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高皂苷人参株系早期筛选的研究
通过PCR引物检测人参DNA特异性片段,快速、准确的评价低龄人参种质质量,加快人参育种进程.该研究基于个体之间的基因差异,设计7对引物,通过比对不同人参DNA的扩增图谱与皂苷含量相关性,成功得到一对特异性引物GC1,并采用L16(45)正交试验优化其25 μL PCR体系,各组分佳配比为:DNA2.60 mg·L-1,Mg2+ 1.44 mmol·L-1,dNTP 0.19mmol·L-1,引物0.32 μmol·L-1,Taq0.076 U·μL-1.对GC1引物进行验证,在24株供试人参中有2株扩增出1 200 bp特异性条带阳性样品,2株阳性样品中9种单体皂苷及其加和值含量均较高.该特异性条带序列与甘油-3-磷酸脱氢酶同源性达99％.GC1可以作为一种高皂苷人参株系早期筛选鉴定方法的特异性引物,有利于加快人参育种进程.
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传统中药金钱草ISSR-PCR反应体系的正交优化研究
建立稳定、可靠的金钱草ISSR-PCR反应体系,为金钱草遗传多样性分析、优良品种选育、药材分子鉴定奠定基础.该研究在7水平单因素实验的基础上,采用L16(45)正交试验设计,应用SPSS 19.0进行方差分析,对影响反应体系的5个主要因素在4个水平上进行优化.利用优化的反应体系,筛选引物适退火温度,以23份不同产地金钱草材料检测体系稳定性.结果显示模板DNA,引物,dNTP,Mg2,Taq酶5个因素对金钱草ISSR-PCR反应结果均有极显著影响,影响大小依次为引物＞ Taq酶＞模板DNA＞ Mg2+＞ dNTP,确定优反应体系为总体积25μL,模板DNA 60 ng,引物0.3μmol·L-1,dNTP 0.2mmol·L-1,Mg2+1.8 mmol·L-1,Taq酶1.25 U.经不同产地样品检测,该优化体系稳定、可靠.该研究为其他物种ISSR-PCR体系的优化提供参考.
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正常人体形态学课程整合的调查和优化
目的 调查分析正常人体形态学课程整合的效果并优化其结构体系.方法 以新疆医科大学2016级中医班和中西医班作为人体形态学课程整合试点班级进行教学改革,并对这两个班级进行问卷调查,分析教学内容、教学效果和学生成绩等.结果 教改组93. 75%的学生对教学内容熟悉,普通组66. 98%的学生熟悉;教改组79. 46%的学生了解该课程的学习方法,普通组只有31. 13%的学生知道如何去学;教改组的平均成绩(77. 97分)高于普通组(74. 38分).结论 根据调查结果,从教学内容、教学效果、师资教材等方面进行了分析,以课程整合的方式进行教学为教学质量的提高以及学生综合能力的培养奠定基础.
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大肠埃希菌基因间重复序列PCR反应体系的优化
目的 对大肠埃希菌ERIC-PCR反应体系进行优化. 方法 提取大肠埃希菌基大组DNA作为ERIC-PCR反应的模板,通过设计一个L9(34)正交试验对Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度和Taq DNA聚合酶4种因素进行优化. 结果 通过L9(34)正交试验优化的大肠埃希菌ERIC-PCR佳反应体系(25μl)为:2.5μl 10×Loading buffer,Mg2+浓度2.0 mmol/L,dNTPs浓度200 μmol/L,引物浓度0.2 μmol/L,Taq DNA聚合酶1.0U,模板DNA 40 ng.应用该体系进行ERIC-PCR得到的DNA指纹图谱条带丰富、清晰、重复性好. 结论 采用正交试验优化的ERIC-PCR反应体系结果稳定可靠,对于大肠埃希菌在分子水平上的分型鉴定以及分子流行病学调查具有重要意义.
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水蛭ISSR-PCR反应体系的建立及优化
目的 建立并优化水蛭ISSR-PCR反应体系及扩增程序,为水蛭进行遗传多样性研究提供依据.方法 使用引物ISSR825,采用正交优化方法对影响PCR反应的Mg2+、dNTP、引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA进行了体系优化,同时对引物的佳退火温度进行了选择.结果 在25 μL总体积中,其中包括10×PCR缓冲液2.5 μL、Mg2+ 2.0 mmol/L、dNTP0.25 mmol/L、引物0.8 μmol/L、Taq DNA聚合酶2.5 U、模板DNA 2.0 ng/μL,佳退火温度为49.7℃.结论 所建立的佳ISSR-PCR反应体系稳定可靠,可用于水蛭遗传多样性评价、不同种源鉴定及亲缘关系分析.
关键词： 水蛭 ISSR-PCR体系 正交设计 体系优化 种质资源 -
三叶木通MSAP反应体系的优化及引物筛选
目的 研究三叶木通表观遗传多样性,建立并优化三叶木通甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplified polymorphism,MSAP)反应体系.方法 以三叶木通叶片为材料,利用正交试验建立三叶木通MSAP的预扩增和选择性扩增的佳反应体系.结果 建立的MSAP佳反应体系为酶切反应;Hpall/Mspl 10 U,EcoR I 10 U;预扩增反应;总体积20 μL,连接产物2μL,E00、HM00各125 ng,dNTPs 0.312 5 mmol/L,Mg2+ 1.875 mmol/L,Taq DNA聚合酶2U;选择性扩增反应;总体积20 μL,稀释200倍的预扩增产物5μL,引物E-ACT、HM-CAT各50 ng,dNTPs 0.250 mmol/L,Mg2+ 1.250mmol/L,Taq DNA酶1 U.利用优化的体系,终从MSAP的80对引物中筛选出有效引物6对.结论 建立的MSAP反应体系可用于后续三叶木通DNA甲基化的相关研究.
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土鳖虫DNA的RAMP-PCR反应体系的建立及优化
目的 建立并优化土鳖虫基因组DNA的RAMP-PCR反应体系及扩增程序,为土鳖虫遗传多样性的研究提供依据.方法 以雌性土鳖虫为材料,常规酚/氯仿提取基因组DNA.使用RAMP引物(ISSR807+RAPD A5),采用正交优化方法对影响PCR反应的Mg2+、dNTPs、引物、DNA聚合酶、模板进行体系优化,同时选择佳的引物退火温度.结果 适引物(ISSR807+RAPD A5)组合进行土鳖虫的RAMP-PCR分析的反应体系为总体积25 μL,包括10×缓冲液2.5 μL、Mg2+ 1.00 mmol/L、dNTPs 2.00 mmol/L、引物0.50 μmol/L、TaqDNA聚合酶1.00 U、DNA模板1.50 ng/μL,佳退火温度为46.8℃.结论 本实验建立的佳RAMP-PCR反应体系稳定、重复性好,可用于土鳖虫种质资源鉴定和遗传多样性研究.
关键词： 土鳖虫 正交试验 体系优化 RAMP-PCR体系 遗传多样性 -
中医药院校非医药学专业信息检索课程体系优化研究
该文对中医院校非医药学专业信息检索课程体系优化的意义、国内外研究现状、非医药专业特点及学生认知特点进行剖析,进而提出课程体系优化方案,以期能获得更好的教学实践成果.
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实验兔RAPD反应体系的优化及引物筛选
目的 建立实验兔随机扩增多态DNA(RAPD)的优反应体系,并对RAPD引物进行筛选优化.方法 以白毛黑眼(WHBE)兔,日本大耳白(JW)兔,新西兰(NZW)兔为实验材料,对影响RAPD反应的各因素进行优化,摸索出佳的Mg2+,dNTP,Taq酶,引物和DNA模板的浓度,并从60个随机引物中筛选出适合实验兔RAPD反应的引物.结果 优RAPD-PCR反应体系为:在20 μl的反应体系中,Mg2+1.5 mmol/L,dNTP 0.25 nmaol/L,Taq酶1.25 U,引物5 μmol/L,模板DNA 40 ng.60个RAPD引物中剔除了重复性差,条带模糊的引物后,有25个引物稳定,扩增出来的条带清晰、多态性高.结论 本研究筛选出的25个引物和建立的PCR体系可应用于实验兔的RAPD反应.
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基于知识点的开放性课程体系优化应用研究
基于知识点的开放性课程体系优化研究在于以知识点为基本单元,梳理纵向深入的知识路径与横向展开的知识面,形成知识网络,构建动态平衡的开放课程体系.以信息管理专业课程优化系统为实例,通过以网络为知识点的教学平台,梳理知识链,构建知识体系,探寻教学内容和课程体系整体优化方法.
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桔梗ISSR反应体系的建立和优化
目的 建立并优化桔梗ISSR-PCR反应体系和扩增程序.方法 采用正交试验和单因子试验,对ISSR反应体系主要因子(dNTPs、Taq酶、引物、Mg2+、模板)进行筛选.之后通过单因子试验,进行引物退火温度、循环次数的筛选.结果 桔梗ISSR-PCR的佳反应体系(20μl)为:dNTPs 0.25mmol/L、Taq酶1.0U、引物0.30μmol/L、Mg2+ 1.50mmol/L、模板DNA10ng.利用此反应体系从54条引物中筛选出12条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,确定了引物UBC853[序列为(TC)8RC]的佳退火温度为55℃和循环次数为45次.结论 建立的桔梗ISSR-PCR反应体系,经过白、紫花桔梗共20份样品检验,证明该体系具有稳定性和可靠性,可用于桔梗遗传多样性研究.
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拳卷地钱基因组DNA提取及ISSR-PCR扩增体系优化
目的 建立一种拳卷地钱基因组DNA的提取方法;对影响拳卷地钱ISSR-PCR反应的各因素进行优化,建立稳定的反应体系.方法 采用改进的CTAB法提取拳卷地钱基因组DNA;以Taq酶、Mg2+、dNTP和引物4因素3水平的正交设计对拳卷地钱ISSR-PCR反应体系进行优化.结果 采用改进的CTAB法提取的拳卷地钱基因组DNA质量高,且适用于ISSR-PCR扩增;获得拳卷地钱佳反应体系(20μl)为:Taq酶0.5U,Mg2+ 2.0 mmol/L,dNTP 250 μmol/L,模板DNA 50ng,引物0.6μmol/L.结论 建立并优化了拳卷地钱总DNA提取方法及ISSR-PCR反应体系.
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云南沉香ISSR-PCR反应体系的建立与优化
目的 建立并优化出清晰稳定的云南沉香ISSR-PCR反应体系和扩增程序,并筛选出适合的引物.方法 利用正交设计试验,对云南沉香ISSR-PCR反应体系中的5个主要因素进行优化,并设置温度梯度检测佳退火温度.结果 首次建立了云南沉香ISSR-PCR的佳反应体系,即在20μl反应体系中,各个因素的浓度分别为:模板DNA 10 ng/20μl、Mg2+ 3mmol/L、Taq DNA聚合酶2.4 U/20μl、dNTP 0.6mmol/L、引物0.2μmol/L;引物UBC811的佳退火温度为53.0℃.并且,从100条引物中筛选出16条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物.结论 优化确立的云南沉香ISSR-PCR反应体系稳定可靠,可为后续云南沉香的遗传多样性分析研究奠定基础.
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三桠苦ISSR反应体系的优化与引物筛选
目的 构建三桠苦ISSR反应体系,为三桠苦种质资源遗传多样性分析及分子鉴定奠定基础.方法 通过设定影响三桠苦ISSR-PCR反应诸因子的不同梯度,检测不同反应体系的扩增效果,对条件进行优化,并筛选引物及退火温度,建立三桠苦ISSR-PCR适反应体系,并用23个不同三桠苦样品验证体系稳定性.结果 首次建立了三桠苦ISSR佳反应体系(25 μl):Master Mix 12.5 μl(Mg2+浓度4 mmol/L,dNTP浓度0.4mmol/L)、引物0.6μmol/L、模板DNA 20ng.利用该体系从60条ISSR引物中筛选出了扩增条带清晰、多态性好的12条引物.结论 所建立的三桠苦ISSR反应体系稳定可靠、标记位点清晰、检测多态性能力强,这一体系的建立及引物筛选可应用于三桠苦种质资源评估及遗传多样性分析的研究.
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对叶百部基因组DNA提取及ISSR-PCR体系优化
目的 建立适合对叶百部基因组DNA提取方法及ISSR-PCR佳反应体系.方法 通过改良的CTAB法提取对叶百部基因组DNA,并采用正交试验设计方法对影响ISSR-PCR反应体系的5种因素(dNTP、模板DNA、引物、Mg2+和Taq聚合酶)4个水平进行正交试验,优化ISSR-PCR反应体系.结果 确立了对叶百部佳反应体系,即在20μl的总反应体积中含有10×PCR buffer 2μl,dNTP 175 μmol/L,Mg2+ 1.7mmol/L,引物0.6μmol/L,Taq酶1.0U,模板DNA 15ng.结论 建立并优化了对叶百部基因组DNA提取方法及ISSR-PCR反应体系.
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粗茎秦艽ISSR-PCR反应体系的优化
目的:建立粗茎秦艽Gentiana crassictmlis Duthie ex Bark的ISSR-PCR佳反应体系.方法:基因组DNA为模板,分别对体系各因子进行考察.结果:佳体系为:总体积10μL,其中含0.5-1.5ng/μL DNA模板,10×Buffer缓冲液1μL,2.5mmol/L Mg++,0.5U Taq DNA聚合酶,0.6μmol/L引物,0.2mmol/L dNTPs.反应程序:94℃预变性5min;之后,94℃变性30s,540C℃性45s,72℃延伸90s,共38个循环;循环结束后72℃延伸7min.结论:该体系可用于粗茎秦艽种下及种间遗传变异分析及药材道地性研究.
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湘产百合核心种质库的SRAP体系的建立
目的 确立适用于湘产百合核心种质库的相关序列扩增多态性(SRAP)反应体系.方法 根据构建核心种质库的需求,对实验步骤、评分规则进行针对性改良,通过Mg2+、dNTPs、引物、Taq酶、模板5因素4水平的正交试验与单因素试验构建SRAP体系,并筛选出适用引物.结果 佳反应体系(20 μL):Mg2+浓度2.5 mmol/L,dNTPs浓度0.20μmol/L,引物浓度0.20 μmol/L,Taq酶1.0 U,模板DNA 50 ng能获得明亮清晰的扩增条带;并由144对引物组合中筛选出32对产物稳定、多态性丰富的引物组合.结论 该体系具有较高的稳定性,并可提高引物使用率,满足百合核心种质构建对大信息量的需求,适用于湘产百合核心种质库的研究.
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白木通SRAP反应体系的优化及其应用
目的:建立适于白木通的SRAP反应体系,为白木通的遗传多样性研究奠定基础.方法:以白木通基因组DNA为模板,优化了SRAP反应体系的各主要参数.结果:建立稳定可靠的SRAP-PCR反应体系(25 μL):模板DNA 90 ng,dNTPs200μmol/L,TaqDNA聚合酶1U,引物0.4μmol/L,10×PCR Buffer 2.5μL;反应程序中第2次适退火温度为55℃;筛选出12对稳定性好、多态性高的SRAP引物;并对5个白木通进行扩增验证,共获得114个多态性位点.结论:该体系是适于白木通的SRAP反应体系,为后续白木通遗传多样性研究奠定了基础.
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溪黄草和线纹香茶菜的ISSR反应体系的建立与优化
目的 构建溪黄草与线纹香茶菜的简单重复序列区间(inter-simple sequence repeat,ISSR)反应体系,为溪黄草药材种质资源的遗传多样性分析奠定基础.方法 通过设定溪黄草ISSR-PCR的各反应因子的不同梯度,对反应条件进行优化,建立适合溪黄草与线纹香茶菜的ISSR反应体系;以溪黄草DNA为模板,用该体系对100条引物进行初筛,用线纹香茶菜进行复筛,并用23个溪黄草、16个线纹香茶菜单株样品验证体系稳定性.结果 建立了溪黄草和线绞香茶菜ISSR佳反应体系(25 μL):2×Taq Master Mix 12.5 μL(Mg2+浓度4mmol·L-1,dNTP浓度0.4 mmol·L-1)、引物0.6 μmol·L-1、模板DNA 10 ng.结论 建立的溪黄草和线纹香茶菜的ISSR反应体系稳定可靠、标记位点清晰、检测多态性能力强,可较好地应用于溪黄草与线纹香茶菜的ISSR遗传多样性分析的研究.
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快速鉴定结核杆菌的双重分子信标检测体系的优化
目的 优化双重分子信标的实验体系以快速检测结核杆菌及其耐药菌株.方法 选择不同镁离子浓度、退火温度、引物浓度分别进行荧光定量PCR,终得出佳反应条件.结果 为保证扩增效率且无非特异性扩增,终选择佳条件是:M g2+浓度3.0 mmol/L;退火温度60 ℃;引物浓度0.3 mmol/L.结论 确立了双重分子信标实验的优条件,从而保证了分子信标荧光定量PCR检测结核杆菌具有操作简便、快速、灵敏度高(低可检测1 CFU/mL)、特异性强(只能检测包括耐药菌株的结核杆菌复合群)、重复性好(变异系数<5%)等优势,为双重分子信标检测结核杆菌提供了必要条件.
