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撤药析方分析五灵胶囊配伍及组方成分抗肝纤维化作用
目的:探讨五灵胶囊(Wuling Capsule,WL)组方成分和撤药组在方中的效应及对全方功效的影响.方法:采用四氯化碳多次注射,饮用10%乙醇溶液并以高脂低蛋白饲料饲养制备小鼠肝纤维化模型,分别给予试验药物治疗10 d,酶法测定各实验组小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、胆碱酯酶(CHE);体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6细胞并采用转化生长因子(TGF-B1)诱导其活化,研究撤药组及组成成分对HSC-T6表达Ras/ERK,TGFβ/Smad信号通路蛋白的影响,Western blot检测α-SMA,Ras,Collagen I,ERK,p-ERK,TβR I,TβRⅡ,Smad2/3蛋白的表达.结果:WL、组成成分和撤药组降低肝纤维化小鼠血清ALT和增加CHE活性,柴胡和灵芝无降ALT作用,各撤药组及组成成分对TGF-β1诱导HSC-T6表达α-SMA,Collagen Ⅰ,ERK,p-ERK,TαR Ⅰ,TαⅡ,Smad2/3蛋白具有差异性生物学效应.结论:组方配伍对WL治疗纤维化小鼠作用产生相加的影响.抑制对TGF-b1诱导HSC-T6表达ERK和TGF-β/Smad信号通路蛋白表达,继而影响HSC-T6转录和合成COL-Ⅰ.
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五灵胶囊对脂多糖诱导枯否细胞内核转录因子-κB表达的作用
目的:通过体内、体外实验探讨五灵胶囊(WL)对免疫性肝脏炎症反应的作用机制.方法:制备卡介苗(BCG)+免疫佐剂+脂多糖( LPS)诱导小鼠免疫性肝损伤模型,WL灌胃给药12d,处死小鼠分离血清并制备肝组织蛋白;予大鼠WL 10、6.25g/kg灌胃4d,腹主动脉取血并制备含药血清;另取SD大鼠分离原代肝细胞和原代枯否细胞( KCs);采用Transwell小室下层培养KCs,含药血清-KCs条件培养上清对小室上层肝细胞作用.酶法测定免疫性肝损伤小鼠血清AST、ALT及条件培养上清中AST、ALT和LDH-L活性.取KCs培养成单层并同步化24h,PDTC和WL分别干预KCs 24h,再加入60μg/L的LPS诱导121,Real-timePCR检测LPS诱导KCs表达MCP-1、IL-1、TNF-α mRNA水平,Western Blot检测免疫性肝损伤肝组织中和体外培养KCs表达TNFR Ⅰ、NF-κBs亚蛋白及IκK β、IκB.结果:WL明显降低免疫性肝损伤小鼠血清ALT、AST活性并抑制肝组织内活化NF-κB信号通路;含药血清Ⅰ、Ⅱ组明显抑制活化KCs分泌促炎因子损伤肝细胞,WL抑制LPS诱导KCs表达NF-κBs信号通路蛋白,下调MCP-1、IL-1、TNF-αmRNA表达.结论:WL治疗慢性肝病炎症反应的作用机制与下调活化NF-κBs信号通路蛋白,阻滞KCs释放过量促炎因子所致肝细胞损伤相关.
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五灵胶囊活血化瘀作用的实验研究
目的 观察五灵胶囊的活血化瘀作用.方法 采用大剂量肾上腺素模拟暴怒时机体变化,以冰水浸泡大鼠模拟寒邪以复制血瘀模型,麻醉动物采动脉血,用血流变检测仪测定血流动力学数据,用自动凝血仪测定凝血酶原时间(PT)与部分凝血活酶时间(APTT)及纤维蛋白原(FIB).结果 五灵胶囊使血瘀大鼠的全血高切粘度、全血中切粘度、全血低切粘度、全血高切还原粘度、全血高切相对粘度、低切相对粘度,以及红细胞刚性指数、红细胞压积显著降低,并能显著延长APTT-PT(P<0.01 P<0.05).对血浆粘度无影响.结论 五灵胶囊有一定的活血化瘀作用.
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HPLC法测定五灵胶囊中腺苷
五灵胶囊由灵芝、五味子组成,具有补肾,益气,安神之功效.其中灵芝为君药,腺苷是灵芝中主要活性成分.为控制本品质量,本实验采用HPLC法测定该制剂中腺苷的量.
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正交试验探讨五灵胶囊配伍对慢性肝损伤小鼠的影响
目的:观察五灵胶囊组方及交互配伍对慢性肝损伤小鼠药效学作用,探讨五灵胶囊复方的配伍意义.方法:采用L16(215)正交试验设计,用四氯化碳(CCl4)多次皮下注射,饮用10%乙醇溶液并以高脂低蛋白饲料饲养制备小鼠肝纤维化模型,分别给予受试药物治疗10 d,酶法测定血清丙氨酸氨皋转移酶(ALT)和胆碱酯酶(CHE),化学法测定肝匀浆丙二醛(MDA)含量.结果:F值检验显示:五灵胶囊4成分交互配伍对慢性肝损伤小鼠ALT、CHE和MDA有不同作用,单味灵芝、五味子+灵芝、柴胡+灵芝、五味子+柴胡+灵芝、丹参+柴胡+灵芝及全方能显著降低MDA;配伍组五味子、柴胡、五味子+丹参+柴胡及全方能显著降低ALT;配伍组五味子、丹参、柴胡+灵芝、丹参+柴胡+灵芝及全方能显著升高CHE.结论:全方能降低MDA和ALT酶活性,又能改善肝功能,试验支持五灵胶囊组方合理性.
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五灵胶囊对转化生长因子-β1诱导肝星状细胞TGF-β/Smad信号通路的影响
目的:观察五灵胶囊对转化生长因子-β1(Transforming growth factor,TGF-β1)诱导肝星状细胞(hepaitc stellate cels,HSC)TGF-β/Smad通路蛋白表达的影响.方法:采用不同剂量的五灵胶囊与HSC培养24h(TGF-β1于后3 h加入),收集上清,ELISA法测定胶原I型(COL-1),提取细胞全蛋白,Western blot检测α-SMA、ERK、p-ERK、TβR I、TβR II、Smad2/3、Smad7;RT-PCR法检测COL-I mRNA的水平.结果:五灵胶囊显著降低COL-1生成,下调COL-I mRNA表达,Western blot分析呈剂量依赖性下调α-SMA、Smad7表达,显著下调p-ERK、TβR II.结论:五灵胶囊抑制TGF-β1刺激HSC活化和分泌胶原蛋白作用是通过干扰TGF-β/Smad信号转导通路实现的.
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五灵胶囊中柴胡皂苷d在小鼠体内药代动力学研究
目的:探讨五灵胶囊中柴胡皂苷d在小鼠体内药代动力学特征.方法:小鼠ig五灵胶囊,在不同时间点采集血浆,加硫酸胺与乙腈-甲醇(4:1)混合液萃取制备样品液,经RP-HPLC测定血浆中柴胡皂苷d的浓度,SIP7软件拟合药动学参数.结果:小鼠ig给药五灵胶囊(5.5g/kg),五灵胶囊中柴胡皂苷d的药代动力学模型为一级吸收单室模型,其药代动力学参数在第1吸收峰Ka=2.341/h,Ke=0.081/h,Tmax=1.45h,Cmax=83.81ug/ml,T1/2Ke=7.76h;在第2吸收峰Ka=1.321/h,Ke=0.081/h,Tmax=6.48h,Ti/2Ke=7.76 h.结论:五灵胶囊中柴胡皂苷d在小鼠体内生物药剂学特征是吸收慢,清除也慢.
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五灵胶囊抗肝细胞损伤的药效成分分析
目的:研究五灵胶囊抗肝细胞损伤的药效成分及保护作用.方法:采用高效液相法(HPLC),将已知的对照品作对照,测定五灵胶囊中所含相应成分的含量;以体外D-Gla N、LPS诱导的大鼠原代肝细胞为靶细胞,经细胞培养观察五灵胶囊及对照品对肝细胞损伤后的保护作用.结果:在与对照品对照条件下,经HPLC分析五灵胶囊中各成分的滞留时间与各对照品时间一致;五灵胶囊和其他3种对照品可使D-GlaN、LPS诱导损伤原代肝细胞的ALT、LDH-L、MAO、GSH-ST、MDA水平显著降低,有效地拮抗D-GlaN和LPS对肝细胞的损伤;在受损肝细胞内测定五灵胶囊的化学成分有五味子醇甲、五味子乙素、隐丹参酮、丹参酮ⅡA.结论:HPLC分析和细胞药效学证实,初步推断五灵胶囊抗肝细胞损伤的部分有效成分是乙素、隐丹参酮、丹参酮ⅡA,而且这些成分对肝细胞的损伤具有一定的保护作用.
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五灵胶囊有效成分对脂多糖诱导大鼠枯否细胞核因子的影响
目的 观察五灵胶囊中有效成分对脂多糖(LPS)诱导大鼠枯否细胞核因子(NF-kB)的调节作用.方法 分离大鼠肝细胞和枯否细胞,60 μg·L-1 LPS诱导枯否细胞分泌促炎因子及NO.采用125Ⅰ放射免疫测定法测定TNF-α、IL-6、IL-8水平,比色法测定NO生成量,Western blot法检测ERK、P-ERK、NF-κB P50、NF-κB P65、p-NF-κB P65、I65、p-IκB、IKK、P38、P-P38、CD14、Stat3蛋白的变化.结果 五灵胶囊中的有效成分可显著抑制LPS诱导枯否细胞分泌TNF-α、IL-6、IL-8、NO的生成量.结论 五灵胶囊有效成分能抑制枯否细胞释放促炎因子,是其治疗慢性肝炎的作用机制之一.
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五灵胶囊中部分化学成分对脂多糖诱导枯否细胞释放炎症因子的影响
目的 观察五灵胶囊(Wuling capsules,WL)中部分化学成分对脂多糖(lipopolysaccharider,LPS)诱导大鼠原代枯否细胞(Kupffer cell,KC)表达ERK(extracellular signal-regulated kinase)和核因子(nuclear factor-kappa B,NF-κB)调节炎症因子和介质的作用.方法 分离大鼠KC,采用60 μg·L-1 LPS诱导KC分泌炎症因子及NOS,ELISA测定TNF-α、IL-6、IL-8,比色法测定NOS,Western blot检测全蛋白ERK、p-ERK、NF-κBp50、NF-κBp65、p-NF-KBp65、p-IκK、p-IκB及核、浆蛋白NF-κBp65、p-NF-κBp65的变化.结果 WL明显下调LPS活化KC表达p-ERK、p-NF-κBp65、p-IκK、p-IκB蛋白,模拟WL混合成分(Mix)及6单体成分明显下调LPS活化KC表达p-ERK和p-NF-κBp65信号通路蛋白.各受试药物组均能降低核内p-NF-κBp65表达,减少p-NF-κBp65入核抑制炎性基因转录,降低活化KC过量分泌TNF-α、IL-6、IL-8和NOS.结论 WL中五味子醇甲、五味子乙素、隐丹参酮、丹参酮ⅡA、柴胡皂苷D是干预LPS诱导KC表达ERK、NF-κB信号通路蛋白,抑制炎性因子与介质基因转录而减少TNF-α、IL-6、IL-8和NOS分泌的有效成分.
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五灵胶囊对脂多糖诱导肝细胞因子所致肝损伤的作用机制
目的 观察五灵胶囊对脂多糖(LPS)诱导肝脏内细胞因子所致肝损伤的调节作用.方法 取昆明小鼠和BALB/c小鼠尾静脉注射LPS 3.5 mg·kg-1,诱导细胞因子所致肝损伤模型,酶法测定ALT,AST,ALP;125I放免法测定血清与肝匀浆IL-6,IL-8,TNF-α水平;免疫组化法染色并用Miaspro图象分析系统测定TNF-α,CD14,iNOS,eNOS阳性细胞率,同时体外培养枯否细胞,用HE染色观察细胞形态与免疫组化法定位及分析TNF-α,CD14,iNOS,eNOS表达.结果 五灵胶囊2 g·kg-1组可使ALT活性降低(P＜0.01),五灵胶囊2.0 g·kg-1和1.0 g·kg-1组均有降低AST活性(P＜0.01);五灵胶囊两组血清与肝匀浆中IL-6,IL-8,TNF-α含量均低于模型组(P＜0.01).免疫组化结果显示,五灵胶囊3剂量组TNF-α,CD14细胞阳性表达率在肝组织损伤区低于模型组(P＜0.05).五灵胶囊组2剂量组iNOS 阳性率高于模型组(P＜0.01).五灵胶囊组KC细胞扒片TNF-α,CD14 表达强度降低,iNOS,eNOS表达强度相似模型组.结论 五灵胶囊抑制各种诱因导致肝实质与非实质细胞释放大量细胞因子是治疗肝损伤机制之一,iNOS,eNOS增加可能是其活血化瘀的作用机制.
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五灵胶囊对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β/Smad及Ras/ERK信号通路蛋白的影响
目的 探讨五灵胶囊对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β/Smad及Ras/ERK信号通路蛋白的影响,阐述五灵胶囊治疗肝纤维化的作用机制.方法 SD大鼠以高脂低蛋白饲料饲养,饮用10%乙醇,并腹腔注射4.1 moL/L CCl4制备肝纤维化模型,给予五灵胶囊进行治疗1个月.Western blot检测肝组织中α-SMA、Ras、ERK、p-ERK、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad7、TβRⅠ、TβRⅡ:RT-PCR法检测肝组织中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TGF-β1 mRNA;酶法测定血清ALT、AST;ELISA测定血清COL-Ⅰ、COL-Ⅲ含量;肝组织masson和HE染色进行肝细胞变性程度与胶原纤维增生程度评分.结果 五灵胶囊可显著降低血清AST、ALT水平,下调肝组织中Ras p21、α-SMA、p-ERK、TβR Ⅰ蛋白与TGF-β1、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ mRNA表达(P<0.01或0.05),增加p-Smad2/3蛋白表达(P<0.01),使肝细胞变性程度与胶原纤维增生程度显著降低.结论 五灵胶囊治疗肝纤维化的作用机制是显著降低肝纤维化大鼠组织肝细胞变性和胶原纤维增生的程度、抑制TGF-/Smad及Ras/ERK信号通路TβR Ⅰ、Ras p21、p-ERK蛋白表达及TGF-β1过量分泌.
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五灵胶囊中五味子乙素在小鼠体内药代动力学研究
目的:探讨中药方剂在体内动态过程对药效影响的规律.方法:小鼠分别ig五味子乙素和五灵胶囊,在不同时间点采集血浆,加硫酸胺与乙腈-甲醇(4∶1)混合液提取制备样品液,经HPLC分析乙素含量.结果:小鼠ig给药后(含乙素45.0 mg/kg),五灵胶囊所含乙素的药代动力学模型为单室模型一级吸收,其药代动力学参数在小鼠胃内Ka=1.561/h、Ke=0.511/h,TMax=1.05h,T1/2ke=1.33h;供试品乙素(45.0 mg/kg)Ka=1.891/h,Ke=0.251/h,TMax=1.25h、T1/2ke=2.71h;在肠内Ka=14.63h,Ke=0.25h,T(Max)=3.65h,T1/2ke=2.71h.结论:中药方剂改变了中药所含化学成分在体内生物药剂学特征,使其在体内药效作用延长,生物利用度提高.
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HPLC测定五灵胶囊中迷迭香酸的含量
目的:建立HPLC法测定五灵胶囊中迷迭香酸含量的方法. 方法: 采用Linksil C18反相色谱柱(250 mm × 4. 6 mm,5μm);以0. 5%冰醋酸水溶液-乙腈为流动相(流动相溶液体积比68∶32);流速为0. 8 ml·min-1;恒温25℃,检测波长为319 nm;每次进样量20 μl(仪器自带定量环定量). 结果:迷迭香酸在2~80 μg·ml-1线性范围具有良好的线性关系,该线性相关系数为0. 999 8. 平均回收率在97. 07﹪(n=6),精密度为1. 35%. 结论:本法准确性好,重复性好,快速,检测结果准确,可以用于五灵胶囊中迷迭香酸的含量测定.
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五灵胶囊不同提取工艺的药效比较
通过比较五灵胶囊三种制备工艺,观察醇提法、醇浸水提法、水提法均能降低由GAIN和CCl4所致ALT和AST升高,仅醇提法略降低MDA,结果显示醇提法对肝细胞有明显保护作用.
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五灵胶囊对实验性肝硬化鼠的影响
五灵胶囊是由五灵丸改变剂型而成,用于治疗慢性肝炎疗效显著.本实验采用肝纤维化大鼠模型,观察五灵胶囊对大鼠肝纤维化作用.
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五灵胶囊治疗慢性肝炎的临床随访观察
0 引言 五灵丸治疗慢性病毒性肝炎取得了较好的疗效[1],但五灵丸为大蜜丸,不易被患者所接受,且其消化道副作用较明显.
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五灵胶囊对LPS诱导枯否细胞释放细胞因子的影响
目的:探讨五灵胶囊对枯否细胞(Kupffer cells, KC)释放细胞因子介导肝细胞(hepatocellular cells, HC)损伤的作用. 方法:分离并纯化HC与KC并建立LPS及D-GlaN损伤肝细胞模型,观察五灵胶囊对2种损伤模型的作用以及对LPS诱导KC释放细胞因子介导肝细胞损伤的作用. 结果:五灵胶囊2个剂量能有效地阻滞LPS,D-GlaN损伤肝细胞以及降低LPS诱导KC释放TNF-α,IL-6,IL-8水平,抑制KC释放细胞因子损伤肝细胞. 结论:五灵胶囊遏制KC大量释放细胞因子是治疗慢性肝炎作用机制之一.
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五灵胶囊药效作用的有效成分
目的:探讨五灵胶囊产生药效作用的活性成分. 方法:分离肝细胞并建立肝细胞损伤模型,血清药效学试验证实五灵胶囊药效作用,HPLC色谱和紫外光谱分析含药血清中五灵胶囊化学成分,同时采用细胞药效学试验观察4种对照品的药效作用. 结果:模型组培养上清ALT,AST,MAO,MDA酶活性分别升高至(881.8±231.7) nkat/L, (1256.9±265.1) nkat/L, (32.3±2.3) nkat/L,(1.0±0.6) μmol/L,与正常组比较(P<0.05);五灵胶囊含药血清能有效地拮抗D-GlaN对肝细胞损伤,细胞上清液中ALT,AST,MAO,MDA酶活性分别降低至(421.8±288.4) nkat/L,(980.2±113.4) nkat/L,(21.7±5.5) nkat/L,(1.5±1.0) μmol/L,显著低于模型组(P<0.05);4种对照品能明显降低由D-GlaN诱导肝细胞损伤时所致升高的酶谱活性水平,对D-GlaN损伤的肝细胞有显著的修复和保护作用. 结论:醇甲、乙素、隐丹参酮和丹参酮ⅡA是五灵胶囊阻滞肝细胞损伤的有效活性成分.
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HPLC法分析五灵胶囊抗肝细胞损伤的药效成分
目的:分析五灵胶囊抗肝细胞损伤的药效成分及保护作用. 方法:采用高效液相法(HPLC),将已知的对照品作对照,测定五灵胶囊中所含相应成分的含量;以体外D-GlaN、LPS诱导的大鼠原代肝细胞为靶细胞,经细胞培养观察五灵胶囊及对照品对肝细胞损伤后的保护作用. 结果: 在与对照品对照条件下,经HPLC分析五灵胶囊中各成分的滞留时间与各对照品时间一致;五灵胶囊和其他3对照品可使D-GlaN、LPS诱导损伤原代肝细胞的ALT, LDH-L, MAO, GSH-ST和MDA水平显著降低,有效地拮抗D-GlaN和LPS对肝细胞的损伤;在受损肝细胞内测定五灵胶囊的化学成分有五味子醇甲、五味子乙素、隐丹参酮和丹参酮ⅡА. 结论: HPLC分析和细胞药效学证实,初步推断五灵胶囊抗肝细胞损伤的部分有效成分是乙素、隐丹参酮和丹参酮ⅡА,而且这些成分对肝细胞的损伤具有一定的保护作用.
