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腹水草抗大鼠乙醇型胃溃疡的作用及机制研究
目的 研究腹水草水提液抗大鼠乙醇型胃溃疡的作用及机制.方法 48只健康SD大鼠随机分成正常组、模型组、雷尼替丁组,以及腹水草高、中、低剂量组,每组8只.正常组和模型组给予生理盐水灌胃；雷尼替丁组给予0.18％雷尼替丁混悬液[0.027 g/(kg·d)]灌胃；腹水草各剂量组分别给予高、中、低剂量腹水草水提液[2.8、1.4、0.7 g/(kg·d)]灌胃,每天1次,连续14天.于后1次灌胃后,采用无水乙醇灌胃造模.比较各组大鼠胃溃疡指数及溃疡抑制率,检测血清及胃黏膜组织丙二醛( MDA)、NO含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,以及组织表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)含量.结果 腹水草各剂量组及雷尼替丁组溃疡指数较模型组明显减小(P＜0.01),且腹水草各剂量组呈剂量依赖性(P＜0.01)；腹水草高剂量组的溃疡抑制率高(P＜0.01).与正常组比较,模型组大鼠血清和组织MDA、NO含量显著升高,SOD活性以及组织EGF含量显著降低(P＜0.01).与模型组比较,腹水草各剂量组及雷尼替丁组血清和组织MDA含量降低,血清NO含量升高,组织NO下降,血清SOD活性升高,组织EGF含量提高,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).结论 腹水草水提液具有抗大鼠乙醇型胃溃疡的作用.减少自由基生成、促进氧自由基清除及抗脂质过氧化反应,调控机体中NO和EGF含量,可能是其作用机制.
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腹水草水提液对乙醇损伤人胃黏膜上皮细胞活性及凋亡的影响研究
[目的]研究腹水草水提液对人胃黏膜上皮细胞株GES-1细胞的保护作用,探讨其对乙醇损伤后GES-1细胞凋亡的影响.[方法]采用磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法测定腹水草水提液和阳性对照药雷尼替丁对GES-1细胞的大安全浓度(maximum non-toxic concentration,TC0),其中以不加药物处理的细胞为正常组,采用SPSS 19.0统计软件计算腹水草水提液对GES-1细胞增殖的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC50).分别以含低(20 μg·mL-1)、中(40 μg·mL-1)、高(80μg·mL-1)剂量腹水草水提液和雷尼替丁(45μg·mL-1)的DMEM培养基培养GES-1细胞48h后,改用含5％乙醇的DMEM培养基培养4h,运用SRB法和Annexin-V/PI双染法分别检测GES-1细胞的活性和凋亡情况.[结果]与正常组相比,在5~160μg·mL-1剂量范围内,腹水草水提液对GES-1细胞存活率无显著影响(P＞0.05);当腹水草水提液剂量≥320 μg·mL-1时,细胞存活率显著降低(P＜0.05或P＜0.01);TC0和IC50分别为160 μg·mL-1和5096 μg·mL-1.与正常组比较,雷尼替丁剂量在2.8~180 μg·mL-1范围内,GES-1细胞存活率均＞90％;当雷尼替丁剂量≥360 μg·mL-1时,细胞存活率显著降低(P＜0.05);TC0和IC50分别为180 μg·mL-1和5 396 μg·mL-1.经低、中、高剂量腹水草水提液和雷尼替丁预处理48h后,GES-1细胞的存活率均显著高于模型组(P＜0.01);腹水草水提液中、高剂量组细胞的存活率均显著高于雷尼替丁组(P＜0.05,P＜0.01).模型组细胞凋亡率显著高于正常组(P＜0.01);经腹水草水提液低、中、高剂量预处理后,细胞凋亡率显著低于模型组(P＜0.01),且呈剂量依赖性;高剂量组的凋亡率低于雷尼替丁组,但两组间差异无统计学意义(P＞0.05).[结论]在腹水草水提液5～160 μg·mL-1和雷尼替丁2.8～180μg·mL-1的剂量范围内,两者对GES-1细胞均无毒性.腹水草水提液显著提高乙醇损伤后GES-1细胞的存活率,并降低其凋亡率.中、高剂量腹水草水提液对乙醇损伤细胞的保护作用优于雷尼替丁.
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水液代谢在胃黏膜损伤中的调控及腹水草的干预作用研究
[目的]研究腹水草水提液对乙醇型胃溃疡大鼠胃液及水通道蛋白（aquaporins，AQPs）表达水平的影响，从水液代谢途径探讨腹水草抗乙醇型胃溃疡的作用机制。[方法]36只SD大鼠随机分成6组，正常组和模型组给予生理盐水；雷尼替丁组给予0.027 g/kg·d雷尼替丁混悬液；腹水草低、中、高剂量组分别给予0.7、1.4、2.8 g/kg·d腹水草水提液。连续灌胃给药14d，于后1次灌胃后，除正常组外，其余各组用无水乙醇制备胃溃疡模型。造模1h后脱颈处死。收集胃液并测量胃液量，酸碱滴定法测定胃液总酸排出量，毛细管法测量胃蛋白酶活性，夹心ELISA和荧光定量RT-PCR分别检测胃组织AQP1、AQP3、AQP4蛋白及mRNA的表达水平。[结果]正常组的胃液量极少，无法收集。模型组的胃液量和胃液总酸排出量大，胃蛋白酶活性高。与模型组比较，腹水草低、中、高剂量组的胃液量和胃液总酸排出量均显著减少（P<0.01），且呈剂量依赖关系；腹水草低、中、高剂量均能显著抑制胃蛋白酶活性（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，腹水草组显著下调AQP3和AQP4的蛋白含量及mRNA的相对表达量（P<0.05， P<0.01），上调AQP1的蛋白含量和mRNA的相对表达量（P<0.05，P<0.01）。[结论]腹水草通过上调AQP1和下调AQP3、AQP4的表达水平从而抑制胃液和胃酸分泌、降低胃蛋白酶活性等水液代谢调控途径来实现对胃黏膜的保护和修复作用。
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腹水草抗大鼠乙醇型胃溃疡的作用及其对NO、iNOS和VEGF表达的影响
[目的]观察腹水草水提液抗大鼠乙醇型胃溃疡的作用效果，以及对一氧化氮（NO）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。[方法]48只SPF级SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、雷尼替丁组，腹水草高、中、低剂量组，每组8只。正常对照组和模型组分别给予0.9%生理盐水灌胃；而雷尼替丁组则给予0.18%雷尼替丁混悬液灌胃（0.027g·kg-1·d-1）；腹水草各剂量组分别给予高、中、低剂量腹水草水提液灌胃（浓度分别为2.8、1.4、0.7 g·kg-1·d-1)，每天1次，连续14d。于后1次灌胃1h后，采用无水乙醇造模1h。然后处死大鼠，比较各组大鼠胃溃疡指数及溃疡抑制率，分别采用硝酸还原酶法，夹心ELISA和荧光定量PCR法分析不同剂量腹水草水提液对NO含量、iNOS活力， VEGF蛋白，iNOS、VEGF mRNA表达的影响。[结果]腹水草水提液可以显著的抑制溃疡的发生。腹水草水提液高、中、低剂量给药组的溃疡抑制率分别为90.83%、70.26%、45.93%。与模型组相比，腹水草高剂量给药组大鼠胃黏膜组织中NO含量显著提高（P<0.01），腹水草各给药组大鼠胃黏膜组织中iNOS活力和iNOS mRNA的表达量均显著提高（P<0.01），而对于VEGF则无统计学差异。[结论]腹水草水提液具有显著地抗大鼠乙醇型胃溃疡的作用，其作用机制可能与提高胃组织中NO含量，iNOS活力及其mRNA的表达有关。
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腹水草HPLC指纹图谱研究及香草酸等6种成分的含量测定
目的:建立腹水草茎叶的HPLC指纹图谱和同时测定咖啡酸、香草酸、阿魏酸、原儿茶酸、木犀草素和金合欢素含量的方法,为腹水草药材的质量控制提供可靠参考.方法:采用Zobax C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),以乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相,进行梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,检测波长230 nm,柱温30 ℃,建立腹水草茎叶指纹图谱,使用中国药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”确定共有峰,计算相似度;并对咖啡酸、香草酸、阿魏酸、原儿茶酸、木犀草素和金合欢素的含量测定方法进行方法学验证.结果:10批不同产地腹水草茎叶指纹图谱中有27个共有峰,与对照品比较,指认其中咖啡酸、香草酸、阿魏酸、原儿茶酸、木犀草素和金合欢素6个成分,10批样品的相似度均在0,900以上;上述6个成分含量测定方法经验证,线性范围分别为3.0～60.0、10.0～200.0、5.0～100.0、10.0～200.0、10.0～200.0和5.0～100.0 μg· mL-1,平均加样回收率分别为102.0％、102.8％、101.2％、97.5％、98.0％和101.1％.10批腹水草样品中咖啡酸、香草酸、阿魏酸、原儿茶酸、木犀草素和金合欢素含量分别在22.1～38.4、39.9～58.8、23.8～59.1、43.6～68.0、53.8～89.6、36.6～62.7 μg·g-1范围内.结论:本文所建立的腹水草茎叶HPLC指纹图谱及主要成分含量测定方法,可用于腹水草药材质量控制等研究.
