首页 > 文献资料
-
大豆异黄酮对阿尔茨海默病大鼠海马RAGE介导的信号转导通路的影响
目的 观察大豆异黄酮( soybean isoflavones)对阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)大鼠高级糖化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)介导的信号转导系统的影响.方法 采用β淀粉样蛋白25 - 35片段(amyloid β25-35,Aβ25 -35)双侧海马注射建立AD大鼠模型,60只大鼠随机分为模型组、大豆异黄酮高剂量组[30 mg/( kg·d)]、大豆异黄酮低剂量组[10 mg/(kg·d)]、雌激素组[0.4 mg/(kg·d)]及假手术组,每组12只.大豆异黄酮高、低剂量组和雌激素组造模后3天灌胃给药(2 mL/只),模型组与假手术组给予等体积的0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)灌胃,连续21天.酶联免疫吸附法观察各组大鼠海马组织RAGE、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量.分光光度法检测大鼠海马组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteine-containing aspartate-specific protease-3,Caspase-3)活性.免疫组织化学法观察大鼠海马组织磷酸化细胞外信号调节激酶1/2( phosphorylation extracellular signal-regulated kinase1/2,P-ERK1/2)的表达.结果 与模型组比较,大豆异黄酮可显著降低AD大鼠海马RAGE蛋白、IL-6含量、Caspase-3活性及ERK1/2蛋白磷酸化水平(P＜0.01).结论 大豆异黄酮对AD大鼠海马组织RAGE介导的炎症信号通路具有下调作用,减弱炎症反应,降低Aβ的神经毒性,抵抗海马神经元凋亡.
-
丙泊酚对神经元缺血再灌注损伤的保护与磷酸化蛋白激酶信号通路的关系
目的：探讨丙泊酚在脑缺血/再灌注损伤(CI/RI)中的作用及可能机制。方法：采用氧糖剥夺再灌注（OGD/RP）法体外构建缺血/再灌注细胞模型，将细胞分为对照组、OGD/RP组和丙泊酚+OGD/RP联合组。采用MTT法检测皮质神经元存活率，Annexin V-PI检测细胞凋亡情况，RT-PCR方法检测碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的mRNA表达，Western blot检测丙泊酚对皮质神经元内bFGF、磷酸化蛋白激酶B（pPKB）和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2（pERK1/2）表达。采用小干扰RNA构建bFGF沉默的细胞。结果：丙泊酚能够显著促进CI/RI后神经元的存活，抑制其凋亡，OGD/RP处理组神经元凋亡率为43.2%，以10 mg/L的丙泊酚预处理后细胞的凋亡率即降为19.5%（P＜0.05）。与对照组（1.02±0.03）相比较，OGD处理后细胞中bFGF的含量（0.78±0.06）显著下调（P＜0.05），丙泊酚处理的皮质神经元中bFGF含量(1.43±0.04)显著高于OGD处理组（P＜0.05）。沉默的bFGF或者施加蛋白激酶B(PI3K-pPKB）以及pERK1/2信号通路抑制剂都会导致细胞存活率显著下降（P＜0.05），抑制PI3K- pPKB以及ERK1/2的激活。结论：丙泊酚可以通过上调bFGF的表达，激活PI3K- pPKB和ERK1/2的信号通路，减轻体外培养神经元凋亡/再灌注损伤，从而增加皮质神经元的存活。
-
抗氧化剂硫辛酸对实验性偏头痛大鼠细胞外信号调节激酶1/2的作用
目的 探讨α-硫辛酸(alpha-lipoid acid,α-LA)对硝酸甘油诱发的实验性偏头痛大鼠细胞外信号调节激酶1/2的作用.方法 48只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、α-LA组、溶剂组,采用皮下注射硝酸甘油(glyceryl trinitrate,GTN)法制作偏头痛大鼠模型.α-LA组在造模后30 min腹腔给予α-LA (60 mg· kg-1),观察大鼠行为学变化.采用Western blot印迹法和免疫组化法测定三叉神经节及三叉神经颈复合体、硬脑膜细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)、磷酸化ERKl/2(p-ERK1/2)表达.结果 模型组大鼠p-ERK1/2蛋白表达明显高于正常对照组;与模型组相比,α-LA组大鼠行为症状明显改善,p-ERK1/2蛋白表达下降,模型组与α-LA组组间比较有统计学意义(P＜0.05).结论 α-LA可减弱偏头痛大鼠模型中p-ERK1/2的表达,α-LA可能有防治偏头痛的作用.
-
TROP2、p-ERK1/2和Cyclin D1在胆囊癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨胆囊癌组织中人滋养层细胞表面抗原(TROP)2、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK) 1/2和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达及其与临床病理参数之间的关系,并分析其与胆囊癌患者预后的关系.方法 搜集第二军医大学附属长征医院2005年6月-2010年6月确诊并获取病理标本的胆囊癌患者88例,采用免疫组化法检测88例胆囊癌组织及15例癌旁组织中TROP2、p-ERK1/2和Cyclin D1蛋白的表达.计数资料采用x2检验,Spearman检验法分析TROP2、p-ERK1/2和Cyclin D1间相关性;单因素和多因素Cox回归分析胆囊癌患者预后的影响因素;Kaplan-Meier法绘制患者的生存曲线.结果 TROP2、p-ERK1/2和Cyclin D1蛋白在胆囊癌组织中的阳性表达率分别为74.30％、58.40％和55.30％,明显高于癌旁组织中的表达(5.42％、35.67％和39.87％)(P值均＜0.05).TROP2、p-ERK1/2和Cyclin D1蛋白的表达与胆囊结石、肿瘤直径、分化程度、血管神经侵犯、淋巴结转移、手术方式及TNM分期相关(x2=4.300～53.315,P值均＜0.05).TROP2与p-ERK1/2、Cyclin D1的表达呈正相关(rs值分别为0.402、0.742,P值均＜0.001),且p-ERK1/2与Cyclin D1的表达也呈正相关(rs =0.242,P=0.023).多因素生存分析提示,TROP2的阳性表达是患者3年生存率的独立危险因素(相对危险度=2.412,95％可信区间:1.186 ～5.126,P=0.010).结论 TROP2的高表达可能是胆囊癌恶性进展的重要原因,高表达的TROP2可能介导p-ERK1/2和Cyclin D1的高表达,导致胆囊癌恶性进展.TROP2是判断胆囊癌患者预后的独立危险因素,有可能是临床干预的有效靶点.
-
丙泊酚通过上调纤维细胞生长因子的表达激活磷酸肌醇3激酶-蛋白激酶B和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2信号通路抑制体外培养神经元缺血/再灌注损伤
目的 探讨丙泊酚在脑缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,I/RI)中发挥的作用及其具体机制. 方法 采用氧糖剥夺再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/RP)法体外构建缺血/再灌注细胞模型,将细胞分为对照组、OGD/RP组、丙泊酚+OGD/RP组.采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测皮质神经细胞存活率,Annexin V-PI检测细胞凋亡情况,即时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的mRNA表达情况,免疫印迹法(Western blot)检测丙泊酚对皮质神经细胞内bFGF,磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,pAkt)以及磷酸化细胞外信号调节激酶1/2 (phosphorylated extr acellular signal-regulated kinase 1/2,pERK 1/2)蛋白表达的影响;采用小干扰RNA构建bFGF沉默的细胞. 结果 OGD/RP处理组神经细胞凋亡率为43.2％,经10 mg/L的丙泊酚预处理后,细胞的凋亡率降为19.5％.与对照组比较,OGD处理后,细胞中bFGF的含量显著下调(P＜0.05),丙泊酚处理的皮质神经元中bFGF含量显著高于OGD处理组(P＜0.05).丙泊酚能够上调pAKT以及pERK1/2的表达,激活这两条信号通路.沉默bFGF或者施加磷酸肌醇3激酶-蛋白激酶B(phosphotylinosital 3 kinase-protein kinase B,PI3K-Akt)以及pERK1/2信号通路抑制剂都会导致细胞存活率显著下降(P＜0.05),抑制PI3K-Akt以及pERK1/2的激活. 结论 丙白酚可以通过上调bFGF的表达,激活PI3K-Akt和ERK 1/2信号通路,增加皮质神经元的存活.
-
CyPA及p-ERK1/2在动脉粥样硬化大鼠血管内皮中的表达
目的：观察动脉粥样硬化( AS)大鼠血管内皮功能以及亲环素A(CyPA)和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)的表达变化。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为3组(每组10只)：对照组、AS 12周组,AS 16周组。对照组给予基础饲料喂养+腹腔注射等量生理盐水；AS组给予高脂饲料喂养+维生素D3注射液60万IU/kg一次性腹腔注射。对应不同造模时间处死大鼠,分离腹主动脉,观测离体腹主动脉环对乙酰胆碱的舒张反应；HE染色、免疫组化法检测动脉血管壁CyPA及p-ERK1/2的表达。结果与对照组比较,AS 12周、AS 16周组血管内皮功能下降,3组差异有统计学意义( P<0．05)；HE染色显示对照组大鼠血管壁呈正常结构,AS 12周组大鼠内皮细胞破坏、平滑肌细胞增生,AS 16周组粥样钙化斑块形成；免疫组化分析显示3组大鼠血管壁内CyPA及p-ERK1/2表达逐渐升高,差异有统计学意义( P<0．05)。结论随着AS程度加重,大鼠血管内皮依赖性舒张功能明显下降,动脉粥样钙化斑块严重, CyPA及p-ERK1/2表达显著增加。 CyPA、p-ERK1/2信号机制参与加重血管动脉粥样硬化进展,可能是促进AS进展的途径之一。
-
MAPKs阻滞剂U0126对创伤性脑损伤大鼠学习记忆功能的影响及机制探讨
目的 观察丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)阻滞剂U0126对创伤性脑损伤(TBI)大鼠学习记忆功能的影响,并探讨其机制.方法 将313只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组52只、模型组87只、DMSO组87只、U0126组87只,除假手术组外其余各组制备大鼠弥漫性脑创伤模型.U0126组将0.1 mg/kg U0126以0.1 mmol/L的PBS稀释至300 μL,于造模前30 min尾静脉注射.DMSO组同时点尾静脉注射相同含量DMSO稀释溶液,假手术组和模型组同时点尾静脉注射生理盐水300 μL.造模30 min、3h、12 h、24 h、48 h、72 h、7d取各组大鼠各5只(假手术组3只),采用TUNEL法观察各组海马组织神经细胞凋亡情况.造模30 min、3h、12h、24h、48 h、72 h、7d取各组大鼠各6只(假手术组3只),采用Western blot法检测各组海马组织磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达.造模14、16、18、21 d取各组大鼠各10只,采用Morris水迷宫实验观察大鼠空间学习记忆能力.结果 造模48、72 h时,U0126组海马组织神经细胞凋亡数少于DMSO组、模型组,P均＜0.05;造模24、48、72 h时,U0126组、DMSO组、模型组海马组织神经细胞凋亡数均多于假手术组,P均＜0.05;造模48、72 h时,U0126组海马组织p-ERK1/2蛋白相对表达量低于模型组、DMSO组,P均＜0.05;造模12、24、48、72 h时,U0126组、DMSO组、模型组海马组织p-ERK1/2蛋白相对表达量均短于假手术组,P均＜0.05;造模16、18、21 d时U0126组大鼠潜伏期均短于DMSO组、模型组,P均＜0.05;造模14、16、18、21 d时U0126组、DMSO组、模型组大鼠潜伏期均长于假手术组,P均＜0.05.相关性分析结果显示,海马区神经细胞凋亡数与p-ERK1/2表达呈正相关(r=0.468,P=0.002).结论 U0126可抑制TBI大鼠海马神经细胞凋亡,提高大鼠的学习记忆能力,可能与降低海马组织中p-ERK1/2表达有关.
-
7-二氟亚甲基-5,4'-二甲氧基染料木黄酮通过下调核因子κB和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的表达抑制血管内皮细胞与单核细胞的黏附
目的 研究7-二氟亚甲基-5,4'-二甲氧基染料木黄酮对氧化诱导的血管内皮细胞与单核细胞黏附的影响,并初步探讨其作用机制.方法 蛋白定量分析法测定内皮细胞与单核细胞的黏附率,酶联免疫吸附法检测E选择素、细胞间黏附分子1的释放,Western Blotting检测核因子κB、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的表达.结果 1.0 mmol/L H2O2孵育内皮细胞24 h,内皮细胞与单核细胞的黏附增多,E选择素和细胞间黏附分子1的释放增加,核因子κB和磷酸化细胞外信号调节激醇1/2表达上调.用7-二氟亚甲基-5,4'-二甲氧基染料木黄酮预处理后可见内皮细胞与单核细胞的黏附率降低,E选择素和细胞间黏附分子1的释放减少,核因子κB和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的表达下调.结论 7-二氟亚甲基-5,4'-二甲氧基染料木黄酮对氧化诱导的血管内皮细胞与单核细胞黏附及黏附分子E选择素、细胞间黏附分子1的释放有明显抑制作用,其作用机制可能与下调核因子κB和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的表达有关.
-
磷酸化细胞外信号调节激酶1/2定位于成骨细胞的局部黏附时需要Src活性
目的 探讨血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)刺激成骨细胞,对磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(phosphorylation extracellular signal-regulated kinase1/2,pERK1/2)位置的影响.方法 出生3 d清洁级健康小鼠10只,雌雄不拘,体重6～9 g.取小鼠颅骨,分离培养原代成骨细胞.取第6代成骨细胞,1%血清培养液培养12 h后,随机分成经10μmol/L PP2处理30 min组(实验组)和未处理组(对照组),每组再随机分成2个亚组:其中一组用PDGF(20 ng/ml)刺激10 min,另一组不用PDGF刺激,采用免疫组织化学染色检测pERK1/2分布.另取第6代成骨细胞,当细胞生长至80%融合时,用细胞刮随机分成2组,一组用10μmol/L PP2预处理30 min(实验组),另一组不用PP2作用(对照组),再用20 ng/ml PDGF培养12 h,采用划痕愈合法检测PP2对成骨细胞在PDGF刺激下迁移能力的影响.另取第6代成骨细胞,调整细胞浓度1×106/ml,随机分成2组,分别经DMSO(对照组)和10μmol/LPP2(实验组)预处理30 min,每组再随机分成2个亚组:其中一组用PDGF(20 ng/ml)刺激10 min,另一组不用PDGF刺激,采用Western blot检测细胞骨架蛋白内pERK1/2活性.结果 免疫荧光染色结果显示,PDGF促进pERK1/2定位于成骨细胞的局部黏附和细胞核内;而PP2显著抑制了由PDGF刺激引起的pERK1/2定位于成骨细胞的局部黏附,但并不影响pERK1/2定位于细胞核内.细胞划痕愈合实验显示,PP2明显抑制了由PDGF所诱导的成骨细胞迁移.Western blot检测结果显示,PP2明显抑制了由PDGF所诱导的成骨细胞局部黏附内ERK1/2的磷酸化.结论 PDGF通过激活Src活性,促进pERK1/2定位于成骨细胞的局部黏附内;PP2通过抑制pERK1/2定位于成骨细胞的局部黏附,从而抑制由PDGF所诱导的成骨细胞迁移.
关键词： Src 磷酸化细胞外信号调节激酶1/2 血小板源性生长因子 成骨细胞
