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CYP76AH1文献资料
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丹参CYP76AH1转基因毛状根的建立及其蛋白的分离
蛋白质复合物参与植物多种次生代谢物的合成,其分离对阐明植物次生代谢及提高体外催化效率至关重要.该研究构建了过表达丹参酮合成途径关键酶CYP76AH1的转基因毛状根株系,通过Western杂交筛选得到高表达CYP76AH1蛋白的丹参转基因毛状根,并以此作为后续提取丹参酮合成途径中蛋白质复合物的组培材料.通过优化蛋白提取缓冲液中的去污剂种类和浓度,筛选出含0.5％ Triton X-100的缓冲液为佳提取缓冲液,并分离得到相对大量的可溶性CYP76AH1蛋白质.该研究为后续进一步分离纯化与CYP76AH1相互作用的蛋白质复合物奠定了基础,也为深度解析丹参酮合成代谢通路提供思路.
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转化次丹参酮二烯酿酒酵母全细胞催化体系的构建
丹参酮是中药丹参的重要活性成分之一,其代谢途径尚未明确.快速筛选和鉴定丹参酮生物合成途径相关基因具有重要意义.铁锈醇作为丹参酮代谢途径中间产物,其产量相对较低,为得到大量铁锈醇用来作为下游P450功能鉴定的底物进行下游途径解析,迫切需要建立高效转化次丹参酮二烯至铁锈醇的体系.本文以酿酒酵母为宿主,构建了含有催化次丹参酮二烯生成铁锈醇的CYP76AH1及P450还原酶SmCPR1全细胞催化体系,并在DNA及mRNA水平对其进行了表征.通过透性剂处理,实现了一步生物转化合成铁锈醇,转化效率达到了69.9％.该研究证实含有CYP76AHl及来源于丹参的细胞色素还原酶SmCPR1的酿酒酵母能够将次丹参酮二烯转化为铁锈醇,研究结果不仅为生物转化生产铁锈醇提供了一个有效平台,还可以用于鉴定丹参酮下游合成的其他CYP450的功能.
