首页 > 文献资料
-
微量核酸样品的双重限制性荧光标记技术
目的采用双重限制性荧光标记技术(double restriction fluorescent labeling,DRFL)标记微量核酸样品,提高基因芯片用于病原体检测的灵敏度.方法以限制性显示技术处理SARS-CoV核酸样品,分别采用传统限制性荧光标记技术(直接采用荧光标记的通用引物标记)和双重限制性荧光标记技术(荧光标记的通用引物和荧光标记的dNTP的双重荧光标记)标记,进一步在同等条件下与基因芯片进行杂交、清洗和芯片扫描检测.通过对杂交结果的分析,比较2种标记方法的标记效果.结果以DRFL方法标记SARS基因片段,其荧光强度均值比传统荧光标记方法提高了3.5835倍.结论 DRFL技术有效地提高单位分子标记片段的荧光强度值,提高了检测的灵敏度,可用于微量病原体核酸样品的基因芯片检测.
-
HIV检测长寡核苷酸芯片的研制和临床初步应用
目的研制人类免疫缺陷病毒(HIV)快速筛查的寡核苷酸芯片并初步应用于临床.方法以HIV 2个基因型(包括9个亚型)的32株典型性代表株和HIV-2特有的vpx序列的保守序列为靶序列,设计长寡核苷酸探针,并制备成Oligo芯片.样品经随机特异性引物PCR标记后与芯片杂交,PCR产物同时进行测序分析.结果 1例HIV患者芯片杂交结果阳性,20名健康对照血清均为阴性.阳性标本的序列分析表明,芯片杂交结果符合测序的分型结果.结论此芯片可初步用于检测血清HIV RNA,并对HIV基因(亚)型进行分析.
-
寡核苷酸芯片技术在甲型流感及登革病毒检测分型中的初步应用
目的 建立寡核苷酸芯片检测技术,对甲型流感病毒及登革病毒进行早期检测及分型.方法 根据Genebank中病毒基因组序列的保守区域,设计病毒的特异性检测探针,制备病毒检测芯片;利用限制性显示技术标记样品中的病毒靶序列,将标记产物与芯片杂交、清洗、扫描及结果分析.结果 该方法可以正确检测到细胞培养所获得的甲型(H1N1,H3N2)流感病毒和登革四型病毒.结论 寡核苷酸芯片技术可应用于多种病毒及其亚型的早期检测.
-
Agilent 2100 Bioanalyzer在基因差异表达研究中的应用
目的观察Agilent 2100 Bioanalyzer芯片分析系统(以下简称Bioanalyzer)在基因差异表达研究中的应用.方法应用限制性显示技术分别从正常和热休克处理后的酿酒酵母细胞中分离出cDNA片段,然后再用Bioanalyzer和传统的琼脂糖凝胶电泳技术对RD-PCR产物进行检测分析.结果Bioanalyzer能更快速、敏感地分离和显示差异表达的基因片段,并且通过对差异片段进行定量比较,发现了数个表达有明显差异的基因片段.结论Bioanalyzer在基因差异表达研究中具有重要的应用价值.
-
限制性显示技术作为一种高密度长链寡核苷酸芯片样本标记方法的初步研究
目的初步研究限制性显示技术(RD-PCR)作为一种高密度长链寡核苷酸芯片样本标记方法对芯片杂交信号的影响.方法收集3个健康人外周血单核细胞,提取RNA后分为两组,采用RD-PCR进行样本双色(Cy3/Cy5)荧光标记,与3张Agilent 60 mer高密度(22 K)人1B寡核苷酸芯片进行杂交.排除阴性和阳性对照信号值、Cy3和(或)Cy5的前景与背景间无统计显著性差异点的信号值,进一步排除两种荧光标记间存在统计显著性差异点的信号值,将3张芯片的共同信号值用于分析.SPSS软件进行常规统计分析和作图,R语言环境下的VSN统计包排除芯片间和两种不同荧光标记间的系统误差.结果 3张芯片的8744个共同点用于本研究.芯片间及两种荧光标记间存在明显的可校正的系统误差.芯片间杂交信号值相关显著.RD-PCR样本标记方法对较低表达基因信号值较为敏感.结论初步的统计分析结果表明,RD-PCR是一种潜在的有用的高密度长链寡核苷酸芯片样本标记方法.
关键词： 限制性显示技术 高密度长链寡核苷酸芯片 样本标记 -
精子基因表达谱研究初探
目的应用限制性显示技术,收集正常成年男性的精子基因表达谱探针,制备相应的精子表达谱芯片,以对成年男性正常精子的基因表达情况有一全面、系统的了解.方法提取成年男性正常精子的总RNA,逆转录为cDNA,经限制性内切酶酶切、加接头、PCR扩增、转化、克隆、鉴定等操作,收集成年男性正常精子的基因表达谱探针,制备相应的精子表达谱芯片,并进行初步的杂交分析.结果收集了1 859个基因片段,取其中368个基因探针制备芯片,进行了小量初试.结论证实在精子中有大量基因表达;提示我们自行制备的精子基因表达谱探针也具有较好的特异性和可信性.
-
黄热病病毒检测基因芯片的研究制备
目的制备黄热病病毒寡核苷酸检测芯片.方法根据黄热病病毒基因组序列,并应用生物信息学软件设计出22条寡核苷酸探针用于制备基因芯片.克隆于质粒上的黄热病病毒全长基因经限制性显示技术完成扩增并标记,杂交清洗后对芯片进行扫描和数据分析.结果大部分黄热病病毒寡核苷酸探针检测出阳性信号,阴性对照和空白对照检出阴性信号.结论基因芯片技术为黄热病病毒检测提供了一种早期、快速、可靠的方法.
-
乙型脑炎病毒寡核苷酸基因芯片研究
目的:制备检测乙型脑炎病毒寡核苷酸(oligo)基因芯片.方法:应用生物信息学软件设计60-mer oligo探针用于制备基因芯片,乙型脑炎病毒(JEV)基因片段经限制性显示技术扩增标记,用于芯片杂交,清洗和干燥后对芯片进行扫描和数据分析.结果:大部分oligo探针都能特异性与相应样品杂交,呈现阳性荧光信号,而阴性对照和空白对照则基本不能检测到荧光信号.结论:实验中建立的oligo基因芯片检测病原体方法可行,具有应用于临床诊断的前景.
