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ISSR分子标记快速预测远志中sibiricose A5和sibiricose A6的含量
目的:优化远志简单重复序列区间(ISSR)扩增多态性反应体系,设计一对聚合酶链式反应(PCR)引物用于快速预测远志药材中sibiricose A5和sibiricoseA6的含量高低.方法:采用UPLC测定远志药材中sibiricose A5与sibiricose A6的含量,通过单因素试验优化远志ISSR反应体系,利用ISSR分子标记技术筛选出与sibiricose A5和sibiricose A6含量相关的特异性DNA片段,针对此片段设计特异性PCR引物.结果:7批远志药材中sibiricose A5和sibiricose A6的含量差异较大,变化范围分别为0.895 4 ～3.227 6,0.6442～2.0578 mg·g-1.对筛选出的与sibiricose A5和sibiricose A6含量相关片段(890-8)进行克隆测序后,设计出了1对特异性引物(YZ-SA),可用于快速预测远志药材中sibificose A5和sibiricose A6的含量高低.结论:优化后的远志ISSR反应体系具有标记位点清晰、检测多态性能力强等特点,设计出的特异性引物可用于快速预测远志药材中sibiricose A5和sibiricose A6的含量高低.
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椭圆叶花锚遗传多样性的ISSR分析
研究不同野生居群藏药“蒂达”主要基原植物椭圆叶花锚的遗传多样性.对17个野生居群的椭圆叶花锚及其近缘种样本进行ISSR-PCR扩增,用POPGENE 1.32软件分析并计算Nei's遗传距离,用NTSYS软件分析遗传距离及相似系数,UPGMA方法聚类,构建亲缘关系系统图.从30条ISSR引物中筛选出11个用于多态性分析,11条引物共检测到97个位点,多态性位点百分率为100％.遗传相似系数变化范围0.299 4～0.991 2.聚类结果显示,来源于同一地区不同居群的椭圆叶花锚亲缘关系较近,并与其近缘种具有显著差异.本实验从分子水平为椭圆叶花锚及其近缘种药用植物的鉴定和开发提供了遗传基础.
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溪黄草和线纹香茶菜的ISSR反应体系的建立与优化
目的 构建溪黄草与线纹香茶菜的简单重复序列区间(inter-simple sequence repeat,ISSR)反应体系,为溪黄草药材种质资源的遗传多样性分析奠定基础.方法 通过设定溪黄草ISSR-PCR的各反应因子的不同梯度,对反应条件进行优化,建立适合溪黄草与线纹香茶菜的ISSR反应体系;以溪黄草DNA为模板,用该体系对100条引物进行初筛,用线纹香茶菜进行复筛,并用23个溪黄草、16个线纹香茶菜单株样品验证体系稳定性.结果 建立了溪黄草和线绞香茶菜ISSR佳反应体系(25 μL):2×Taq Master Mix 12.5 μL(Mg2+浓度4mmol·L-1,dNTP浓度0.4 mmol·L-1)、引物0.6 μmol·L-1、模板DNA 10 ng.结论 建立的溪黄草和线纹香茶菜的ISSR反应体系稳定可靠、标记位点清晰、检测多态性能力强,可较好地应用于溪黄草与线纹香茶菜的ISSR遗传多样性分析的研究.
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青蒿素高含量地区黄花蒿种质资源的简单重复序列区间分析
目的:分析广西、贵州和重庆3个青蒿素高含量地区的野生黄花蒿资源的遗传多样性.方法:以40份黄花蒿为试材,通过简单重复序列区间(ISSR)分析,运用POPGENE version 1.31软件和TREECONW软件计算相关参数,UPGMA方法聚类,构建亲缘关系树状图.结果:18条ISSR引物扩增出84条带,多态比率为79.76%;物种水平上,ISSR标记揭示的Nei's基因多样性指数为0.2019,Shannon信息指数为0.3244;3个地区之间ISSR标记揭示的Nei's基因多样性指数范围为0.1867～0.1943,Shannon信息指数范围为0.2936～0.3073;ISSR检测不同材料间遗传距离范围为0.1467～0.4493,平均为0.3132.结论:ISSR标记能有效地揭示青蒿素高含量地区野生黄花蒿极为丰富的遗传多样性,可为进一步的选择育种提供更多的种质资源.
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沙棘属植物的ISSR-PCR反应体系的建立
目的 建立沙棘的简单重复序列区间聚合酶链反应(ISSR-PCR)优化反应体系.方法 对影响ISSR-PCR反应的各因子,如模板DNA用量、TaqDNA聚合酶浓度、镁离子浓度、dNTP浓度等进行单因素梯度实验.结果 筛选出了优化的反应条件.结论 建立的反应体系多态性高,系统稳定,可应用于沙棘属植物遗传多样性研究和亲缘关系分析.
