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芹菜素改善肥胖型2型糖尿病小鼠胰岛素抵抗的实验研究
[目的]考察芹菜素对肥胖型2型糖尿病小鼠模型(db/db小鼠)精、脂代谢和胰岛素抵抗的影响.[方法]12只db/db小鼠分正常饮食对照组(6只),芹菜素组(6只,每天灌服200 mg/kg芹菜素),并以db/db小鼠的标准对照(C57BL/KsJ小鼠,6只)为正常对照,实验共8周,观察体重、血糖、血脂水平、胰岛素敏感性及葡萄糖负荷后胰岛素水平的变化,并取内脏脂肪行H＆E染色后进行组织学观察.[结果]芹菜素干预可显著防止db/db小鼠体重的增加,降低肥胖小鼠的空腹血糖水平,增加胰岛素敏感性,降低葡萄糖负荷后的胰岛素水平,与db/db对照组比较,差异有显著性(P＜0.05).[结论]芹菜素可防止肥胖型2型糖尿病小鼠的体重增加,改善糖、脂代谢及胰岛素抵抗.
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CUEDC2在糖尿病肾病小鼠肾脏中表达及其与24h尿白蛋白、血肌酐的相关性
目的:研究CUEDC2在糖尿病肾病小鼠肾脏中的表达、定位及与肾功能相关性.方法:选用db/db小鼠为实验组,db/m小鼠为对照组,相同饲养条件下,24周时取组织样本;采用PAS,HE及Masson染色观察肾脏病理改变;Western Blot,免疫组织化学法,Real time PCR检测肾组织CUEDC2的表达、定位;由本院检验科测定血肌酐、24 h尿白蛋白.结果:CUEDC2蛋白表达定位于肾小管上皮细胞中.24周时,db/db小鼠出现肾小球硬化,肾间质增宽、炎症细胞浸润;较同期db/m小鼠,系膜基质明显扩张,肾小球及肾小管间质胶原染色增多,肾组织CUEDC2蛋白及mRNA均下调(P＜0.05).db/db小鼠肾脏中CUEDC2含量分别与24 h尿白蛋白与血肌酐呈明显负相关(P＜0.05).结论:CUEDC2在糖尿病小鼠肾脏中下调,并与尿白蛋白、血肌酐含量呈负相关.
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厄贝沙坦对db/db糖尿病小鼠血糖的影响
目的:观察厄贝沙坦治疗能否对db/db糖尿病小鼠的高血糖状态具有改善作用.方法:4周龄的db/db小鼠分为对照组(生理盐水)和厄贝沙坦[10 mg/(kg·d)]治疗组.于每周监测各组小鼠的体重及随机血糖,并于第8周末行腹腔糖耐量试验(IPGTT),分别测定各组小鼠0、30、60及120 min血糖及血浆胰岛素水平.结果:在厄贝沙坦治疗8周后治疗组与对照组相比,体重无明显差异,随机血糖无明显改善,IPGTT试验结果与对照组差异无统计学意义.结论:厄贝沙坦对改善db/db糖尿病小鼠糖代谢疗效不明显,同时不能明显改善db/db小鼠的糖耐量.
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NNC 55-0396对db/db小鼠的降糖作用及其机制
目的 探讨NNC 55-0396对db/db糖尿病小鼠的降糖作用及其机制.方法 取8周龄雄性野生型非糖尿病小鼠及db/db糖尿病鼠各12只,分别按随机数字表法为2组,共4组:野生安慰剂组、野生NNC干预组、db/db安慰剂组及db/db NNC干预组(n=6).NNC干预组均予30 mg/(kg·d)剂量NNC 55-0396腹腔注射,安慰剂组予等体积生理盐水腹腔注射,干预1周；比较实验动物药物干预前后血糖、体质量、胰岛素及总胆固醇的变化水平,并用免疫组织化学法及Western blot检测T型钙通道特异性亚基Cav3.1及Cav3.2表达水平.结果 ①与db/db安慰剂组比较,db/db NNC干预组空腹血糖水平显著下降(P＜0.01),而野生安慰剂组和野生NNC干预组之间差异无统计学意义(P＞0.05)；②与db/db安慰剂组比较,db/db NNC干预组体质量、胰岛素及胆固醇水平均明显降低(P＜0.05)；③NNC 55-0396显著下调db/db糖尿病鼠Cav3.1及Cav3.2在肝脏及脑组织中的蛋白表达水平(P＜0.05).结论 NNC 55-0396通过调节小鼠体内钙离子水平产生降血糖作用.
关键词： 糖尿病 NNC 55-0396 db/db小鼠 血糖 -
微粉化四氢姜黄素对自发性2型糖尿病db/db小鼠的作用研究
目的:观察微粉化四氢姜黄素(THC)对2型糖尿病动物模型db/db小鼠糖脂代谢及胰腺相关蛋白表达影响并探讨其可能的作用机制.方法:采用db/db 2型糖尿病小鼠模型,灌胃给予微粉化四氢姜黄素6周,观察小鼠一般情况、称量体重,测定血糖、血脂、胰岛素、肝脏脏器指数等相关指标;光镜下观察肝脏、胰腺组织HE染色病理形态变化;免疫组化法测定胰腺组织胰岛素、胰高血糖素样肽1(GLP-1)表达.结果:与模型组比较,给药第6周,微粉化四氢姜黄素100mg/kg、200mg/kg剂量组血糖、TG显著降低;微粉化四氢姜黄素100mg/kg剂量组肝脏指数明显降低,微粉化四氢姜黄素200mg/kg剂量组肝脏指数有降低趋势;微粉化四氢姜黄素100mg/kg剂量组血清胰岛素升高,微粉化四氢姜黄素100mg/kg、200mg/kg剂量组胰腺组织结构及分叶较清楚,胰岛结构紊乱程度及胰岛细胞数量增加、细胞显肥大均有所改善;肝脏组织结构紊乱程度减轻,肝细胞体积明显增大、胞浆显著疏松及空泡样变性均有改善;胰岛素阳性产物呈浅棕褐色或棕褐色,位于胰岛细胞胞浆内,排列较紧密,阳性产物染色显著增强;GLP-1阳性产物呈浅棕褐色或棕褐色,主要散在分布于胰岛周边细胞胞浆内,阳性产物染色细胞明显增多.结论:微粉化四氢姜黄素灌胃给药可改善db/db小鼠糖脂代谢异常,提高GLP-1含量,促进或者维持胰岛素分泌;其作用机制可能是微粉化四氢姜黄素能够提高GLP-1蛋白的表达,对保护胰岛B细胞有保护作用.
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红芪多糖对早期糖尿病肾病db/db小鼠肾组织中MMP-2及TIMP-1 mRNA和蛋白表达的影响
目的:通过研究红芪多糖对早期糖尿病肾病(DN) db/db小鼠肾组织中基质金属蛋白酶2(MMP-2)及基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)表达的影响,探讨HPS延缓早期DN进展的作用机制.方法:50只SPF级雄性db/db糖尿病肾病模型小鼠用随机数字表法分为5组:红芪多糖200、100、50 mg/kg剂量组、替米沙坦组(5 mg/kg)和模型组(等体积0.9％),每组10只;10只雄性db/m小鼠,作为正常对照组,给予等体积0.9％ NS灌胃.所有小鼠在6周龄开始进入实验,连续灌胃8周,于治疗前及治疗后每2周检测血糖浓度,第4周末及第8周末收集小鼠24h尿液,ELISA法检测24h尿微量白蛋白水平.第8周末框后静脉取血,血清用于检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN).处死小鼠,剥离肾脏,左肾皮质用于RT-PCR、Westernblotting检测肾组织MMP-2及TIMP-1 mRNA和蛋白的表达量.结果:与正常组比较,模型组小鼠血糖、血脂、Scr、BUN和24h尿微量白蛋白水平显著升高;MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平显著下降,TIMP-1mRNA和蛋白的表达水平明显升高.与模型组比较,各治疗组血糖数值均有所下降,但无统计学意义;除红芪多糖50mg/kg剂量组外,其余各治疗组小鼠血脂、Scr、BUN和24h尿微量白蛋白水平均明显下降;MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平明显升高,TIMP-1 mRNA和蛋白的表达水平明显降低,以红芪多糖100mg/kg剂量组疗效为明显.结论:红芪多糖能够防治db/db小鼠早期DN,其机制可能与红芪多糖抑制TIMP-1并上调MMP-2 mRNA和蛋白在肾脏的表达水平有关.
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红芪多糖对db/db小鼠糖尿病心肌病心肌组织TGF-β1与Ⅰ型胶原蛋白表达的影响
目的:通过研究红芪多糖对db/db小鼠糖尿病心肌病心肌组织中TGF-β1与Collagen Ⅰ表达的影响,探讨其对db/db小鼠心肌纤维化的作用.方法:将60只6周龄雄性db/db小鼠随机分为5纽:模型组、红芪多糖200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg剂量组和罗格列酮4mg/kg组;正常组为12只同周龄同背景的非转基因雄性db/m小鼠.连续灌胃干预8周,于给药前及给药后第2、4、6、8周末检测各组小鼠空腹血糖及体重;Masson染色观察小鼠左心室心肌胶原纤维化程度;Western blot、RT-PCR法检测心肌组织TGF-β1与Collagen Ⅰ的蛋白和mRNA表达.结果:干预治疗8周后,红芪多糖200mg/kg、100mg/kg剂量组和罗格列酮4mg/kg组血糖较模型组明显下降;Masson染色可见亮绿色胶原纤维在模型组心肌细胞间及血管周围较正常组明显增多且呈堆积状分布;模型组TGF-β1与Collagen Ⅰ蛋白及mRNA表达水平与红芪多糖50mg/kg剂量组无显著差异,其余各治疗组较模型组明显降低,其中红芪多糖200mg/kg剂量组和罗格列酮4mg/kg组改善更明显.结论:红芪多糖对db/db小鼠心肌纤维化具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制TGF-β1的异常表达而降低Collagen Ⅰ降解实现的.
关键词： 红芪多糖 糖尿病心肌病 TGF-β1 collagen Ⅰ db/db小鼠 -
益气活血通络方对db/db小鼠胰腺组织JNK信号通路及IL-1β、TNF-α表达的影响
目的:观察益气活血通络方对db/db小鼠胰腺组织c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路及炎症因子表达的影响,探讨益气活血通络方对胰岛细胞炎性损伤的保护作用及其机制.方法:用自发性2型糖尿病C57 BL/KsJ-db/db小鼠为动物模型,将db/db小鼠随机分成模型组、硫辛酸组(0.078g/kg)、益气活血通络方6.4、3.2、1.6g/kg剂量组,另取10只db/m小鼠为正常对照组,连续灌胃给药8周,模型组给予生理盐水.药前、药后4周和8周测定小鼠血糖.实验结束后,摘取胰腺组织,HE染色法观察病理变化,ELISA法检测小鼠胰腺组织胰岛素含量,Western bloting与免疫组织化学法检测IL-1β、TNF-α、JNK、p-JNK蛋白的表达.结果:与正常组比较,模型组胰岛细胞出现严重的病理性损伤,药后4周和8周血糖、胰腺组织中IL-1β、TNF-α、P-JNK蛋白的表达水平明显高于正常组;与模型组比较,益气活血通络方组胰岛细胞病理损伤程度减轻,血糖降低,胰腺组织胰岛素含量升高,胰腺组织IL-1β、TNF-α、P-JNK蛋白表达水平显著下降.结论:益气活血通络方能够减轻db/db小鼠胰岛细胞损伤,可能与降低炎症因子表达,抑制JNK信号通路过度激活有关.
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肝X受体激动剂对db/db鼠肾脏肝X受体表达及其活性的影响
目的 探讨肝X受体(LXR)激动剂T0901317对db/db小鼠肾脏肝X受体表达水平及其活性的影响.方法 将8周龄雄性db/db小鼠分为db/db组和db/db+T0901317组(均n=7),同时以同龄同性别野生型C57BL/6小鼠为对照组(n=7).对照组和 db/db 组小鼠胃饲生理盐水 (50 μl /只/天 × 7), db/db + T0901317组小鼠胃饲 T0901317 [12.5 mg/(kg·d)×7];4周后RT-PCR检测肾组织ABCA1 mRNA水平;Western blot检测上述各组小鼠肾组织LXRα、LXRβ蛋白表达水平.结果 与对照组相比,db/db组LXRα蛋白表达量、ABCA1 mRNA表达水平明显下调(P<0.05);与db/db组相比,db/db+T0901317组上述指标表达上调(P<0.05);与db/db组相比,T0901317组LXRβ蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),而对照组LXRβ蛋白下调(P<0.05).结论 LXR可能通过激活LXRα进而上调ABCA1以减轻糖尿病引起的肾脏炎症性损害,为拮抗糖尿病所致的肾脏炎症性损伤提供新的理论依据.
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利用HRM技术鉴定db/db小鼠基因型方法的建立
目的:利用高分辨率熔解曲线(high resolution mmelting,HRM)技术,建立一种快速鉴定db/db小鼠基因型的方法.方法:以鼠尾组织为实验材料,采用改良法提取小鼠基因组DNA;在突变位点的上游和下游设计引物,用PCR-HRM法区分db/db子代小鼠三种基因型,并通过对反应条件的不断优化(扩增反应温度、体系等),建立成熟稳定的HRM分型方法,进一步通过DNA测序法对分型结果的准确性进行验证.结果:优化后的HRM法能够准确地分辨出三种基因型,分型结果与DNA测序法结果高度一致,且分型结果与小鼠表型所体现出来的疾病状态一致,说明HRM法准确度高,稳定性好.结论:建立的PCR-HRM分型方法是一种快速、简便、准确度高的技术,适用于大批量db/db子代小鼠基因型的检测.
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红芪多糖对db/db小鼠视网膜血管内皮生长因子表达的影响
目的 探讨红芪多糖(HPS)对db/db小鼠视网膜血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 50只db/db小鼠随机分为糖尿病模型组,依那普利组,HPS 200 mg/kg组、100 mg/kg组、50 mg/kg组,每组10只.同品系非糖尿病db/m小鼠10只为正常对照组.HPS各剂量组分别给予HPS 200,100,50 mg/kg,1次/d;依那普利10 mg/kg,1次/d;糖尿病模型组和正常对照组给予等剂量生理盐水,1次/d.灌胃给药8周,观察一般情况.采用实时定量荧光聚合酶链反应检测视网膜VEGFmRNA的相对表达量,免疫组织化学法观察小鼠视网膜VEGF蛋白的表达水平.结果 正常对照组小鼠视网膜VEGF免疫阳性反应主要见于神经节细胞层及内丛状层,内核层少有表达.HPS各剂量组、依那普利组和糖尿病模型组小鼠视网膜VEGF表达阳性反应增强,视网膜各层细胞的胞质中均可见棕色的阳性颗粒,阳性反应部位主要位于神经节细胞层、内核层及内外丛状层.与正常对照组小鼠比较,糖尿病模型组小鼠视网膜VEGF蛋白表达和VEGFmRNA相对表达量均升高(P＜0.01).经HPS干预后,HPS各剂量组VEGF蛋白表达和VEGFmRNA相对表达量均低于糖尿病模型组(P＜0.01).结论 HPS可有效抑制db/db小鼠视网膜VEGF基因表达和蛋白合成,这可能是其治疗糖尿病视网膜病变的机制之一.
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自发性2型糖尿病模型db/db小鼠生物学特性研究
目的 对db/db小鼠进行生物学特性研究,满足糖尿病研究的需要.方法 在试验周期内,测定db/db小鼠的空腹血糖、体质量及摄食饮水量,并测定21周龄模型动物的糖耐量、血中胰岛素、胰高血糖素、三酰甘油、总胆固醇等指标的水平,进行胰腺的免疫组化双重染色及主要脏器的病理学检查,并与db/m小鼠进行比较.结果 与对照组db/m小鼠比较,db/db小鼠过度肥胖,伴有高血糖、胰岛素抵抗、脂质代谢紊乱,且肝脏和胰腺组织均出现明显病变,胰腺免疫组化双重染色结果与血液学测定结果一致,并可观察到胰岛中A细胞和B细胞的分布变化情况.结论 对自发性2型糖尿病模型db/db小鼠所做的相关生物学特性检测,可供糖尿病研究参考.
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基因缺陷型2型糖尿病模型动物db/db小鼠早期生物学特性研究
目的 研究基因缺陷型2型糖尿病模型动物db/db小鼠的早期生物学特性,为db/db小鼠应用于降糖药物的研究奠定基础.方法 采用db/db小鼠为模型组动物,db/m小鼠为对照组动物,测定两组小鼠的体质量、食量、饮水量、空腹血糖、正常饮食血糖、糖耐量、胰岛素耐量；于第14周眼底静脉丛取血,分离血清,测定糖化血清蛋白(GSP)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC);取肝、胰腺、腹部脂肪等主要脏器组织进行组织病理学检查.结果 与对照组比较,db/db小鼠体质量、食量、饮水量显著增加;空腹血糖及正常饮食血糖显著升高,整个实验期血糖水平稳定;糖耐量异常、胰岛素耐量异常,对外源胰岛素敏感性显著降低；血清GSP、TG、TC含量显著升高,腹部脂肪质量显著增加,肝组织不同程度的空泡变性,脂肪组织中脂肪细胞体积增大,胰腺中胰岛细胞胞浆减少、血管扩张.结论 db/db小鼠早期脂质代谢紊乱,血糖、血脂显著升高,糖耐量及胰岛素耐量异常,血糖水平稳定,是研究2型糖尿病较为理想的模型.
