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Wortmannin抑制PI3K途径对bcr/abl基因介导的白血病细胞增殖和凋亡抗性影响的研究
目的探讨磷酰肌醇-3激酶(PI3K)途径在K562、NB4和HL60细胞增殖和凋亡抗性中的不同作用.方法用磷酰肌醇-3激酶(PI3K)特异抑制剂Wortmannin(WT)抑制PI3K活性,经细胞生长曲线测定、半固体集落形成实验、流式细胞膜联蛋白V(Annexin-V-Flous)标记技术检测细胞凋亡百分比和凋亡指数.观察K562、NB4和HL60细胞增殖能力及凋亡抗性的变化.结果 K562、NB4和HL60细胞在24、48、72h的增殖抑制率分别为41.33%、57.46%、65.85%和26.29%、5.51%、2.10%及32.14%、17.14%、13.14%.生长曲线显示WT抑制PI3K途径可显著抑制K562细胞的增殖,对NB4和HL60细胞增殖无明显影响.K562、NB4和HL60细胞加和不加WT,培养14d后的集落形成率分别为:16.15%和7.60%,5.90%和6.10%,6.60%和6.40%.集落形成抑制率为52.94%、3.39%和3.03%.K562、NB4和HL60细胞加WT、AraC、WT+AraC作用24h后的凋亡细胞百分比分别为(17.27±1.94)%、(23.25±14.12)%、(17.60±1.27)%;(17.00±3.36)%、(20.55±8.57)%、(22.07±5.62)%;(27.60±4.36)%、(17.56±9.28)%、(20.50±7.97)%.凋亡指数分别为(6.88±2.66)、(7.79±2.75)、(3.03±0.56);(8.91±3.86)、(9.35±4.19)、(3.79±0.93);(13.39±4.49)、(7.61±6.35)、(5.27±2.69).结论 WT可以通过抑制PI3K通路抑制K562细胞的增殖,促进K562细胞的凋亡,PI-3K途径是bcr/abl基因介导的白血病细胞增殖和抗凋亡的重要信号传导通路.
关键词： 白血病 bcr/abl基因 信号传导通路 磷酰肌醇-3激酶 Wortmannin -
Wortmannin抑制PI3K途径对白血病细胞周期特异性及BCL-2蛋白表达影响的研究
目的探讨Wortmannin抑制PI3K途径对K562、NB4、HL60细胞周期特异性、BCL-2蛋白表达的影响.探明PI3K途径在K562、NB4、HL60细胞周期、细胞凋亡、BCL-2蛋白表达中的不同作用.方法用PI3K特异抑制剂Wortmannin抑制PI3K途径,AraC诱导细胞凋亡,药物作用24h后,细胞经DNA 特异性荧光染色,用流式细胞仪 (FCM)检测细胞DNA含量、BCL-2蛋白表达,Multicycle Verson 4.00软件分析细胞DNA含量直方图及细胞周期、BCL-2蛋白表达.观察各细胞系增殖周期、细胞凋亡的变化.结果 K562、NB4、HL60细胞经Wortmannin、Ara-C、Wortmannin+Ara-C作用24h后细胞出现DNA含量低于G1期的亚二倍体峰(亚G1期细胞)这一凋亡细胞的特征性改变,实验组细胞增殖指数(PI)明显低于对照组,凋亡百分比显著增加.Wortmannin可以通过抑制PI3K通路使K562细胞阻滞于G1期.作用24h后细胞实验组细胞BCL-2蛋白表达较对照组降低,说明Wortmannin可促进K562细胞的凋亡.结论 Wortmannin可以通过抑制PI3K通路抑制K562细胞的增殖.并可以通过抑制PI3K通路使K562细胞阻滞于G1期.Wortmannin可抑制K562细胞的BCL-2蛋白表达,促进K562细胞的凋亡.Wortmannin属于细胞周期特异性药物.
关键词： 磷酰肌醇-3激酶 Wortmannin 细胞周期 细胞凋亡 BCL-2蛋白 -
Wortmannin抑制PI3K途径对K562细胞增殖和Ara-C诱导的细胞凋亡的影响
目的:探讨磷酰肌醇-3激酶(PI3K)途径在K562、NB4和HL60细胞增殖和凋亡抗性中的不同作用.方法:用磷酰肌醇-3激酶(PI3K)特异抑制剂Wortmannin抑制PI3K活性,经细胞生长曲线测定、半固体集落形成实验、流式细胞膜联蛋白V(Annexin-V-Flous)标记技术检测细胞凋亡百分比和凋亡指数.观察K562、NB4和HL60细胞增殖能力及凋亡抗性的变化.结果:K562、NB4和HL60细胞在24、48、72 h的增殖抑制率分别为41.33%、57.46%、65.85%和26.29%、5.51%、2.10%及32.14%、17.14%、13.14%.生长曲线显示Wortmannin抑制PI3K途径可显著抑制K562细胞的增殖(P＜0.05),而对NB4和HL60细胞增殖无明显影响(P＞0.05).K562、NB4和HL60细胞加和不加Wortmannin,培养14d后的集落形成率分别为:16.15%和7.60%,5.90%和6.10%,6.60%和6.40%.集落形成抑制率为52.94%、3.39%和3.03%.Wortmannin抑制PI3K途径可显著抑制K562细胞的集落形成(P＜0.05),而对NB4和HL60细胞集落形成无明显影响(P＞0.05).K562、NB4和HL60细胞加WT、AraC、WT+AraC作用24 h后的凋亡细胞百分比分别为(17.27±1.94)%、(23.25±14.12)%、(17.60±1.27)%,(17.00±3.36)%、(20.55±8.57)%、(22.07±5.62)%,(27.60±4.36)%、(17.56±9.28)%、(20.50±7.97)%.凋亡指数分别为6.88±2.66、7.79±2.75、3.03±0.56,8.91±3.86、9.35±4.19、3.79±0.93,13.39±4.49、7.61±6.35、5.27±2.69.提示Wortmannin抑制PI3K途径可促进由AraC诱导下的K562细胞的凋亡(P＜0.05),而对NB4和HL60细胞凋亡无明显影响(P均＞0.05),NB4和HL60细胞凋亡主要受药物的细胞毒作用.结论:Wortmannin可以通过抑制PI3K通路抑制K562细胞的增殖,促进K562细胞的凋亡.
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Wortmannin抑制PI3-K途径对K562及NB4细胞增殖的影响
目的:为探讨Wortmannin抑制磷酰肌醇-3激酶(PI-3K)途径对K562,NB4细胞增殖的影响,探寻慢性髓细胞性白血病(CML)的治疗新途径.方法:用磷酰肌醇-3激酶(PI-3K)特异抑制剂Wortmannin抑制PI-3K活性,观察慢性髓细胞性白血病细胞系K562细胞和急性早幼粒细胞性白血病细胞系NB4细胞在24,48,72 h增殖能力的变化.t检验统计分析.结果:K562和NB4细胞在24,48,72 h的增殖抑制率分别为34.67%,57.46%,65.85% 和26.29%,5.51%,2.10% .集落形成实验以GM-CSF为主要生长刺激物的培养体系在37℃,5% CO2 孵箱培养14 d后细胞系的集落数和集落形成率分别为K562 :80.75±10.24 和16.15% ,K562+WT :38.00±12.75和7.60%,NB4:29.50±5.97和5.90%,NB4+WT:30.50±5.74和6.10% .集落形成抑制率为:52.94% 和3.39% .结论:Wortmannin可显著抑制K562细胞的增殖和集落形成,而对NB4细胞无明显影响(P均<0.05).Wortmannin可以通过抑制PI-3K通路抑制K562细胞的增殖,而对NB4细胞增殖无明显影响.
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磷酰肌醇-3激酶途径与bcr/abl基因介导的白血病细胞增殖和抗凋亡信号传导
目的 探讨磷酰肌醇-3激酶途径在K562、NB4和HL60细胞增殖和凋亡抗性中的不同作用.方法 短期培养法直接法G显带检测K562细胞和CML患者骨髓原代细胞的染色体核型,RQ-PCR检测K562细胞和CML患者骨髓原代细胞的bcr/abl基因;用磷酰肌醇-3激酶特异抑制剂渥曼青霉索(WT)抑制磷酰肌醇-3激酶活性,经细胞生长曲线测定、半固体集落形成实验、流式细胞膜联蛋白V标记技术检测细胞凋亡百分比和凋亡指数.观察K562、NB4和HL60细胞增殖能力及凋亡抗性的变化.统计学采用t检验.结果 K562细胞G显带检出Ph染色体,RQ-PCR检测K562细胞存在bcr/abl基因;与标准Ph染色体表达的CML患者骨髓原代细胞的bcr/abl基因完全吻合;K562、NB4和HL60细胞在24h、48h、72h的增殖抑制率分别为41.33%、57.46%、65.85%和26.29%、5.51%、2.10%及32.14%、17.14%、13.14%.生长曲线显示WT抑制磷酰肌醇-3激酶途径可显著抑制K562细胞的增殖(P<0.05),而对NB4和HL60细胞增殖无明显影响(P>0.05).K562、NB4和HL60细胞加和不加WT,培养14d后的集落形成率分别为:16.15%和7.60%,5.90%和6.10%,6.60%和6.40%.集落形成抑制率为52.94%、3.39%和3.03%.WT抑制磷酰肌醇-3激酶途径可显著抑制K562细胞的集落形成(P<0.05),而对NB4和HL60细胞集落形成无明显影响(P>0.05).K562、NB4和HL60细胞加WT,AraC,WT+AraC作用24h后的凋亡细胞百分比分别为(17.27±1.94)%、(17.00±3.36)%、(27.60±4.36)%;(13.25±4.12)%、(20.55±8.57)%、(17.56±7.97)%;(11.60±1.27)%、(22.07±5.62)%、(20.50±7.97)%.凋亡指数分别为8.91±3.86、6.88±2.66、13.39±4.49;7.79±2.75、9.35±4.19、7.61±6.35;3.03±0.56、3.79±0.93、5.27±2.69.提示渥曼青霉素抑制磷酰肌醇-3激酶途径可促进由AraC诱导下的K562细胞的凋亡(P<0.05),而对NB4和HL60细胞凋亡无明显影响(P均>0.05),NB4和HL60细胞凋亡主要受药物的细胞毒作用.结论 渥曼青霉素可以通过抑制磷酰肌醇-3激酶通路抑制K562细胞的增殖,促进K562细胞的凋亡.磷酰肌醇-3激酶途径通路是bcr/abl基因介导的白血病细胞增殖和抗凋亡信号传导的重要信号传导途径.
关键词： 磷酰肌醇-3激酶 bcr/abl融合癌基因 渥曼青霉素 -
磷酰肌醇-3激酶途径在慢性髓细胞白血病细胞增殖和抗凋亡中的作用
目的探讨磷酰肌醇-3激酶途径在K562和HL60细胞增殖中的作用.方法用磷酰肌醇-3激酶(PI3K)特异抑制剂Wortmannin抑制PI3K活性,观察K562细胞和HL60细胞增殖能力的变化.结果显示K562和HL60细胞在培养24小时、48小时、72小时的增殖抑制率分别为41.33%、57.46%、65.85%和32.14%、17.14%、13.14%.生长曲线显示Wortmannin可显著抑制K562细胞的增殖,而对HL60细胞增殖无明显影响.结论Wortmannin可以通过抑制PI3K通路抑制K562细胞的增殖.
