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小分子抑制剂JQ1抑制小鼠乳腺癌生长及转移
目的 探讨FOS相关抗原-1(Fra1)特异性小分子抑制剂JQ1对肿瘤相关巨噬细胞表型以及小鼠乳腺癌生长和转移的影响.方法 CCK8检测JQ1的细胞毒性;Western blot检测RAW264.7细胞Fra1蛋白水平;RT-qPCR和流式细胞术检测JQ1处理巨噬细胞后M1/M2相关表型分子的变化;Transwell细胞迁移实验检测JQ1处理后的RAW264.7细胞对4T1乳腺癌细胞系迁移能力的影响;小鼠荷瘤实验检测JQ1联合紫杉醇对小鼠乳腺癌的治疗效果.结果 JQ1能够抑制巨噬细胞Fra1蛋白表达和向M2型极化,降低巨噬细胞促进乳腺癌细胞迁移的能力(P＜0.05);JQ1联合紫杉醇治疗明显降低小鼠乳腺癌的原位生长和肺转移(P＜0.05).结论 JQ1通过抑制巨噬细胞Fra1蛋白表达来抑制巨噬细胞向M2型极化,降低肿瘤细胞迁移能力,进而减少小鼠乳腺癌肿瘤原位生长和肺转移.
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AP-1蛋白c-Jun与Fra1形成二聚体促进类多巴能神经细胞SH-SY5Y存活
目的 探讨激活蛋白-1 (AP-1)c-Jun与Fra1对类多巴胺能神经细胞存活能力的影响. 方法 (1)体外培养SH-SY5Y细胞,裂解后进行免疫共沉淀实验,检测c-Jun是否与Fra1形成二聚体.(2)将细胞分为4组,分别为对照组[加入二甲基亚砜(DMSO)]、SP600125组、U0126组及SP600125+U0126组[分别加入c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125、MEK1/2抑制剂U0126及SP600125+U0126].免疫印迹法检测c-Jun或Fra1表达,MTT法检测细胞活力.(3)用滴度为100MOI腺病毒(Ad)感染细胞,共分为4组,分别为对照组(转染绿色荧光蛋白)、Ad-c-Jun组、Ad-Fra1组、Ad-c-Jun+Ad-Fra1组(后3组分别转染相应Ad),免疫荧光染色检测感染率,MTT法检测细胞活力. 结果 (1)免疫共沉淀结果显示c-Jun和Fra1形成二聚体.(2)免疫印迹结果显示SP600125组c-Jun表达减少,U0126组Fra1表达减少.MTT结果显示,4组细胞活力差异有统计学意义(F=16.647,P=0.000),其中对照组与SP600125组、U0126组及SP600125+U0126组差异有统计学意义(P＜0.05).(3)过表达c-Jun、Fra1后,4组细胞活力差异有统计学意义(F=14.543,P=0.000),其中对照组与Ad-c-Jun组差异无统计学意义(P＞0.05),对照组与Ad-Fra1组差异有统计学意义(P＜0.05),Ad-Fra1组与Ad-c-Jun+Ad-Fra1组差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 c-Jun与Fra1形成二聚体促进类多巴胺能神经细胞存活.
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trichostatin A对多巴胺能神经细胞的影响
目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂 trichostatin A（TSA）对多巴胺能神经细胞的影响。方法将体外培养多巴胺能神经细胞 SH - SY5Y 分为6组，DMSO 处理为对照组，不同浓度（50、100、200、500、1000 nmol/ L） TSA 处理为 TSA 组，处理48 h 后行 MTT 法检测细胞活力；采用200 nmol/ L TSA 处理细胞不同时间段，MTT 法检测细胞活力，Western blot 检测 Fra1表达；构建腺病毒载体过表达 Fra1或对照 GFP，检测正常或 TSA 处理条件下过表达 Fra1对细胞活力的影响。结果对照组与50 nmol/ L TSA 组比较，细胞存活率差异无统计学意义，与100 nmol/ L TSA 组比较，细胞活力明显减少（P ＜0.05），随 TSA 浓度升高，活力减少更显著（P ＜0.05）；200 nmol/ L TSA 处理细胞8 h 未检测到抑制细胞存活（ P ＜0.05），处理16 h 有显著抑制作用，处理时间越久抑制效应越明显（ P ＜0.05）；Western blot 结果显示，TSA 处理6 h 未抑制 Fra1表达（P ＜0.05），处理12 h 明显抑制 Fra1表达，24 h 抑制效应更显著（P ＜0.05）；过表达 Fra1促进细胞存活（P ＜0.05），显著拮抗 TSA 的抑制存活效应（P ＜0.05）。结论TSA 抑制多巴胺能神经细胞存活通过抑制 Fra1表达。
