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ZNF330促进红系分化
目的：探索ZNF330对红系分化的影响及作用机制。方法用hemin诱导K562细胞向红系分化，用real-time PCR检测ZNF330的表达；ZNF330的RNAi 慢病毒颗粒感染CD34＋细胞并向红系诱导后用real-time PCR检测CD235a和γ-globin的表达。在293T／17细胞中，用双荧光报告系统检测ZNF330是否具有转录激活作用；在293T／17细胞中，用Co-IP检测ZNF330与mRNA降解途径中ZNF408的相互作用。结果在hemin诱导的K562细胞向红系分化过程中ZNF330表达逐渐升高；抑制ZNF330后，CD34＋细胞中红系分化标志CD235 a和γ-globin的表达下降（ P＜0.05）；未检测到ZNF330的转录激活结构域；双向Co-IP证明ZNF330与ZNF408是相互作用蛋白。结论ZNF330促进红系细胞分化，一个可能的机制是通过与一个参与mRNA降解途径的因子ZNF408的相互作用。
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雷帕霉素对 K562细胞溶酶体的影响
雷帕霉素(RAPA)是一种大环内酯类免疫抑制剂，具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制侵袭、抑制血管生成等作用。RAPA 常应用于肝移植[1]、肾移植、骨髓移植后。其主要作用机制是与免疫亲和蛋白(FKBP12)结合形成 RAPA-FKBP12复合物，作用于哺乳动物细胞的雷帕霉素靶点(mTOR)，从而阻断其下游分子而促进细胞凋亡、抑制蛋白合成而达到免疫抑制和抗肿瘤作用。溶酶体是真核细胞中的一种细胞器，含有多种水解酶，其中酸性磷酸酶是溶酶体的标志酶，参与细胞的凋亡和坏死。通过对经不同浓度雷帕霉素处理的 K562细胞进行酸性磷酸酶的免疫组织化学染色，观察雷帕霉素对 K562细胞溶酶体的影响，从酶组织化学方面探讨雷帕霉素对 K562细胞代谢、凋亡的作用。
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节律基因 per2在慢性粒细胞白血病中的表达及与 bcr／abl 的相关性
目的：探讨节律基因 per2在慢性粒细胞白血病中的表达及其与白血病融合基因 bcr／abl 的关系。方法收集30例慢性粒细胞白血病病人和9例健康对照的骨髓标本，RT-PCR 检测 per2和 bcr／abl 融合基因的表达，并分析两者之间表达的关系；不同浓度甲磺酸伊马替尼作用 K562细胞不同时间后，通过 RT-PCR 检测 bcr／abl 和 per2水平变化。结果研究发现 per2在慢性粒细胞白血病中表达降低，并且与 bcr／abl 的表达呈负相关。用甲磺酸伊马替尼处理 K562发现，随着 bcr／abl 的表达降低，per2的表达升高。结论per2在慢性粒细胞白血病中表达下降，并且和bcr／abl 的表达呈负相关，提示 per2在慢性粒细胞白血病的发生发展中发挥作用。
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脐血单个核细胞对 K562细胞增殖的影响
目的：建立脐血单个核细胞与 K562细胞共培养体系，探讨脐血单个核细胞对 K562细胞增殖的影响。方法将脐血单个核细胞和对数生长期的 K562细胞采用 Transwell 小室共培养，以单独培养的 K562细胞为对照，于培养后的第1、3、5、7天分别选择6孔细胞进行计数比较。结果培养后第3、5、7天，共培养组 K562细胞较单独培养的 K562细胞明显增加，差异均有统计学意义（P ＜0．01）；随着培养时间的延长，组间差异增大。结论脐血单个核细胞可以促进 K562细胞的增殖。
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鬼臼毒素衍生物LN-13诱导多药耐药细胞K562／A02凋亡及其机制
目的：研究新型鬼臼毒素衍生物LN-13对多药耐药肿瘤细胞株K562／A02产生的凋亡作用及潜在机制。方法MTT法测定LN-13和阳性对照药VP-16抑制K562／A02细胞48 h后的生长情况及其IC50值，Hoechst 33342、PI双染色观察LN-13作用K562／A02细胞48 h后的形态变化，流式细胞术测定LN-13作用K562／A02细胞48 h的凋亡情况，RT-PCR检测LN-13作用K562／A02细胞后Bcl-2、Bax、Caspase-3、mdr-1基因表达的影响，Western blot 检测 LN-13作用K562／A02细胞后P-gp的表达情况。结果 LN-13对K562／A02细胞生长有显著地抑制，IC50值3.32μmol · L－1，Ho-echst 33342、PI双染色观察到LN-13作用后，K562／A02细胞发生明显凋亡形态。流式细胞术检测LN-13（2、4、8μmol· L－1）作用K562／A02细胞48 h后，出现剂量递增趋势的凋亡比例，分别达到15.0％、48.0％、68.96％。另外，随着LN-13剂量增加，K562／A02细胞的Bax、Caspase-3基因表达增加， mdr-1基因表达减少，另外也下调了P-gp表达，差异有统计学意义。结论 LN-13可诱导多药耐药肿瘤细胞K562／A02产生凋亡作用，其机制可能是通过抑制P-gp蛋白表达及凋亡相关基因表达。
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注射用核糖核酸Ⅱ上调p53诱导人白血病细胞凋亡
目的：研究注射用核糖核酸Ⅱ诱导人白血病细胞系K562和KG1 a细胞凋亡的作用。方法以K562和KG1 a细胞为研究对象，采用CCK-8法检测注射用核糖核酸Ⅱ对细胞增殖的影响；流式细胞术检测细胞凋亡率的变化；Hoechst 33258染色观察细胞核形态；免疫印迹技术检测p53及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3的表达。结果以100～300 mg·L－1注射用核糖核酸Ⅱ处理K562和KG1a细胞12、24、48 h后，CCK-8检测结果显示K562和KG1a细胞的增殖降低，抑制率明显增高，并呈时间剂量依赖性；100、150、200 mg·L－1注射用核糖核酸Ⅱ处理K562和KG1 a细胞24 h后， FCM结果显示细胞凋亡率随药物剂量增加而增高；Hoechst 33258染色观察到细胞核出现染色质浓缩聚集、染色加深等凋亡指征；Western blot结果显示，注射用核糖核酸Ⅱ上调p53、Bax和cleaved caspase-3的表达，下调Bcl-2表达。结论注射用核糖核酸Ⅱ通过上调p53，调控Bcl-2／Bax的表达，激活caspase-3诱导人白血病K562和KG1 a细胞凋亡。
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5-异丁基-3-（2-氯）苄氧基乙内酰脲对白血病细胞K562生长与凋亡的影响
目的：探讨5-异丁基-3-（2-氯）苄氧基乙内酰脲（YL3）对白血病细胞 K562细胞生长与凋亡的作用。方法将K562细胞置于含10％FBS的 RPMI-1640培养液中培养。实验分4个组：空白对照组、阴性对照组、阳性对照组（HU组）、受试药物组（YL3组）；除空白对照组外，其余3组均接种K562细胞；HU组、YL3组分5个亚组，分别加入10-3～10-7 mol·L-15个梯度浓度的 HU或 YL3。采用 MTT法检测 YL3对 K562细胞增殖的影响；AV/PI双染流式细胞术检测 YL3对 K562细胞凋亡的影响；瑞氏染色法观察细胞形态的变化。结果 YL3在10-3～10-6 mol·L-1浓度范围内显著抑制 K562细胞增殖（P＜0．01或 P＜0．05），其半数细胞抑制浓度（IC50）值为88．5μmol·L-1；YL3有促进K562细胞凋亡的作用，其高剂量的凋亡率显著高于同剂量的 HU组（P＜0．01），且呈量效关系（P＜0．05）。结论5-异丁基-3-（2-氯）苄氧基乙内酰脲具有抑制 K562细胞增殖，诱导其凋亡的作用。
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整合素信号转导通路对K562细胞凋亡的影响
目的 探讨整合素介导的细胞凋亡抑制途径是否参与了慢性粒细胞白血病(CML)急变期细胞株K562细胞的凋亡耐受机制,以求为CML的治疗提供新思路.方法 流式细胞术和丫啶橙双色荧光显微镜分析检测抗整合素α5β1单抗(Anti-α5β1)对K562细胞凋亡的影响,Western blot技术和RT-PCR技术分析Anti-α5β1对K562细胞内凋亡相关因子PI3K、AKT和survivin表达的影响.结果 Anti-α5β1可通过抑制K562细胞内PI3K和survivin mRNA的表达,下调AKT和PI3K蛋白表达水平及蛋白磷酸化水平诱导K562细胞凋亡.抗整合素α5β1抗体的促凋亡能力强于IFNα-2b,其原因可能与IFNα-2b不能显著降低PI3K和p-AKT表达水平有关.结论 整合素α5β1介导的PI3K-AKT-survivin信号转导通路参与了K562细胞的凋亡耐受.
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ERK阻滞剂U0126对白血病细胞K562细胞周期的作用及机制
目的 研究细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)阻滞剂U0126对K562细胞周期的作用及机制.方法 以逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot检测U0126处理K562细胞后ERK、Cyclin D2、Cyclin E、P27 mRNA和蛋白的表达;以流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞周期的变化.结果 处理后K562细胞ERK、Cyclin D2、Cyclin E mRNA和蛋白表达降低;P27 mRNA和蛋白表达增高.G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,与用药前相比差异均有统计学意义(P<0.05).结论 U0126可能通过ERK途径,影响细胞周期调控蛋白,终抑制了K562细胞的增殖.
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Wortmannin抑制PI3-K途径对K562及NB4细胞增殖的影响
目的:为探讨Wortmannin抑制磷酰肌醇-3激酶(PI-3K)途径对K562,NB4细胞增殖的影响,探寻慢性髓细胞性白血病(CML)的治疗新途径.方法:用磷酰肌醇-3激酶(PI-3K)特异抑制剂Wortmannin抑制PI-3K活性,观察慢性髓细胞性白血病细胞系K562细胞和急性早幼粒细胞性白血病细胞系NB4细胞在24,48,72 h增殖能力的变化.t检验统计分析.结果:K562和NB4细胞在24,48,72 h的增殖抑制率分别为34.67%,57.46%,65.85% 和26.29%,5.51%,2.10% .集落形成实验以GM-CSF为主要生长刺激物的培养体系在37℃,5% CO2 孵箱培养14 d后细胞系的集落数和集落形成率分别为K562 :80.75±10.24 和16.15% ,K562+WT :38.00±12.75和7.60%,NB4:29.50±5.97和5.90%,NB4+WT:30.50±5.74和6.10% .集落形成抑制率为:52.94% 和3.39% .结论:Wortmannin可显著抑制K562细胞的增殖和集落形成,而对NB4细胞无明显影响(P均<0.05).Wortmannin可以通过抑制PI-3K通路抑制K562细胞的增殖,而对NB4细胞增殖无明显影响.
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去甲斑蝥素及其五种衍生物抗白血病细胞K562作用的实验研究
目的：探讨去甲斑蝥素（NCTD）及其五种衍生物抗白血病细胞K562的作用．方法：常规方法复苏、传代培养人慢性粒细胞性白血病K562细胞，待细胞进入对数生长期后用于实验．空白对照组行常规培养，药物处理包括去甲斑蝥素（NCTD）处理组和NCTD衍生物（QJ-2、QJ-3、QJ-13、BH052及BH091）处理组，分别设置各组药物终浓度0．001 mmol／L、0．005 mmol／L、0．05 mmol／L、0．1 mmol／L、0．5 mmol／L、1 mmol／L、5 mmol／L、10 mmol／L 处理，各组于处理24 h、48 h （NCTD）、72 h（NCTD）后收集细胞检测：①倒置相差显微镜观察细胞生长状况；②常规瑞氏染色后光学显微镜下观察细胞形态；③MTT比色法检测不同处理组细胞的活力和增殖能力．结果：①与空白对照组比较，NCTD及其衍生物处理后活细胞减少，并出现抱团生长、胞膜出泡、胞体破碎等现象，且变化程度随浓度升高更加明显；瑞氏染色观察 NCTD 作用后K562细胞，药物处理组细胞胞核染色质出现聚集、溶解、碎裂现象，胞浆出现空泡，空泡量且随NCTD浓度升高而增多；②MTT实验测定各药物对K562细胞的IC50值由大到小分别为QJ-3（1．88 mmol／L）、BH091（1．787 mmol／L）、QJ-13（0．621 mmol／L）、BH052（0．406 mmol／L ）、QJ-2（0．129 mmol／L ）、NCTD （0．083 mmol／L），NCTD对K562细胞的增殖抑制作用强，且该抑制作用随药物剂量增加和作用时间延长而增强；在NCTD的五种衍生物中 QJ-2的抑制作用强．结论：①NCTD对K562细胞生长有较强的抑制作用，且呈剂量-时间依赖性；②五种衍生物中QJ-2对K562细胞的作用强．
