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微量核酸样品的双重限制性荧光标记技术
目的采用双重限制性荧光标记技术(double restriction fluorescent labeling,DRFL)标记微量核酸样品,提高基因芯片用于病原体检测的灵敏度.方法以限制性显示技术处理SARS-CoV核酸样品,分别采用传统限制性荧光标记技术(直接采用荧光标记的通用引物标记)和双重限制性荧光标记技术(荧光标记的通用引物和荧光标记的dNTP的双重荧光标记)标记,进一步在同等条件下与基因芯片进行杂交、清洗和芯片扫描检测.通过对杂交结果的分析,比较2种标记方法的标记效果.结果以DRFL方法标记SARS基因片段,其荧光强度均值比传统荧光标记方法提高了3.5835倍.结论 DRFL技术有效地提高单位分子标记片段的荧光强度值,提高了检测的灵敏度,可用于微量病原体核酸样品的基因芯片检测.
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微量核酸样品的双重限制性荧光标记技术
目的 采用双重限制性荧光标记技术(double restriction fluorescent labeling,DRFL),标记微量核酸样品,探索提高基因芯片用于病原体检测的灵敏度.方法 以限制性显示技术处理SARS-CoV核酸样品,分别采用传统限制性荧光标记技术(直接采用荧光标记的通用引物标记)和双重限制性荧光标记技术(荧光标记的通用引物和荧光标记的dNTP的双重荧光标记)进行处理,并进一步与基因芯片进行杂交,在同等条件下进行杂交、清洗和进行基因芯片的扫描检测.通过对杂交结果的分析,比较两种标记方法的标记效果.结果 以DRFL方法标记SARS基因片段,其荧光强度均值提高了3.5835倍,但互相对应的每个探针之间的荧光信号提高程度存在差异.结论 DRFL技术能有效地提高单位分子标记片段的荧光强度值,并进一步提高了检测的灵敏度,可用于微量病原体核酸样品的基因芯片检测.
