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泽泻醇B抑制C3a介导的人肾小管上皮细胞间充质转分化的实验研究
目的 探讨泽泻醇B能否抑制C3a介导的肾小管上皮细胞间充质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT).方法 将体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)分别用5 ng/mL转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)、0.1μmol C3a和0.1μmol C3a加10 μmol泽泻醇B进行干预.分别采用RTPCR、Western blot和细胞免疫荧光法检测HK-2细胞C3、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和上皮钙黏蛋白(E-cadherin) mRNA及蛋白表达.结果 经C3a刺激后,HK-2细胞C3 mRNA和蛋白表达明显增加(P＜0.01),α-SMA mRNA及蛋白表达明显增加(P＜0.01),E-cadherin mRNA及蛋白表达明显减少(P＜0.01).与经外源性C3a干预组比较,经泽泻醇B干预后,HK-2细胞α-SMA mRNA及蛋白表达明显减少(P＜0.01),E-cadherin mRNA及蛋白表达明显增加(P＜0.05).结论 外源性C3a能诱导肾小管上皮细胞发生EMT,泽泻醇B可抑制C3a诱导的EMT.
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基于均匀设计的泽泻体外抗草酸钙结晶的有效组分配伍研究
目的 研究泽泻中6种主要三萜成分(泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B、泽泻醇F和24-乙酰泽泻醇F)及其组分配伍对体外抗草酸钙结石的作用.方法 采用均匀设计法设计不同泽泻三萜组分配伍组,应用标准钙离子种晶技术分别检测不同配伍组对草酸钙结晶生长的抑制指数.结果 6种成分及其不同比例配伍组溶液均能抑制草酸钙晶体生长(P＜0.05),其中泽泻醇A-24-乙酰泽泻醇A-泽泻醇B-23-乙酰泽泻醇B-泽泻醇F-24-乙酰泽泻醇F(2.2∶3.8∶1∶3.5∶2.2∶1)组分配伍时体外抑制草酸钙结石效果佳(P＜0.05),抑制指数为188.29％.结论 泽泻三萜成分是泽泻抑制草酸钙结晶的重要药效物质基础,泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B、泽泻醇F和24-乙酰泽泻醇F均具有体外抑制草酸钙结石生长的作用,且6种成分合用作用更强,其佳组分配比为泽泻醇A-24-乙酰泽泻醇A-泽泻醇B-23-乙酰泽泻醇B-泽泻醇F-24-乙酰泽泻醇F(2.2∶3.8∶1∶3.5∶2.2∶1).
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高效液相色谱-电喷雾-质谱法分析泽泻中的活性成分
目的:建立泽泻中活性成分的高效液相色谱-电喷雾-质谱分析方法.方法:采用Zorbax SB-C18色谱柱;乙腈-水二元梯度洗脱;Agilent电喷雾离子阱多级质谱仪;正离子检出模式.结果:在正离子检出模式下,泽泻的总离子流色谱图特征性很强,通过质谱中的主要碎片对泽泻醇B、泽泻醇B-23-乙酸酯、泽泻醇C-23-乙酸酯、泽泻醇C、16-氧化泽泻醇A、11-去氧泽泻醇C 6种主要成分进行了结构解析.结论:泽泻的总离子流色谱图比紫外色谱图具有更强的特征性,在该试验条件下能够同时分析泽泻中的多种活性成分,是一种较好的泽泻药材的质量控制方法.
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3种炮制方法对泽泻中4种三萜类成分的影响
目的 通过HPLC法研究清炒、麸炒、盐炙对泽泻Alismatis Rhizoma中泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B含有量的影响.方法 分析采用Zorbax Eclipse C18色谱柱(4.6mm× 250mm,5μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长208 nm;柱温40℃.结果 与生泽泻比较,清炒品中上述4种成分的含有量均降低,麸炒品均增加,盐炙品除23-乙酰泽泻醇B外均有所增加.其中,以23-乙酰泽泻醇B变化显著,其次是24-乙酰泽泻醇A.结论 3种炮制方法对泽泻中23-乙酰泽泻醇B和24-乙酰泽泻醇A含有量的影响较大.
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泽泻醇B抗4T1乳腺癌细胞侵袭转移的体外研究
目的 探讨泽泻醇B(Alisol B)对乳腺癌细胞株4T1转移能力的抑制作用及可能机制.方法 4T1细胞经药物作用24 h后,通过 MTT法检测药物对细胞生长的影响;通过划痕试验及 Transwell 小室检测泽泻醇 B对细胞侵袭和迁移能力的影响;通过 Western blot 检测细胞经药物作用后对基质金属蛋白酶 MMP-2及 MMP-9蛋白表达水平的变化.结果 泽泻醇 B对4T1细胞的生长具有一定的抑制作用.划痕实验显示泽泻醇B可显著抑制乳腺癌细胞的转移能力,细胞经药物(10 μmol/L)作用24 h后,其相对迁移率降至(52.66±8.48)%(P<0.01).Transwell小室侵袭实验同样证实泽泻醇 B能够有效抑制乳腺癌细胞的转移,经药物(10μmol/L)作用24 h后,24 h内细胞相对侵袭力下降至(47.06±9.32)%(P<0.01).Western blot结果表明,泽泻醇B能够使癌细胞内 MMP-2及 MMP-9蛋白表达量显著下调.结论 泽泻醇B在体外能够有效抑制4T1乳腺癌细胞的转移,其机制可能与抑制细胞内基质金属蛋白酶的表达量有关.
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泽泻醇B对豚鼠离体回肠的影响
目的观察泽泻醇B(23-acetate alisol B)对豚鼠离体回肠收缩的影响.方法将豚鼠离体回肠悬吊于麦氏浴槽中,通过体外给药的方法,观察回肠的收缩情况,并计算回肠的收缩幅度.结果浴槽浓度为1.25×10-2 mg/mL、1.25×10-3 mg/mL、1.25×10-4 mg/mL时,泽泻醇B对组胺引起的豚鼠离体回肠收缩有对抗作用,且随着剂量的增加而增加.结论泽泻醇B拮抗组胺对离体豚鼠回肠的收缩作用是通过非特异性竞争而发挥的.
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闽产泽泻收获期不同部位萜类成分含量比较
目的 考察收获期泽泻不同部位萜类成分含量并进行含量比较. 方法 以23-乙酰泽泻醇B和泽泻醇B为指标,采用高效液相色谱法Agilent Technologies 1260系统,Ultimate XB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相乙腈∶水(75∶25),检测波长208 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃. 结果 收获期泽泻23-乙酰泽泻醇B的含量为芽＞块茎＞茎＞块茎茎皮＞须根＞叶,而泽泻醇B的含量为块茎＞芽＞块茎茎皮＞茎,须根和叶中未检出. 结论 收获期泽泻不同部位在两种萜类成分含量存有差异,其中块茎和芽中23-乙酰泽泻醇B和泽泻醇B含量高,其含量显著高于其它部位,收获期枯萎丢弃的茎和茎皮中也分布有23-乙酰泽泻醇B和泽泻醇B,说明其可能也具有一定的药用价值,具有开发利用的潜在价值.
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双波长HPLC-DAD法测定闽产泽泻三萜类含量
目的 为评价闽产泽泻质量,建立双波长HPLC-DAD法测定闽产泽泻中三萜类含量的分析方法. 方法 色谱柱:Ultimate XB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相:乙腈-水(65∶35);流速1 mL/min,检测波长:208和245nm. 结果 23-乙酰泽泻醇C、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B的线性范围为2.335～23.35 μg/mL、11.14～111.40 μg/mL、11.13～111.30 μg/mL,平均加样回收率为95.6％、96.4％、97.8％,RSD为2.46％、2.28％、1.77％. 结论 双波长HPLC法可简便、快捷、准确地用于泽泻中三萜类含量的定量分析.
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薄层扫描法测定闽产泽泻中泽泻醇B的含量
为确立泽泻中泽泻醇B的测定方法,采用制备泽泻中主要成分泽泻醇B的标准溶液,薄层色谱分离后,进行光密度扫描测定,结果显示样品中泽泻B含量分别为0.1036%、0.1050%、0.2245%、0.3157%,在1.5 h内稳定,回收率101.3%,说明薄层扫描法灵敏、专属,重现性好,简便易行.
