因片段,分别使用含有His标签和MBP促溶标签的表达载体在大肠埃希菌中进行异源表达,分子筛层析纯化2C蛋白,SDS-PAGE电泳检测表达产物和纯化蛋白. 结果 成功将EV71 2C蛋白的6个片段进行了克隆表达并纯化,获得了高纯度、性状稳定的可溶蛋白MBP-2C 91aa-256aa和MBP-2C 118aa-256aa.SDS-PAGE检测2C蛋白纯度达97％以上,分子质量与预期结果一致.纯化的2C蛋白浓度为8.8 mg/ml. 结论 91aa-256aa和118aa-256aa片段的MBP-2C截短蛋白比包含其他片段的截短蛋白性状稳定、均一,MBP标签提高了2C的6个截短蛋白的可溶性.高纯度可溶蛋白的制备为其晶体结构和功能研究奠定了基础.
