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风湿宁胶囊治疗类风湿关节炎机制的研究
目的 观察风湿宁胶囊(FSN)对类风湿关节炎(风寒湿痹型)新西兰大白兔血清和关节滑液中白细胞介素IL-6、IL-17、IL-4、IL-10水平的影响,探讨其治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的可能机制.方法 雄性新西兰大白兔120只随机分为正常组、模型组、甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)组、风湿宁胶囊低剂量组、风湿宁胶囊中剂量组、风湿宁胶囊高剂量组,每组20只.除正常组外,其他组均制备RA风寒湿痹动物模型.治疗组分别给予风湿宁胶囊溶液、甲氨蝶呤悬浮液,正常对照组灌生理盐水.用药7天后用酶联免疫法测定各组血清及关节滑液中IL-6、IL-17、IL-4、IL-10的水平.结果 FSN 中、高剂量组和MTX治疗组血清及关节滑液的IL-6、IL-17较模型组明显降低(P＜0.05),而FSN低剂量组IL-6、IL-17水平的下降不明显(P＞0.05).FSN 各剂量组和MTX组中IL-4、IL-10水平较模型组均升高,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 风湿宁胶囊不仅能下调新西兰RA大白兔血清及关节滑液中过高的IL-6、IL-17水平,而且能上调血清及关节滑液中IL-4、IL-10的水平,提示风湿宁胶囊治疗RA的机制可能是通过平衡促炎因子和抗炎因子的效应进而散寒通络,降低关节滑膜炎症,缓解临床症状.
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风湿宁胶囊对类风湿关节炎大鼠Th17/Treg 平衡和局部炎性因子的影响
目的：通过观察风湿宁胶囊（FSN）对类风湿关节炎大鼠外周血Th17/Treg平衡和对关节腔滑液中炎性细胞因子的影响，进一步探讨其治疗类风湿关节炎（RA）的作用机制。方法：制备II型胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠模型，采用流式细胞学检测方法观察风湿宁胶囊对CIA模型大鼠外周血辅助性T细胞亚群中Th17（IL-17+CD4+）细胞水平和调节性T细胞（CD4+CD25+Treg细胞）平衡状态的影响，并采用流式多重液相芯片技术检测CIA模型大鼠关节腔滑液中炎性细胞因子（TNF-α、IL-6、IL-17A、IL-4、IL-10）的含量，同时与正常大鼠、CIA模型大鼠和雷公藤多苷片（TPT）治疗大鼠比较。结果：与模型组比较， FSN中、高剂量组大鼠Th17细胞比率明显降低（P<0.05），各治疗组调节性T细胞比率有上调趋势，但差异不显著（P>0.05），各治疗组对Th17细胞和Treg细胞的影响与TPT组比较，均无显著性差异（P>0.05）；与模型组比较，FSN中、高剂量可明显降低大鼠关节滑液炎症因子TNF-α、IL-6、IL-17A水平（P<0.05），FSN各组对关节滑液IL-4、IL-10水平未见明显的上调作用（P>0.05），与TPT组比较，各治疗组对局部细胞因子IL-6、TNF-α、IL-17A、IL-4、IL-10的影响均无显著性差异（P>0.05）。结论：FSN能够明显降低外周Th17细胞比率，减少关节滑液炎症因子IL-6、TNF-α、IL-17A的分泌，但对外周Treg细胞比率和关节滑液中抗炎相关因子IL-4、IL-10的分泌无明显影响。风湿宁胶囊调节Th17细胞、改善机体免疫失衡状态、抑制滑膜细胞炎症介质过度分泌等作用可能是其治疗RA的重要机制。
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风湿宁胶囊的主要药效学研究
目的 通过经典的疼痛模型、非特异性炎症模型及免疫性炎症模型,观察风湿宁胶囊(以下简称"FSN")的镇痛及抗炎作用.方法 通过小鼠醋酸扭体实验观察FSN的镇痛作用;通过二甲苯致小鼠耳肿胀、醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性实验考察FSN的抗炎作用;制备II型胶原诱导的大鼠关节炎(CIA)模型,观察FSN对大鼠足肿胀度及关节炎症积分的影响,评价其对关节炎的治疗作用.结果 FSN低、中、高剂量组能明显减少醋酸所致的小鼠扭体次数(P＜0.05);FSN高剂量组能够明显降低二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀及腹腔毛细血管通透性增高(P＜0.05),减轻CIA大鼠原发足肿胀度(P＜0.05);FSN各治疗组均能够明显降低关节炎症积分(P＜0.05).结论 FSN具有良好的抗炎及镇痛作用,并对II型胶原诱导的类风湿关节炎有明显的治疗作用.
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风湿宁胶囊含药血清干预对CIA-FLS细胞增殖及凋亡的影响
目的:探讨风湿宁胶囊(FSN)含药血清干预对CIA-FLS细胞增殖及凋亡的影响.方法:采用CCK-8法检测各组血清干预24、48、72 h后对CIA-FLS细胞增殖状态的影响;采用Annexin V-FITC/PI双染法通过流式细胞仪观察各组血清干预48 h后对CIA-FLS细胞早期和晚期凋亡情况的影响.结果:CCK-8法结果表明,在24 h,FSN各浓度(20％、10％和5％)含药血清干预对CIA-FLS细胞的增殖无抑制作用;在48 h,20％ FSN含药血清和10％FSN含药血清干预对CIA-FLS细胞的增殖都表现出不同程度的抑制.在72 h,FSN各浓度(20％、10％和5％)含药血清对CIA-FLS细胞增殖均可见显著的抑制效果,其中20％风湿宁胶囊含药血清效果好.Annexin V-FITC/PI双染检测结果表明,风湿宁胶囊含药血清各浓度(20％、10％和5％)组都不同程度地提高了细胞总凋亡率,其中20％风湿宁胶囊含药血清组对CIA-FLS细胞凋亡促进作用强.结论:风湿宁胶囊含药血清对CIA-FLS细胞增殖的抑制及凋亡的促进可能是其治疗类风湿关节炎的机制之一.
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基于JAK2/STAT3信号通路探讨风湿宁胶囊对寒湿痹阻型类风湿关节炎的作用机制
目的:探讨风湿宁胶囊对寒湿痹阻型类风湿关节炎模型大鼠JAK2/STAT3信号通路的影响及作用机制.方法:SD大鼠按随机数字袁法分为正常组、模型组、tofacitinib组(15mg· kg-1)和风湿宁高、中、低剂量组(1.32,0.66,0.33 g· kg-1)每组各12只;除正常组外,其余各组大鼠均采用人工气候箱模拟寒湿环境结合Ⅱ型胶原诱导的方法制备寒湿痹阻型类风湿关节炎大鼠模型,造模成功后,各组大鼠灌胃给予相应药物进行干预,每日1次,连续28 d;观察药物对大鼠关节肿胀度、关节滑膜组织JAK2、STAT3及JAK2/STAT3通路负反馈抑制因子SOCS3的mRNA和蛋白表达情况.结果:风湿宁胶囊可显著降低寒湿痹阻型类风湿关节炎模型大鼠的关节肿胀度,抑制JAK2、STAT3 mRNA及蛋白的过表达,促进SOCS3 mRNA及蛋白表达.结论:风湿宁胶囊抑制JAK2/STAT3信号通路的过度激活作用是其治疗类风湿关节炎的重要机制之一.
关键词： 风湿宁胶囊 类风湿关节炎 寒湿痹阻 JAK2/STAT3信号通路 -
风湿宁胶囊对活性氧介导的T细胞活化和滑膜凋亡的影响
目的 研究细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平对胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠T细胞活化和滑膜细胞凋亡的影响,探讨风湿宁胶囊(FSN)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)治疗中的作用机制.方法 将60只大鼠随机分为正常对照组,CIA模型组,雷公藤多苷片组,FSN低、中、高剂量组[剂量分别为0.33、0.66、1.32 g/(kg ·d)],每组1 0只.采用流式细胞术检测T淋巴细胞亚群水平,ELISA法检测干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)含量,紫外分光光度法检测羟自由基水平,Western blot法检测滑膜天冬氨酸特异的半胱氨酸酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,Cas pase)-3、9蛋白表达.结果 与模型组比较,FSN各给药组均可升高ROS水平(P＜0.01),FSN中剂量组能够显著降低CD4+/C D8+水平(P＜0.01),FSN各组的IFN-γ含量明显降低(P＜0.01),FSN高剂量组的IL-4含量明显升高(P＜0.01).同时,FSN各给药组的Caspase-9、Caspase-3表达亦显著上升,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05);且FSN低、中剂量组Caspase-9蛋白平均灰度值显著高于雷公藤多苷组(P＜ 0.05,P＜0.01).结论 FSN调节CIA大鼠免疫功能亢进及抑制滑膜细胞增殖的机制可能与上调体内ROS水平有关.
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风湿宁胶囊对寒湿闭阻型类风湿关节炎模型大鼠作用机制研究
目的:观察风湿宁胶囊对类风湿关节炎(寒湿闭阻)大鼠的治疗作用及机制.方法:雄性SD大鼠72只,随机分为6组,每组12只,采用牛Ⅱ型胶原结合人工气候箱对SD大鼠造模,造模完成后对其进行灌胃给药,每日2次,连续28天,观察药物对大鼠关节容积、关节病理以及外周血中IL-1β、IFN-γ、IL-10、IL-4、IL-17a、TGF-β1等细胞因子的表达情况.结果:风湿宁胶囊可有效降低类风湿关节炎(寒湿闭阻)大鼠关节容积,显著减少滑膜组织中浸润的炎细胞及新生血管翳,明显调节外周血中炎性及抗炎因子的比例.结论:风温宁胶囊对类风湿关节炎(寒湿闭阻)大鼠关节炎症有明显的治疗作用,其机制可能与改善了炎性及抗炎因子失衡的比例有关.
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风湿宁胶囊的质量控制研究
目的:建立风湿宁胶囊的鉴别方法及含量测定方法.方法:鉴别采用薄层色谱法,含量测定采用高效液相色谱法.结果:独活、青风藤、血竭与肉桂的薄层鉴别图谱中,斑点清晰,阴性无干扰;血竭及青风藤的HPLC测定方法,血竭素线性范围0.116μg~0.581μg,Y=3×106X-13854(r=0.9996),平均回收率为100.86%,RSD为2.14%(n=6);青藤碱线性范围0.2μg~1.6μg,Y=18.13X-0.0055(r=0.9991),平均回收率为100.96%,RSD为2.34%(n=6).结论:鉴别及含量测定方法专属性强,重复性好,准确度高,可用于风湿宁胶囊的质量控制.
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HPLC测定风湿宁胶囊中阿魏酸的含量
风湿宁胶囊是由川芎、血竭、元胡等多味中药制成的复方成药,具有祛风散寒,除湿通络,活血止痛的功能,用于类风湿性关节炎,强直性脊柱炎,痛风性和风湿性及退行性关节炎等患者的治疗.
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风湿宁胶囊提取工艺研究
目的:优选风湿宁胶囊的提取工艺.方法:采用正交试验法,以芍药苷与龙胆苦苷的综合保留率为评价指标,确定合理的水提工艺.结果:佳水提工艺为加水提取2次,加水量分别为12倍量,10倍量,提取时间分别为1.5、1小时.结论:优选得到的工艺稳定可行.
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风湿宁胶囊的薄层色谱鉴别研究
目的:建立风湿宁胶囊的薄层色谱鉴别方法.方法:采用薄层色谱法鉴别方中的主要药味.结果:方中元胡、麻黄、青风藤等3味药的薄层色谱具有鉴别特征.结论:薄层色谱鉴别可作为风湿宁胶囊的质量控制指标.
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风湿宁胶囊对RA兔滑膜组织病理学的影响
目的:考察风湿宁胶囊对RA兔滑膜组织病理学的影响.方法:将RA兔分为5组:模型组、甲氨蝶呤阳性对照组及风湿宁胶囊低(0.40 g/kg)、中(0.80 g/kg)、高(1.20 g/kg)剂量组,20只/组,另设正常对照组.连续治疗14 d.记录各组兔的一般情况、关节炎外观、滑膜组织病理学改变及滑膜组织中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、细胞环亲素A(CypA)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果:模型组精神萎靡,活动明显减少,双后肢注射部位出现溃疡点,多处软组织损伤,个别有大面积溃烂.风湿宁组和甲氨蝶呤组的精神状态介于正常对照组和模型组.与正常对照组比较,模型组体质量显著降低,后肢膝关节直径、表面温度和炎积分显著增高(P＜0.05),风湿宁组后肢膝关节直径、表面温度和炎积分显著降低(P＜0.05),体质量有降低趋势,其作用呈剂量依赖性.模型组关节面粗糙,形成关节软骨的破坏,显微可见滑膜组织增生,大量浸润炎性细胞,血管较多.风湿宁组滑膜细胞增生、血管数目以及浸润单核及淋巴细胞可见不同程度地减少.与正常对照组比较,模型组滑膜组织中MMP-3、MMP-9、CypA、VEGF表达显著升高,风湿宁组滑膜组织中MMP-3、MMP-9、CypA、VEGF表达显著降低,其作用呈剂量依赖性.结论:风湿宁对RA具有一定疗效,能减少关节损害,对滑膜具有保护作用,其机制可能与降低膜组织中MMP-3、MMP-9、CypA及VEGF表达有关.
