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意大利牛舌草化学成分及药理作用研究进展
意大利牛舌草为紫草科牛舌草属多年生草本植物的地上部分，具有生湿生热、调节异常黑胆质等功效，用于心悸、失眠、神志不安、头痛、反应迟钝、大便秘结。现代药理学研究表明其具有抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、抗菌、中枢神经系统作用、内分泌作用等生物活性。意大利牛舌草化学成分包括甾体、挥发油、生物碱、鞣质、油脂、三萜、黄酮和多酚类化合物。本文通过查阅近期国内外相关文献，从化学成分和药理作用两方面对意大利牛舌草进行文献综述，以期为该属植物的进一步研究提供参考。
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意大利牛舌草与其易混淆品的鉴定
目的:研究建立意大利牛舌草及其易混淆品的鉴别方法,为意大利牛舌草的质量控制提供依据.方法:采集不同产地的意大利牛舌草及其混淆品,采用药材显微鉴别、薄层色谱鉴别和DNA分子鉴别方法,对意大利牛舌草及其混淆品进行鉴别研究.结果:意大利牛舌草与琉璃苣、倒提壶在显微、薄层色谱有较为明显的差异,DNA分子鉴定表明,意大利牛舌草及其混淆品的小种间K-2-P距离大于种内大K-2-P距离,邻接法(NJ)树中意大利牛舌草的样品聚为一支,琉璃苣、倒提壶混淆品分别表现出单系性,可明显区分开.结论:该文在对意大利牛舌草及混淆品的茎、粉末显微特征比较研究的基础上,采用药材显微鉴别、薄层色谱鉴别与DNA分子鉴定手段相结合的综合鉴别模式,确定了意大利牛舌草及其混淆品的鉴别要点,DNA分子鉴定技术对于意大利牛舌草及其混淆品的鉴别有较大的优势,该法专属性强、灵敏度高,是传统鉴别技术的重要补充,具有较大的潜力和应用前景.建议进一步提高和完善意大利牛舌草的质量标准,加强意大利牛舌草的质量控制.
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不同产地意大利牛舌草中芦丁和山奈酚的含量测定及其抗补体活性研究
目的:测定不同产地意大利牛舌草中芦丁和山奈酚的含量和其抗补体活性研究.方法:采用UPLC法,色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18(100mm×2.1 mm,1.7 μm);流动相为甲醇(A)-0.4％甲酸(B);洗脱程序(0 ～3 min,5％ ～31％ A;3～10 min,31％ ～37％ A;10～12 min,37％～40％A;12 ～ 30 min,40％～40％ A),柱温30℃;检测波长366 nm.通过溶血试验评价芦丁和山奈酚的抗补体活性.结果:意大利牛舌草中芦丁和山奈酚的含量分别在1.25-3.34 mg/g和2.86-6.05 mg/g范围内,且芦丁和山奈酚均具有较好的抗补体活性.结论:意大利牛舌草中2种主要活性成分的含量同地区之间差异较小,不同地区之间存在差异,且这两种成分均具有较好的抗补体活性.
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多指标综合评分法优选意大利牛舌草总黄酮的提取工艺
目的 优选意大利牛舌草总黄酮的提取工艺.方法 以总黄酮提取率、芦丁提取率及出膏率为考察指标,采用两种多指标综合评分法及L9(34)重复正交试验设计,优选意大利牛舌草回流提取法的工艺条件.结果 用于测定提取物中总黄酮含量与芦丁含量的测定方法均符合方法学要求.意大利牛舌草总黄酮回流提取法优选工艺条件为:料液比1∶20;提取温度100℃;乙醇体积分数75％;提取2次,每次2h.结论 验证试验表明优选出的提取工艺简便、合理、可行,为后续研究奠定了基础.
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HPLC双波长法同时测定意大利牛舌草中3种成分的含量
目的 建立同时测定意大利牛舌草中咖啡酸、芦丁和紫云英苷含量的HPLC法.方法 采用πNAP COSMOSIL C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈(A)-2 mL·L-1磷酸(B)为流动相,进行梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1;柱温:30℃;紫云英苷、咖啡酸和芦丁的检测波长分别为266,341和341 nm.结果 咖啡酸、芦丁和紫云英苷分别在0.3488～22.32(r=0.9999),1.813～116.0(r=0.9999)和0.2413～15.44μg·m L-1(r=0.9998)范围内质量浓度与峰面积线性关系良好,平均回收率分别为99.6％(RSD=1.28％),101.1％(RSD=0.66％)和99.8％(RSD=3.75％).3批意大利牛舌草样品中咖啡酸、芦丁和紫云英苷的平均含量分别为84.27±2.19,720.77±62.85和63.63±4.33μg·g-1.结论 该方法操作简便、重复性好、准确度高,为意大利牛舌草的质量控制提供了实验依据.
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意大利牛舌草抗氧化及抗血栓作用研究
目的 研究意大利牛舌草水、乙醇提取物抗氧化及抗血栓的作用.方法 将意大利牛舌草粉碎成粗粉,分别用蒸馏水和70％乙醇提取,得到意大利牛舌草水提取物和乙醇提取物.选取健康昆明小鼠70只,随机分为7组(n=10),正常对照组给予等体积蒸馏水,意大利牛舌草水提物高(678.40 mg/kg)、中(339.20 mg/kg)、低剂量组(169.60 mg/kg),意大利牛舌草乙醇提物高(409.50 mg/kg)、中(204.75 mg/kg)、低剂量组(102.38 mg/kg),各组小鼠每天灌胃给药1次,连续灌胃21 d,按试剂盒方法说明书测定小鼠血清中的SOD、MDA、GSH-PX含量.测定意大利牛舌草水、乙醇提取物对正常小鼠凝血时间、止血时间及对正常大鼠动脉血栓形成的作用.结果 与正常对照组比较,意大利牛舌草乙醇提物高剂量组小鼠血清中SOD、GSH-PX活性升高,MDA含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);意大利牛舌草乙醇提物中剂量和低剂量组小鼠血清中SOD、GSH-PX活性升高,MDA含量降低,差异有统计学意义(P<0.05);意大利牛舌草水提物各剂量组小鼠血清中SOD、GSH-PX活性升高,MDA含量降低,差异无统计学意义(P>0.05).意大利牛舌草乙醇提物(204.75 mg/kg)和水提物(339.20 mg/kg)均可延长正常小鼠的凝血时间,意大利牛舌草乙醇提物(141.75 mg/kg)和水提物(234.83 mg/kg)均可降低大鼠血栓湿重,血栓抑制率分别为42.76％、36.68％.结论 意大利牛舌草乙醇提取物具有抗氧化作用,意大利牛舌草水、乙醇提取物可以延长凝血时间,防止血栓的形成.
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意大利牛舌草提取物对大鼠离体胸主动脉环的舒张作用
目的 研究意大利牛舌草提取物对大鼠离体胸主动脉的舒张作用.方法 将意大利牛舌草粉碎成粗粉,70％乙醇超声提取3次,浓缩提取液.处死大鼠,分离胸主动脉,制作血管环,分别设置内皮完整组和内皮去除组,2组累积加药法记录牛舌草提取物溶液(1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0 mg/mL)对去甲肾上腺素(PE)预收缩的胸主动脉环的张力的影响,测定血管舒张率.结果 牛舌草对大鼠内皮完整组和内皮去除组的胸主动脉环均具有浓度依赖性的舒张作用,内皮完整组和内皮去除组的Emax分别为(93.82％±5.35％)和(91.54％±5.00％),2组舒张作用效果相比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 牛舌草对大鼠胸主动脉环具有剂量依赖性舒张血管的作用,其舒张血管作用与血管上的内皮细胞无依赖作用.
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意大利牛舌草不同极性溶剂萃取物对大鼠缺氧/复氧心肌细胞氧化应激损伤作用的研究
目的 研究意大利牛舌草(Anchusa italica Retz)不同极性溶剂萃取物对大鼠对缺氧/复氧心肌细胞(myocardial cells,MCs)氧化应激损伤保护作用的影响.方法 模拟缺血再灌注损伤,建立体外培养心肌细胞缺氧/复氧模型,分为 12 组,正常对照组,缺氧/复氧模型组,阳性对照组,处理组包括:高、中、低剂量乙酸乙酯萃取物+缺氧/复氧模型组;高、中、低剂量正丁醇萃取物+缺氧/复氧模型组;高、中、低剂量水萃取物+缺氧/复氧模型组.采用 MTT法测定心肌细胞存活率;酶标仪检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平及细胞内的丙二醛(MDA)含量和细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活力.结果 与缺氧/复氧模型组比较,意大利牛舌草乙酸乙酯萃取物高剂量组、正丁醇萃取物高剂量组、水萃取物高剂量组心肌细胞存活率升高,LDH 水平及 MDA含量降低,SOD活力提高,差异有统计学意义(P ＜0.01).结论 意大利牛舌草乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、水萃取物对缺氧/复氧心肌细胞的损伤具有保护作用,其机制可能与平衡氧化应激产物和抗氧化应激的酶系统有关.
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一测多评法测定大鼠肠温孵液中意大利牛舌草4种成分的含量
目的 建立大鼠肠温孵液中意大利牛舌草4种成分(芦丁、山奈酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷、迷迭香酸)的一测多评方法(Quantitative Analysis of Multi-components by Single-marker,QAMS).方法 采用聚酰胺柱色谱对意大利牛舌草粗提物进行纯化.建立同时测定大鼠肠温孵液中意大利牛舌草提取物主要成分芦丁、山奈酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷、迷迭香酸的高效液相色谱定量分析方法.以芦丁为内参物,测定大鼠肠温孵液中意大利牛舌草提取物主要成分芦丁与山奈酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷、迷迭香酸的相对校正因子(Relative Correction Factor,RCF),利用RCF进行含量计算(计算值),并与外标法(External Standard Method,ESM)的测定结果(实测值)进行比较,对该方法进行可行性验证.结果 采用ESM法测定8个批次的大鼠肠温孵液中意大利牛舌草提取物主要成分芦丁、山奈酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷、迷迭香酸的平均含量分别为14.20、15.88、9.80、66.90 mg/g.在线性范围内,芦丁与山奈酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷、迷迭香酸的RCF分别为0.983、1.101、0.843(RSD值均＜2％).利用RCF计算得山奈酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷、迷迭香酸的平均含量分别为15.67、9.87、67.44 mg/g,两种方法的含量测定结果基本一致(相对偏差均＜2％).结论 一测多评法简便、准确、可行,可用于大鼠肠温孵液中意大利牛舌草提取物山奈酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷、迷迭香酸的含量测定.
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意大利牛舌草乙醇提取物抗缺氧／复氧心肌细胞氧化应激损伤的研究
目的：研究意大利牛舌草（Anchusaitalica Retz）乙醇提取物的预处理对缺氧／复氧心肌细胞氧化应激损伤的影响。方法建立缺氧／复氧体外小鼠原代心肌细胞模型以模拟缺血再灌注损伤。实验分为6组：正常对照组、缺氧／复氧组、阳性对照组（缺氧／复氧＋1．25 mg／mL 葛根素）、低剂量乙醇提取物处理组（缺氧／复氧＋1．25 mg／mL 意大利牛舌草乙醇提取物）、中剂量乙醇提取物处理组（缺氧／复氧＋2．50 mg／mL 意大利牛舌草乙醇提取物）、高剂量乙醇提取物处理组（缺氧／复氧＋5．00 mg／mL 意大利牛舌草乙醇提取物）。采用 MTT 法检测原代心肌细胞存活率，采用酶标法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）水平、细胞内的丙二醛（MDA）含量和细胞内超氧化物歧化酶（SOD）的活力。结果与正常对照组比较，缺氧／复氧组呈现时间依赖性地降低原代心肌细胞存活率，差异有统计学意义（P ＜0．01）；与缺氧／复氧组比较，乙醇提取物处理组、阳性对照组 LDH、MDA 含量降低，SOD 活力提高，差异有统计学意义（P ＜0．01或 P ＜0．05）。结论意大利牛舌草乙醇提取物可能通过干预平衡氧化应激产物的生成和抗氧化应激的酶系统来减少缺氧／复氧所致原代心肌细胞氧化应激损伤。
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意大利牛舌草中芦丁的分离及定量分析研究
目的：确定意大利牛舌草中芦丁的分离方法并建立用于测定意大利牛舌草中芦丁含量的 HPLC方法。方法采用硅胶柱色谱对意大利牛舌草乙酸乙酯萃取物进行分离纯化。建立测定意大利牛舌草中芦丁含量的反相高效液相色谱法，色谱条件：色谱柱Kromasil C18（5μm，250 mm×4．6 mm）；以乙腈-0．2％磷酸水溶液进行线性梯度洗脱：0～9 min 83％～80％ B，9～20 min 80％～68％ B，20～40 min 68％～40％ B，40～45 min 40％～83％；流速1．0 mL／min；检测波长354 nm，柱温30℃。结果通过分离鉴定在意大利牛舌草乙酸乙酯萃取物中得到单体化合物1，1 H-NMR与13 C-NMR结果提示其化合物1为芦丁。在1．64×10－3～5．255×10－2 mL／min范围内芦丁浓度与其峰面积呈良好的线性关系（r ＝0．9997），且不同批次的意大利牛舌草中的芦丁含量低，为（1．2997±0．0141）mg／g。结论首次从意大利牛舌草中分离得到芦丁，所建立的用于测定芦丁含量的 HPLC法简便、准确，重现性好，结果准确可靠，为提高意大利牛舌草的质量标准奠定了试验基础。
