您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
蛋白标准品文献资料
-
无融合标签人胱抑素C重组蛋白的制备
目的 构建人胱抑素C(CysC)基因的原核表达质粒pCold TF-CysC,表达并制备去标签蛋白的CysC.方法 用人CysC的全长编码基因插入原核表达载体pCold TF并测序鉴定.将重组质粒转化到大肠杆菌BL21 (DE3),经IPTG诱导、镍柱纯化后获得带有His标签的重组蛋白TF-CysC.利用GST-HRV 3C蛋白酶去除该融合蛋白的TF标签,再经分子筛一步法同时去除TF标签、3C蛋白酶获得CysC,SDS-PAGE鉴定其纯度.用该CysC免疫新西兰大白兔,制备抗血清,并用间接ELISA及Western blot鉴定.结果 测序结果与Genbank中人CysC序列一致,实现了CysC可溶性高表达.纯化的无标签CysC纯度大于95％,分子质量约为13.3 ku,与预期相符.免疫家兔后,获得的抗血清效价达到1:4×106以上,能特异性识别市售CysC蛋白.该蛋白稳定性良好,在4℃保存一个月未见明显下降.结论 成功应用原核表达系统,获得了可用作免疫诊断试剂标准品的CysC,为进一步建立CysC的免疫检测方法奠定了基础.
-
标准品、试剂对血清蛋白标准化测定影响的探讨
为了提高血清蛋白测定的准确性,在实验方法标准化的前提下 [1],分别用国内外五个厂家的蛋白标准品定标,以溴甲酚绿法和双缩脲法对其余四个厂家的蛋白标准品和质控血清进行平行对比测定,拟筛选出一个较好的标准品及试剂,测定结果经统计学分析显示:以自配试剂,上海生物制品研究所的蛋白标准品定标,用于临床检测血清总蛋白(平均VIS 68.2)和白蛋白(平均VIS 37.2)准确、经济、实用.
