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濒危药用植物麻花秦艽和粗茎秦艽cpDNA提取研究
目的：对麻花秦艽和粗茎秦艽叶绿体基因组进行提取研究，为进一步研究秦艽叶绿体的基因组序列特征、遗传多样性以及资源保护研究奠定基础。方法：本文以麻花秦艽、粗茎秦艽为对象，采用改良的蔗糖密度梯度离心方法进行提取，优化纯化方法，分离得到秦艽叶绿体后测定cpDNA 浓度，检测其OD值并扩增ITS2序列验证其纯度。结果：获得高质量、高纯度的 cpDNA (0.1~0.4滋g/10 g)，扩增ITS2序列验证其无核污染，满足后续测序要求。结论：cpDNA 的纯度和质量对叶绿体基因组测序的正确率和可信度具有重要的影响。本文获得了高纯度、高质量的秦艽cpDNA，为秦艽叶绿体基因组全序列的获得提供保障。
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麻花秦艽组织培养及植株再生的研究
目的:研究药用植物麻花秦艽组织培养技术,为工厂化育苗提供科学依据.方法:以麻花秦艽根、茎育出的无菌苗为外植体,采用MS培养基,附加不同的植物激素进行实验.结果:以MS培养基为基本培养基,附加BA 0.5～1.0mg·L-1+NAA 0.5mg·L-1,适于丛生芽的诱导与增殖;附加IAA 1.0mg·L-1+BA 3mg·L-1,适于愈伤组织的诱导;附加IAA 1.0mg·L-1+BA 2.0～3.0mg·L-1适于愈伤组织继代培养,附加BA 2.0mg·L-1+NAA 0.5mg·L-1适于愈伤组织的分化.结论:通过诱导愈伤组织途径可以达到快速繁殖的目的.
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藏药麻花秦艽不同部位提取物的镇痛和急性毒性作用比较研究
目的 比较麻花秦艽不同部位提取物的急性毒性及其镇痛作用.方法 (1)甲醛致小鼠足疼痛反应:按照体重将小鼠分为6组:2个剂量实验-1组(灌胃麻花秦艽地上部分提取物10,30 g·kg-1),2个剂量实验-2组(灌胃麻花秦艽地下部分提取物10,30 g·kg-1),空白对照组(灌胃等量0.5％羧甲基纤维素,CMC),阳性对照组(一次性腹腔注射吗啡30 mg·kg-1),每组12只.每天2次,连续5次.末次给药后40 min,在小鼠右后足皮下注射5％甲醛30μL,观察并记录在注射后0～5 min、50～55 min的动物疼痛反应情况.(2)乙酸致小鼠扭体反应:分组与给药方法同(1).末次末次给药后40 min,在小鼠腹腔注射0.9％冰乙酸10μL·mg-1,观察并记录在注射冰乙酸后5～20 min的动物扭体次数.(3)急性毒性实验:5个剂量实验-1组分别灌胃麻花秦艽地上部分提取物72.8,91.2,113.6,142.4和177.6 g·kg-1;5个剂量实验-2组分别灌胃麻花秦艽地下部分提取物82.0,102.4,128.0,160.0和200.0 g·kg-1,在给药后14 d内,观察并记录动物中毒表现和死亡情况.结果 实验-1组与实验-2组对甲醛引起的2个时段的疼痛反应均无明显影响,但可抑制冰乙酸引起小鼠的扭体反应;实验-1组的LD50大于177.6 g·kg-1,实验-2组的LD50为109.80 g·kg-1.结论 实验-1组与实验-2组均对小鼠具有一定的急性毒性作用,并有一定的镇痛作用.
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甘肃祁连山地区麻花秦艽UPLC指纹图谱与遗传多样性研究
目的 建立麻花秦艽UPLC指纹图谱,并分析其指征性成分差异与遗传多样性.方法 应用超高效液相色谱法测定采集样本干燥根的主要化学成分,利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统分析不同居群指征性成分共有峰的相对峰面积,应用SPSS19.0对其进行聚类分析;应用ISSR分子标记对所采集样本干燥叶片进行基因组DNA提取和扩增,利用Popgen32软件分析遗传多样性及遗传分化状况.结果18个居群麻花秦艽药材共标定了12个共有峰,可分为3个类群,张掖市山丹县麻花秦艽龙胆苦苷及5种化学成分总含量高;6条ISSR引物共扩增出73个位点,PPB为98.63％,I平均值为0.366 3,H平均值为0.231 6,Gst为0.344 1,基因流Nm为0.953 0.结论 建立的麻花秦艽UPLC指纹图谱可作为其质量评价体系;麻花秦艽在种群水平上具有较高的遗传多样性,居群内遗传多样性水平明显高于居群间,遗传变异主要存在于居群内.
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达乌里秦艽化学成分的研究
秦艽为常用中药,是众多祛风湿方剂的主要原药材.其来源于龙胆科龙胆属(Gentiana L.)秦艽组植物.该组植物全世界约20种,我国有17种,作为药用的有12种,<中国药典>2005年版将其中的秦艽Gentiana macrophylla Pall.、麻花秦艽G.
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麻花秦艽非环烯醚萜成分的研究
目的 对龙胆属麻花秦艽Gentiana strarninea的非环烯醚萜成分进行研究.方法 利用硅胶、SephadexLH-20、ODS等柱色谱进行分离和纯化,根据化合物的光谱学数据和理化方法鉴定其结构.结果 从麻花秦艽70%乙醇提取物中分离得到12个化合物,分别鉴定其结构为(一)-syringaresinot-4,4'-bis-β-O-D-glucopyranoside(1)、gentiaphyllide-D(2)、红白金花内酯(3)、大叶苷D(4)、gentiaphyllide-E(5)、栎瘿酸(6)、乌苏醇(7)、β-谷甾醇(8)、胡萝卜苷(9)、龙胆三糖(10)、β-葡萄糖(11)和α-葡萄糖(12).结论 化合物1～6和10系首次从该植物中分离得到.
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青海道地药材秦艽HPLC指纹图谱研究
目的 利用高效液相色谱法建立了青海秦艽药材的色谱指纹图谱.方法 以青海产秦艽药材为分析对象,通过正交试验设计、信息理论及化学计量学的相关方法,确定适宜的色谱条件,从而建立了10个不同产地青海秦艽药材样品的指纹图谱.结果 指纹图谱中共有峰面积及其精密度、稳定性及重现性均符合<中药注射指纹图谱研究的技术要求(暂行)>中的相关规定.结论 采用HPLC指纹图谱可有效控制秦艽的质量.
关键词： 麻花秦艽 正交设计 互信息HPLC-FPS -
大孔吸附树脂纯化秦艽中龙胆苦苷
秦艽是龙胆科龙胆属草本植物秦艽Gentiana macrophylla Pall.、麻花秦艽G.straminea Maxim.、粗茎秦艽G.crassicaulis Duthie ex Burk.或小秦艽G.dahurica Fisch.
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加工炮制对秦艽中龙胆苦苷的影响
秦艽为龙胆科植物秦艽Gentiana macrophylla Pall.、麻花秦艽G.straminea Maxim.、粗茎秦艽G.crassicaulis Duthie et Burk.或小秦艽G.dahurica Fisch.的根[1],其主要有效成分为龙胆苦苷.龙胆苦苷是裂环环烯醚萜苷类成分,由于受缩醛结构的影响,在药材中的量会受不同加工炮制条件的影响[2].本实验考察了不同炮制品中龙胆苦苷的量,为秦艽的加工炮制和合理利用提供了理论基础.
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秦艽及其伪品的比较鉴别
秦艽为常用中药,我国九五版药典收载秦艽为龙胆科植物:1)秦艽Gentiana macrophylla Pall.,2)麻花秦艽G.straminea Maxim.,3)粗茎秦艽G.crassiculis Duthie ex Burk.,4)小秦艽 G.dahurica Fisch.的干燥根.
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西北秦艽
秦艽又名麻花艽、西秦艽与辫子艽，为龙胆科多年生草本植物秦艽、粗茎秦艽、麻花秦艽和达乌里秦艽的根，分布于东北、华北、西北及四川等地，而甘肃与青海二省是我国秦艽的主要产区，其中青海省黄南州、果洛、玉树所产的秦艽为地道。
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党参与秦艽的生药学鉴别
中药秦艽为龙胆科植物秦艽、麻花秦艽、粗茎秦艽或小秦艽的干燥根.具有祛风湿,清湿热,止痹痛的功效.党参为桔梗科植物党参、素花党参或川党参的干燥根.具有补中益气,健脾益肺等功效.秦艽为国家三级保护药用植物,量少价升.而个头较小的党参及其支根外观性状与小秦艽有相似之处,容易混淆.而二者功效完全不同,不能互混.本文从植物形态、性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别、薄层色谱、紫外光谱等方面,对党参和秦艽的特征进行研究,提高警惕,以防混淆.
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Box-Benhnken响应面法优化麻花秦艽超声提取工艺
目的 采用Box-Benhnken响应面法优化麻花秦艽超声提取工艺.方法 以龙胆苦苷和落干酸含有量为评价指标,提取时间、提取次数和超声功率为影响因素,在单因素试验基础上,Box-Benhnkert响应面法优化提取工艺.结果 佳条件为提取时间20 min,提取次数4次,超声频率85 kHz.结论 该方法准确可靠,可用于麻花秦艽超声提取.
关键词： 麻花秦艽 落干酸 龙胆苦苷 超声提取 Box-Benhnken响应面法 -
麻花秦艽中落干酸对照品的高效液相制备
目的 建立从麻花秦艽中快速分离高纯度落干酸的方法,用于制备麻花秦艽质量控制用对照品.方法 采用水煎提取,活性炭富集,制备高效液相分离纯化.制备液相采用GRACE Adsorbosphere C18色谱柱(22 mm×250 mm,10 μm),以甲醇-0.1％冰醋酸水溶液(8:92)为流动相,流速12 ml/min.制备柱柱后分流,分流比为1:5;UV检测,波长254 nm.部分收集器分部收集,按照色谱图回收高纯部分.结果 制备所得产品经UV,IR,1H- NMR,13C - NMR等光谱手段确证为落干酸.分析型高效液相分析,纯度大于99.0％.结论 该方法简单、高效、回收率较高,是从麻花秦艽中快速分离制备高纯度落干酸对照品的较好方法.
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秦艽水煎液对小鼠急性肝损伤肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-10表达的影响
目的 研究秦艽两个品种大叶秦艽和麻花秦艽水煎液对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护机制.方法 40只昆明种小鼠完全随机分成4组:空白组、模型组、大叶秦艽水煎液组、麻花秦艽水煎液组.空白组及模型组给予生理盐水灌胃(4 g/kg),药物组给予相应药物水煎液灌胃(4 g/kg),连续灌胃7 d后药物组与模型组采用10%四氯化碳花生油溶液(10 ml/kg)腹腔注射造成急性肝损伤模型24 h后采集全部血样,测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的含量.结果 药物组与模型组相比较,ALT与TNF-α水平降低(P<0.05),而IL-10表达的水平则升高(P<0.05),而药物组之间比较则没有显著性差异(P>0.05).结论 秦艽可增强四氯化碳损伤的肝组织中IL-10的表达, IL-10是介导秦艽保肝效应的重要细胞因子.而秦艽两个品种大叶秦艽和麻花秦艽在这一过程中产生的作用是没有差异的.
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具有抑菌活性的麻花秦艽内生细菌的分离鉴定
目的 分离获得的麻花秦艽Gentiana straminea Maxim内生细菌,研究具有抑菌活性的菌株,分析其次级代谢产物.方法 采用平板对峙法,筛选具有抑菌活性的内生细菌;扩增具有抑菌活性菌株的16S rRNA基因,结合形态和生理生化实验,鉴定相应菌株;采用高效液相色谱法(HPLC)对具有抑菌活性菌株的发酵产物进行初步检测.结果 从分离得到的10株内生细菌中,筛选得到2株对沙门氏菌、志贺氏菌和大肠杆菌具有拮抗作用的菌株(Q J3和QJ9).菌株QJ3归属于黄单胞菌属(Xanthomonas),在根、茎、叶、花中均有分布,占总分离内生细菌数量的59.47％,对沙门氏菌具有较强的抑菌作用,抑菌圈直径为15 mm;菌株QJ9为成团泛菌Pantoea agglomerans,仅在茎中分布,占总分离内生细菌数量的0.047％,对志贺氏菌的抑菌能力强,抑菌圈直径为16咖.通过对菌株QJ3和QJ9发酵液检测后发现,两株菌的次级代谢产物中均可能存在龙胆苦苷.结论 麻花秦艽具有丰富的内生细菌资源,在新型抑菌药物筛选的替代资源及活性物质的应用方面具有重要的潜力.
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一株产龙胆苦苷的麻花秦艽内生真菌的分离鉴定
目的 从药用植物麻花秦艽的根、茎和叶中分离出可产龙胆苦苷的内生真菌菌株,以寻找可替代植物的微生物资源,从而可以更好地保护野生麻花秦艽资源.方法 用PDA培养基,采用组织分离法从四川阿坝红原麻花秦艽的根、茎和叶中分离内生真菌,并通过高效液相色谱(HPLC)和液相色谱-质谱联用(LC-MS)对内生真菌的发酵产物进行检测.后用形态学和分子生物学手段对筛选出的内生真菌进行菌株鉴定.结果 从阿坝红原麻花秦艽的根、茎和叶中总共分离得到了10株内生真菌,其中的一株内生真菌G J-01的发酵液的正丁醇萃取物通过高效液相色谱(HPLC)和液相色谱-质谱联用(LC-MS)检测,结果表明其次级代谢产物中存在龙胆苦苷,含量为4.16mg/L.经形态学和分子生物学手段鉴定,确认内生真菌GJ-01为腐皮镰刀菌.结论 从阿坝红原麻花秦艽中分离得到了一株产龙胆苦苷的内生真菌GJ-01,可作为一种新的产龙胆苦苷的微生物资源.
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傅里叶变换红外光谱结合偏小二乘模式识别方法应用于藏药麻花秦艽真伪鉴别的研究
目的:采用傅里叶变换红外光谱技术,结合化学模式识别方法,对麻花秦艽及其伪品进行鉴别分析,为麻花秦艽的质量控制提供一种新的方法.方法:采集560个来自5个不同产地的麻花秦艽及其伪品黑秦艽、甘肃丹参的原始红外光谱图,并经过多元散射校正(MSC)和二阶导数(SD)处理后,用偏小二乘判别分析对其进行整体指纹信息判别.结果:采用的PLSDA判别分析方法,能准确成功地识别麻花秦艽及其伪品黑秦艽、甘肃丹参.结论:该法快速、准确,为客观评价中药材的真伪、产地归属、质量类别等提供了一种新的方法和手段,在中药材质量控制领域具有广阔的应用前景.
关键词： 麻花秦艽 傅里叶变换红外光谱法 模式识别 偏最小二乘判别法 -
藏药麻花秦艽化学成分研究
目的:研究麻花秦艽的化学成分.方法:利用微孔树脂柱、硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱和制备色谱等手段进行分离纯化,通过NMR、MS等波谱手段进行结构鉴定.结果:从麻花秦艽根中分离得到12个化合物,分别鉴定为:胡萝卜苷(1)、β-谷甾醇(2)、熊果酸(3)、獐牙菜苷(4)、獐牙菜苦苷(5)、龙胆苦苷(6)、6'-O-乙酰基-龙胆苦苷(7)、6'-O-β-D-吡喃葡萄糖基-獐牙菜苷(8)、原儿茶醛(9)、原儿茶酸(10)、没食子酸甲酯(11)、邻苯二甲酸二丁酯(12).结论:其中,化合物8 ～12为首次从麻花秦艽中分离得到.
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新疆四种秦艽中总生物碱含量的测定
秦艽是龙胆科(Gentianaceae)龙胆属(Gentiana)植物,具有祛风湿、退虚热、舒筋止痛的作用.用于治疗风湿性关节痛、结核病潮热、小儿疳热、黄疸、小便不利等症.秦艽的药用有效成分是生物碱.现已知有秦艽碱甲(Gentianine),秦艽碱乙(Gentianidine),秦艽碱丙(Gentianol)等多种生物碱.中国药典1995版一部收载的药材秦艽为龙胆科植物秦艽、麻花秦艽、粗茎秦艽和小秦艽的干燥根.新疆地区除秦艽、麻花秦艽和小秦艽外还有新疆秦艽(Gentiana walujewii Rgl.et Schmalh.)和天山秦艽(G.tianshanica Rupr.)也都作秦艽入药.笔者对新疆四种秦艽总生物碱含量进行了测定,现报道如下.
