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脑宁康颗粒对脑出血大鼠的脑保护作用
目的 研究依据清热解毒法制成的脑宁康颗粒对脑出血大鼠脑组织的保护作用及机制.方法 将大鼠随机分为5组:假手术组、脑出血模型组、脑宁康小、中、大剂量组,采用胶原酶Ⅶ诱导大鼠脑出血模型,术后2 h各治疗组给予不同剂量脑宁康颗粒灌胃,余组给予等容量生理盐水,连续用药3天和7天后取脑组织,采用HE染色观察脑组织病理形态学改变,免疫组织化学法和TUNEL法分别检测脑出血周围组织凝血酶受体-1(PAR-1)的表达和神经细胞凋亡情况,干湿比重法测定脑组织水肿情况.结果 脑出血大鼠脑组织PAR-1表达增强,各脑宁康治疗组脑组织病理形态明显改善,脑组织PAR-1表达减少,TUNEL阳性细胞数减少,脑水肿减轻,与模型组比较差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01).结论 脑出血后的脑组织PAR-1高表达可能介导了神经细胞凋亡和脑水肿,脑宁康颗粒对出血脑组织有保护作用,可能与其抑制脑出血后脑组织PAR-1表达、减少细胞凋亡,从而减轻脑水肿相关.
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醒脑静合生脉注射液对大鼠脑出血后凝血酶受体-1表达的影响
目的 探讨醒脑静合生脉注射液对大鼠脑出血后脑组织内凝血酶受体-1(PAR1)表达的影响.方法 将40只雄性SD大鼠随机分为脑出血组(ICH)、生理盐水组(NS)、醒脑静合生脉注射液治疗组(XNJSM)、水蛭素治疗组(HIR),每组10只大鼠.采用自体不凝血注入法建立脑出血模型.术后72h取脑组织,HE染色观察各组血肿周围神经细胞形态学改变,免疫组织化学方法及Western blotting法检测各组血肿周围脑组织PAR1的表达.结果 脑出血后血肿周围脑组织PAR1表达增强,XNJSM组、HIR组脑组织病理形态明显改善,脑组织PAR1表达减少,与ICH组比较差异有显著性(P＜0.05).结论 醒脑静合生脉注射液可能通过凝血酶受体-1途径有效抑制大鼠脑出血后PAR1蛋白表达,对脑出血后脑组织发挥保护作用.
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凝血酶对大鼠离体胸主动脉和肺动脉的收缩作用及其可能机制
目的 观察凝血酶对离体大鼠胸主动脉与肺动脉血管张力的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法 采用Powerlab生物信号采集放大系统记录离体大鼠肺动脉与胸主动脉的张力信号,利用RT-PCR技术检测血管壁凝血酶受体的表达.结果 凝血酶对离体大鼠肺动脉及胸主动脉具有明显的收缩作用,且该收缩作用与凝血酶受体-1激动剂的作用相似,不依赖于细胞外钙离子的存在.大鼠肺动脉及胸主动脉血管壁中均有凝血酶受体-1的表达.结论 凝血酶对大鼠离体血管具有收缩作用并且可能是通过凝血酶受体-1而起作用,该作用不依赖于细胞外钙离子的存在.
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大鼠脑出血后大脑凝血酶受体-1长时效动态表达变化
目的:探讨脑出血(ICH)后凝血酶受体的动态及长时效表达.方法:将36只大鼠随机分为6组(n=6):正常组,ICH模型6 h、24 h、3 d、7 d和14 d组.Ⅶ-S型胶原酶诱导大鼠ICH模型.免疫组化方法测定不同时间点大鼠ICH后血肿周围水肿组织PAR-1蛋白的表达;RT-PCR方法检测蛋白酶激活的受体(PAR)-1 mRNA的表达.结果:正常组大鼠大脑PAR-1蛋白和PAR-1 mRNA表达轻度阳性,模型组6 h时PAR-1表达强度开始增强,24 hPAR-1表达进一步增强,于3 d达到高峰,然后开始下降,7 d时明显下降,14 d进一步下降,但仍未至正常组水平.模型组各时间点PAR-1阳性细胞数、PAR-1 mRNA吸光度比值升高与正常组比较均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01).此外,PAR-1蛋白在脑微血管内皮细胞在体有明显的表达.结论:脑微血管内皮细胞存在PAR-1,ICH后凝血酶激活PAR-1不仅是ICH后脑水肿产生的始动因素,而且参与了脑水肿的发展过程.
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针刺对实验性脑出血大鼠脑组织PAR-1表达的影响
目的:探讨急性脑出血后凝血酶受体-1(PAR-1)的动态表达及针刺的干预作用.方法:选取健康雄性Wistar大鼠96只,随机分为模型组、针刺组、西药组 3 组.每组又分为6 h、24 h、48 h、72 h和168 h 5个时相点,每个时相点6只大鼠,另设空白对照组6只大鼠.制备脑出血大鼠模型,采用Western免疫印迹技术观察不同时相点头穴针刺治疗对脑出血大鼠脑组织PAR-1蛋白表达的影响.结果:针刺组大鼠脑内PAR-1蛋白表达在不同时相点均有显著下调,与模型组比较均有显著性差异(P＜0.05),具有统计学意义.结论:下调脑内PAR-1蛋白表达可能是针刺治疗脑出血获效的一个重要机制,针刺可能通过下调脑出血血肿周围脑组织内PAR-1蛋白表达,减轻凝血酶所造成的毒性反应,从而达到防治脑出血后继发性脑损伤的作用.
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蛇毒血凝酶在肺癌根治术中的止血效果分析及其对凝血酶受体-1的影响
目的：探讨蛇毒血凝酶在肺癌根治术中的止血效果及其对凝血酶受体-1（protease-activated receptor-1，PAR-1）的影响。方法选取86例经病理证实为肺癌患者，随机分为观察组和对照组，其中对照组采用止血敏，观察组采用蛇毒血凝酶，分别在手术前后测定出血量，凝血系统相关因子，采用酶联免疫吸附实验（enzyme linked immuno sorbent assay，ELISA）测定P-选择素，流式细胞术测定血小板PAR-1，Western blot测定肺癌组织中PAR-1的表达情况，对所得数据采用统计学分析。结果观察组在术中及术后2d出血量，显著低于对照组，差异具有统计学差异（P＜0.05）；流式细胞术检测结果发现，观察组中组内不同时间段PAR-1阳性率及P-选择素无统计学意义，同对照组相比具有统计学意义（P＜0.05）；Western Blot检测发现蛇毒血凝酶对肺癌患者组织中PAR-1影响不明显，而对照组具有统计学差异义（P＜0.05）。结论蛇毒血凝酶在肺癌根治术中可以减少出血量，对凝血系统作用较为稳定，对P-选择素和PAR-1影响较小，这一结果提示蛇毒血凝酶可能在肺癌根治术患者止血过程中不会使患者出现全身血液高凝状态，即不会导致凝血酶受体高表达从而引起的肿瘤细胞转移。
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肺癌中凝血酶受体-1的表达及意义
目的分析凝血酶受体(PAR-1)在肺癌组织及细胞中的表达情况,探讨PAR-1与人肺癌生物学行为的关系.方法采用免疫组织化学、Western blot 及RT-PCR方法检测不同类型肺癌组织及细胞系中PAR-1的表达情况.结果免疫组化S-P法检测PAR-1在52例肺癌组织中表达情况分别为:腺癌14/20例、鳞癌6/16例、大细胞癌6/10例、小细胞癌中4/6例.免疫组化阳性细胞多位于癌巢周边,1例侵及支气管软骨处的鳞癌癌巢及另1例低分化腺癌脉管内的癌栓呈明显阳性,1例腺癌组织周围的肺泡上皮不典型增生灶呈明显阳性.Western blot 及RT-PCR方法检测结果均显示PAR-1在人肺巨细胞癌细胞系高转移株(PLA801D)中的高表达明显高于其低转移株(PLA801C).结论 PAR-1在各种组织类型的人肺癌组织中均有不同比例表达.PAR-1在人肺巨细胞癌细胞系高转移株(PLA801D)中的表达明显高于其低转移株(PLA801C).PAR-1表达可能与肺癌的恶性表型及生物学行为有关.
关键词： 肺肿瘤 凝血酶受体-1 免疫组织化学 Western blot RT-PCR -
硝普钠与尼莫地平治疗大鼠脑出血损伤的疗效及与凝血酶受体-1表达的相关研究
目的 探讨硝普钠与尼莫地平治疗大鼠脑出血(ICH),降低大鼠脑血肿及脑出血后神经元损伤的疗效及与凝血酶受体-1(PAR1)表达的相关性.方法 用30只雄性Wista大鼠(200~220 g)复制脑出血ICH模型,并随机分为3组(每组10只),分别是假手术组、脑出血组和联合治疗组.大鼠于ICH手术成功后48 h处死,收集大鼠脑组织备用.采用TUNEL法检测细胞凋亡的发生;干燥法检测大鼠脑组织水含量;采用免疫组织化学法和蛋白质印迹法Western blot检测PAR1蛋白的表达.结果 与假手术组比较,脑出血组和联合治疗组中凋亡细胞数和脑组织水含量增多(均=0.000),而联合治疗组中凋亡细胞数和脑组织水含量低于脑出血组(均=0.000);与假手术组PAR1蛋白含量(0.673±0.121)比较,脑出血组PAR1蛋白含量(2.187±0.233)和联合治疗组PAR1蛋白含量(1.434±0.168)上升,差异有统计学意义(=0.000),与脑出血组比较,联合治疗组PAR1蛋白含量下降,差异有统计学意义(=0.000);Western blot结果与免疫组织化学结果一致.结论 硝普钠与尼莫地平通过对PAR1的调控治疗大鼠脑出血损伤,具有神经保护作用.
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PAR-1拮抗剂SCH79797对SAH大鼠早期脑损伤的保护作用及对BDNF﹑NGF表达的影响
目的：探讨凝血酶受体-1(PAR-1)拮抗剂SCH79797对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠早期脑损伤的保护作用及可能机制。方法雄性SPF级SD大鼠54只按随机数字表法分为假手术组﹑SAH组﹑治疗组,每组18只。后2组采用枕大池单次注血法建立大鼠SAH模型,治疗组在造模成功后给予SCH79797(25μg/kg)腹腔注射。各组大鼠于术后24 h进行神经功能缺损评分,然后断头取脑,采用干湿重法检测脑组织含水量,采用ELISA法检测海马区脑组织脑源性神经营养因子(BDNF)﹑神经生长因子(NGF)含量,采用免疫荧光染色检测BDNF﹑NGF表达。结果与SAH组比较,治疗组神经功能缺损评分明显增高(12.11±2.62 vs 14.59±2.24),脑组织含水量明显减少(83.01%±0.38%vs 79.79%±0.44%),海马区脑组织BDNF﹑NGF含量明显增加[(100.15±59.13) pg/mL vs (368.00±137.52) pg/mL﹔(33.44±2.21) pg/mL vs (37.49±2.29) pg/mL],BDNF﹑NGF免疫荧光染色强度明显增高(41.65±1.50 vs 91.40±1.30﹔23.50±1.70 vs 30.65±1.80),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 PAR-1拮抗剂SCH79797对SAH大鼠早期脑损伤有脑保护作用,其作用机制可能涉及有效上调BDNF﹑NGF表达水平。
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醒脑静合生脉注射液下调大鼠脑出血后脑组织PAR1和AQP4表达
目的 研究醒脑静合生脉注射液对大鼠脑出血后脑组织内凝血酶受体-1 (PAR1)和水通道蛋白-4 (AQP4)表达的影响.方法 将40只雄性SD大鼠随机分为脑出血组(ICH)、生理盐水组(NS)、醒脑静合生脉注射液治疗组(XNJSM)、水蛭素治疗组(HIR),每组10只.采用自体不凝血注入法制备脑出血模型.术后72 h取脑组织,HE染色观察各组血肿周围神经细胞形态学改变,免疫组化方法及Western Blotting法检测各组血肿周围脑组织PAR1和AQP4表达.结果 脑出血后血肿周围脑组织PAR1、AQP4表达均明显增强,XNJSM组、HIR组脑组织病理形态明显改善,脑组织内PAR1、AQP4的表达减少,与ICH组相比较差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 脑出血后PAR1和AQP4两种蛋白的表达增加可能共同参与了脑出血后继发性脑损伤的过程,醒脑静合生脉注射液能够有效抑制大鼠脑出血后PAR1和AQP4蛋白的表达,对脑出血后神经损伤发挥保护作用.
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水蛭提取液体外对人视网膜色素上皮细胞PAR-1表达的影响
目的:研究水蛭提取液对人视网膜色素上皮(retinal pigment epichelial,RPE)细胞PAR-1表达的影响.方法:水蛭提取液体外单独或与凝血酶共同作用于人RPE细胞后,用免疫荧光法测定PAR-1的荧光表达.结果:PAR-1的免疫荧光光密度值比较:(1)凝血酶组与正常对照组比较,PAR-1的IOD值下降(1 608±675,4 036±1 134,P<0.01).(2)单加水蛭提取液组与正常对照组比较,PAR-1的IOD值升高(9 998±2 374,4 036±1 134,P<0.01).(3)凝血酶和水蛭提取液同时加药组与凝血酶组比较,PAR-1的IOD值显著升高(19 664±5 436,1 608±675,P<0.01).表明水蛭提取液能竞争性抑制凝血酶对PAR-1的活化作用.结论:水蛭提取液能抑制凝血酶诱导的人RPE细胞膜上的PAR-1的活化,阻断PAR-1介导的细胞信号传导.
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枸杞多糖对脑出血大鼠神经细胞凋亡及凝血酶受体-1表达的影响
目的 观察枸杞多糖(LBP)对大鼠脑出血(ICH)后神经细胞凋亡及凝血酶受体-1(PAR-1)表达的影响,并探讨其可能机制.方法 将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、LBP低剂量、中剂量、高剂量组(50、100、200 mg/kg)和尼莫地平组10 mg/kg.各给药组给予相应剂量药物灌胃,假手术组、模型组给予等体积生理盐水替代,1 次/d,共15 d.灌胃结束后,采用二次自体血注入法建立ICH模型;采用TUNEL法检测神经细胞凋亡,采用Western Blot、免疫组化、qRT-PCR,从不同水平探索LBP对ICH后脑组织PAR-1表达的影响.结果 模型组神经细胞凋亡率、PAR-1阳性率、PAR-1蛋白的表达及PAR-1 mRNA的表达较假手术组显著增加(P<0.05),LBP各剂量组神经细胞凋亡率、PAR-1阳性率、PAR-1蛋白的表达、PAR-1 mRNA的表达较模型组均有不同程度的减低(P<0.05).相关性分析显示,ICH后神经细胞凋亡率与PAR-1阳性率呈正相关性.结论 LBP能够抑制大鼠ICH引起的神经细胞凋亡,对ICH后脑组织具有保护作用,其机制可能与抑制PAR-1表达有关.
